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实时定量PCR（RT-qPCR）实验操作流程
RT-qPCR具体实验步骤 ? 引物设计： 除了遵循一般的引物设计原则外，需要注意产物长度应控制在80-150bp。 RNA 实验用的器具和仪器建议专门使用，不要用于其它实验。 这个产品合成的cDNA适用于嵌合法和探针法qPCR分析。 20 μl 反转录反应体系中，TB Green qPCR 法最多可使用 1 μg 的 Total RNA，探针 qPCR 分析法 最多可使用 2 μg 的 Total RNA。 在反转录反应中，TB Green qPCR 法的 RT Primer Mix 用量为 1 μl， 探针 qPCR分析法的用量为 4 μl。
87.8K3146发布于 2019-08-15 - 来自专栏R语言及实用科研软件
🤑 qPCRtools | 神仙R包分分钟搞定你的qPCR实验结果！~
1写在前面 不知道大家都是怎么完成qPCR的计算的，在不会R的时候，我是用一个祖传的Excel表进行计算的。 ) 8引用 如何引用： Li X, Wang Y, Li J, Mei X, Liu Y, Huang H. qPCRtools: An R package for qPCR
1.1K40编辑于 2023-02-24 - 来自专栏生命科学
熔解曲线与 Ct 值：评价 qPCR 实验是否成功的“隐形英雄”？ | MCE
在以往推文中，我们详细介绍了 PCR 实验的基础与进阶技巧，解答了许多实验中常见的问题及解决方案。今天，我们将深入探索 qPCR 的两位“隐形英雄”：熔解曲线和 Ct 值。 它们看似“低调”，却往往是分析实验结果的关键因素。让我们一同揭开它们的的神秘面纱，聊聊 qPCR 的那些事儿！Section.01qPCR 快速回顾qPCR 是什么? 图 3. qPCR 熔解曲线示意图。熔解曲线分析:你的熔解曲线是“好演员”还是“草台班子”?Section.05小结qPCR 实验中，Ct 值帮你量化基因表达，熔解曲线帮你验证特异性。 强强联合堪称 qPCR 实验成功的“黄金搭档”。所以，下次当你看到漂亮的 Ct 值和干净的熔解曲线时，不妨给自己点个赞！关注我们，带你玩转分子生物学的每一个细节，实验成功就是这么简单！ 欢迎留言分享，让我们一起成为 qPCR 实验的高手。参考文献：[1] Grace Adams. A beginner’s guide to RT-PCR, qPCR and RT-qPCR.
2K10编辑于 2025-04-08 - 来自专栏R语言___生物信息
qPCR数据分析
How do I publish qPCR data in a bar graph?
84920发布于 2018-06-19 - 来自专栏医学数据库百科
qPCR引物设计与评价
我们在做qPCR的时候首先需要的就是设计引物。设计引物的软件有很多的。而这次介绍的这两个 MRPrimerW2(http://mrprimerw2.com/)是一个用来设计引物的软件。 这样就可以进一步的选择最佳的引物进行预实验了。 我们需要做的就是把之前设计的引物放到这个下面的检索框里即可。至于哪个是正向哪个是反向，引物组合之间怎么组合。系统会把所有的排列组合都情况都算一遍。 引物设计完，最后还是需要实验验证。建议还是在设计的时候多设计几组通过实验再选择好的引物。 另外如果研究想要找到之前发表文献所用到的引物。可以试试primerbank。
1.2K40发布于 2020-08-27 - 来自专栏生命科学
MCE SYBR Green qPCR Master Mix | MedChemExpress
MCE SYBR Green qPCR Master Mix 极高的扩增效率和敏感性 高度的反应特异性 高度的重复性 高 GC 含量的 DNA 分子无需进一步调试 良好的仪器兼容性 MCE RT Master Mix for qPCR 操作简便快速 灵敏度高 热稳定性好 合成能力强 兼容性好：与 MCE SYBR Green qPCR Master Mix (HY-K0501、HY-K0521、HY-K0522
65040编辑于 2023-02-24 - 来自专栏生信宝典
一文读懂：PCR，qPCR，Real-time PCR，RT-PCR和RT-qPCR
PCR——实验室必备实验，从基因鉴定到信号通路验证，几乎每周都要做那么几次。 然而，各种PCR技术，包括PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR和dPCR，长得实在是太像了，好多同学看得头晕眼花也没弄明白这几种PCR有什么区别。 （2）实时荧光定量反转录PCR（Real-time RT-PCR，RT-qPCR） 实时荧光定量反转录PCR（Real-time RT-PCR，RT-qPCR）是qPCR和RT-PCR的组合，所以RT-qPCR （DOI: 10.1063/5.0021270） 总的来说，PCR、qPCR、RT-PCR和RT-qPCR这四种技术的主要区别在于它们的应用领域和检测目标不同。 PCR主要用于DNA序列的扩增和检测；qPCR可以实时定量检测DNA或cDNA的含量；RT-PCR主要用于RNA分子的扩增和检测；而RT-qPCR则结合了RT-PCR和qPCR的技术，可以对RNA分子进行定量分析
6.8K22编辑于 2024-01-23 - 来自专栏生信开发者
你所不知道的 qPCR应用
最近的新冠状病毒爆发，qPCR检测技术因其快速、灵敏度高、灵活方便等特点，在病毒检测过程中发挥了巨大的贡献。目前获批的COVID-19病毒检测试剂盒，有近半数的是qPCR检测类产品。 本人总结了qPCR技术的一些应用如下： 1. HIV/HBV/HPV/COVID-19 病毒筛查检测 2.
1.4K30发布于 2020-08-10 - 来自专栏生物信息学
在线功能富集分析与qPCR引物设计
这次主要介绍在线功能富集分析与qPCR引物设计。其中在线功能富集分析可利用本人所在课题组开发的agriGO和PlantGSEA在线分析工具，分别进行GO富集分析和基因集富集分析。 ? ? 2 qPCR引物设计 ? 目前有很多软件和在线工具可以进行引物设计。了解引物设计的原理和一些注意事项是设计好的引物的前提条件。常见的有ChIP-qPCR和qPCR引物设计。 针对qPCR引物设计，对引物的要求有： 设计引物尽量靠近3'端（保证扩增效率）尽量跨越内含子（检测基因组污染）引物长度最好在18-22bp产物长度保证在80-200bp间，最长可300bp两条引物 qPCR引物特异性验证 通过以上三种方法设计的引物，可利用NCBI blast辅助进行qPCR引物特异性验证。
3.3K20发布于 2020-04-14 - 来自专栏生命科学
RT Master Mix for qPCR—高效反转录试剂 | MedChemExpress
产品介绍MCE RT Master Mix for qPCR 含有反转录反应所需的所有组分，只需加入 RNA 模板和 H2O 即可快速高效完成反转录反应，反转录产物 cDNA 可直接用于 qPCR。 MCE RT Master Mix for qPCR (gDNA digester plus) 含 gDNA digester，有效去除 gDNA干扰，实现完美反转录。
52410编辑于 2023-02-15 - 来自专栏生命科学
SYBR Green qPCR Master Mix 试剂盒 | MedChemExpress
产品介绍Real-time Quantitative PCR Detecting System，简称qPCR MCE SYBR Green qPCR Master Mix是一种采用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行 Real Time PCR 的 2× 浓度的 Premix Type 试剂。 品牌优势完美曲线下图为使用MCE产品，与其他品牌产品的实验结果对比客户检验下图为客户在不同的组织/细胞样品中实测不同的基因表达量
80210编辑于 2023-01-13 - 来自专栏生命科学
核酸提取干货 - MedChemExpress
著有 “玄学” 之称的分子生物学，师兄师姐说小 M 要做的都是 “升级打怪入门级” 的实验，然而，实验记录本上清晰地罗列着自己整理的堪称完美的 (假装看懂的 Steps) 实验流程，可是完美的流程下，总是充斥着不丝滑的操作 那具体到实验中，我们该选择哪种提取方法呢？这就要看个人的实验设计方案及实验组的经费情况啦！磁珠法提取效果当然很好，但贵是真的贵，而且还得购买配套的磁力架，批量提取的话，还是不太建议的！ 纯化的病毒 DNA/RNA 可用于 PCR、RT-PCR、qPCR 等实验。 RNA 提取后续试验主要包括 PCR、RT-PCR、qPCR、cDNA 文库构建等，RNA 没提好，后面的实验问题也是连贯性的，一个不小心可就都 game over 了。 即我们需要明确下一步的实验，如果是 PCR，其实验本身对 RNA 的质量要求没有那么高，而 qPCR 对 RNA 的要求相对又高点，但如果要做 cDNA 文库构建，其对 RNA 的要求就很高了，因此 RNA
83623编辑于 2022-12-27 - 来自专栏百味科研芝士
你的pcr为什么定量不出来？
最近有很多同学私聊小编说，刚进入实验室开始科研，但qPCR结果却总是不理想，实验一直停滞不前，非常的苦恼。 记得我刚进实验室的时候，为了验证目标lncRNA在癌和癌旁的组织中有没有差异，闷着头做了两个月的qPCR。那么什么是qPCR呢，为什么有的同学结果总是不理想呢？ qPCR的应用（两个字：广泛！） 绝对定量：病原体检测，转基因动植物转基因拷贝数的检测... 相对定量：基因的表达差异，耐药研究... qPCR实验方法的选择 大家在查阅别人的实验文章时应该不难发现，目前实验室里常用的几种方法有SYBR Green I法、水解探针法（TaqMan法）等等。 是比较基础的实验，应用是非常广泛的。
2.1K40发布于 2019-11-18 数据分析：RT-qPCR分析及R语言绘图
样本的Ct值测定：接下来，对实验样本进行qRT-PCR，记录目标基因的Ct值。相对定量计算：利用标准曲线，根据样本的Ct值计算出样本中目标基因的相对浓度。 数据归一化：由于qRT-PCR可能会受到实验操作和样本制备的影响，因此需要使用一个或多个内参基因（通常是表达水平相对稳定的基因）来归一化数据，以消除这些潜在的变异。 GAPDH" # 内参基因名字 # control_group="6H NC" # 对照组 # grp=c("6H M1") # 实验组排序 CT_delta_delta <- with(dat_double_delta, CT_delta - Delta_CT_control_mean) # step4: 基于对照组检测基因的平均Δ值，计算实验组的 = "dodge")+ geom_errorbar(aes(ymin = qPCR, ymax = qPCR + se), width = 0.25, size
1.6K10编辑于 2024-06-19- 来自专栏生信技能树
芯片加上测序再结合qPCR应该是很保险了吧
/hep.31493， 其推文的详细介绍的链接是：https://mp.weixin.qq.com/s/tVqoBRZIKUAjPmOINpwHsg 我之所以注意到它，主要是他们做了芯片加上测序再结合qPCR 两种分析的结果中发现了3个circRNA变化趋势一致，最后又使用QPCR分析，如下所示： ? 进一步的QPCR分析表明，hsa_circRNA_102064的差异最显著。 最后涉及到了一点环装RNA的背景知识：hsa_circRNA_102064由ERBB2的23-26外显子形成。
96110发布于 2021-02-03 - 来自专栏数据挖掘
动物物种鉴定—使用NCBI工具Primer-BLAST设计qPCR引物
方法是使用pcr或qPCR，区分如下普通终点PCR（凝胶）：能做物种存在/不存在的快速筛查，成本低，但灵敏度和定量能力受限；加工肉（高温/腌制）DNA降解时，长片段靶标容易失效。 qPCR（实时荧光）：灵敏、特异、可定量/半定量（Ct 值可用于判断含量范围），适合监管/鉴定。 很多研究报告对猪/鸡/鸭的qPCR LOD 能做到检测到几十拷贝甚至更低、或检测到0.1%（w/w）水平。 对于动物物种的鉴定，选择线粒体基因组中的COI（cytochrome c oxidase I）作为 qPCR 的靶区。 用于多种动物的 qPCR/鉴定研究很常见（且有专门的 mini-COI 用于加工食品）。
1.7K20编辑于 2025-10-16 - 来自专栏Chris生命科学小站五年归档
没想到一个在线qPCR工具这么火爆，再写个文字教程吧～
---- 为何要做qPCR在线分析工具？ ---- 站长最近在整理实验数据，每次整理到qPCR数据的时候就很崩溃。 一般qPCR的结果都是机器自动生成的，配合机器自带的软件生成一个Bar图，然而这个Bar图，没有统计信息，更没有好看的配色。 想得到好看的图并加上统计信息，后期自己的处理是必不可少的。 所以就想着把之前Excel处理qPCR数据的流程用R语言重新编译，用ggplot2对数据进行可视化，再用shiny进行交互与展示。 上面这个表格是例子数据，在公众号回复qPCR就可以获得。 注意以下几点： 1、Group不要修改，位置和名称都不要修改。Group下面列出对照组和处理组的名字，在网页上填写对照组的名字即可。
1.5K10编辑于 2023-02-28 【辰辉创聚生物】稳定基因敲低细胞系（Stable Gene Knockdown Cell Line）是什么？
、RNAi 与 CRISPRi 的基本逻辑、基因递送与筛选术语（lentivirus、puromycin、hygromycin B、Geneticin (G418)、blasticidin），并说明 qPCR 对于需要精细表型比较、长期实验或严格对照的研究场景，单克隆往往能够提供更清晰、可复现的实验基线。二者的选择反映了对“群体平均抑制”与“来源一致抑制”的不同侧重。6. 转录层面，qPCR 用于量化目标基因 mRNA 的相对降低程度，并评估其在不同传代中的一致性。蛋白层面，Western blot 可用于确认蛋白表达水平的下降及潜在残留表达。 上述 qPCR、Western blot、flow cytometry 与 ELISA 共同构成对稳定敲低状态的正交验证体系。7. 通过 qPCR、Western blot、flow cytometry 与 ELISA 的多维验证，稳定敲低从技术操作转化为可定义、可复核的实验材料，为功能研究和机制分析提供可靠基础。
15110编辑于 2026-02-11- 来自专栏生信课程note＋实验知识
实验知识-230910
3.TBS缓冲液是生物学中常使用的等渗缓冲盐溶液，主要用于免疫组化和原位杂交，酶联免疫等实验中，清洗免疫印迹实验中非特异性结合的抗体等。 可应用于Western Blot实验中洗去膜上非特异性结合的抗体等试剂，以及免疫荧光、免疫组化等实验中封闭液的配制、一抗或二抗的配制、一抗或二抗孵育后的洗涤等，以降低背景，增强信噪比。 8.定量逆转录PCR（quantitative reverse transcription PCR, RT-qPCR）是应用于以RNA作为起始材料的PCR实验中的一种实验方法。 随后，以cDNA为模板进行qPCR反应。RT-qPCR已被用于多种分子生物学的应用中，其中包括基因表达分析、RNA干扰验证、微阵列验证、病原体检测、基因测试和疾病研究。9. qPCR常用的有两种方法：SYBR Green法和TaqMan探针法。
2.3K30编辑于 2023-09-10 - 来自专栏用户7627119的专栏
RNA m6A检测方法
MeRIP-seq 技术检测m6A 技术流程 当然做完IP我们也可以直接做qPCR，称为MeRIP-qPCR，大体流程如下 第一步，先对RNA进行特异性富集和打断。 如果是进行高通量测序打断长度约为100nt左右，而qPCR 则需要长度至少在200nt以上，部分论文甚至打断长度在300-500nt左右。 第五步，使用上一步设计好的引物，对input、m6A-IP和IgG-IP中的RNA进行qPCR反应并计算相应的CT值。 MeRIP-qPCR结果的计算 MeRIP-qPCR结果计算如下表: *其中DF和IF分别是稀释倍数。 比如15μg的片段化RNA经过IP后的RNA全部拿去做IP样品的qPCR实验得到Ct值A1, 另3μg的片段化RNA用来作为Input样品qPCR得到Ct值B1，则%(IP/Input)=2(B1-A1
78210编辑于 2022-09-21
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