首先让我们看看chatGPT对于NK细胞的介绍 自然杀伤细胞(Natural Killer cells,简称NK细胞)是一类免疫细胞,主要参与体内的免疫应答和抗肿瘤免疫。 NK细胞的分类可以基于其表面标志物、功能、发育阶段以及组织分布等方面进行。 1. 表面标志物分类: 基于NK细胞在表面上表达的特定标志物,可以将NK细胞分为不同的亚群。 功能分类: 根据NK细胞的功能,可以将其分为几个亚群,如: 细胞毒性NK细胞:具有杀伤肿瘤细胞和感染细胞的能力。 调节性NK细胞:通过分泌细胞因子调节免疫应答,如干扰素(IFN-γ)。 3. 需要注意的是,NK细胞的分类并不是严格的,因为细胞的特性和功能在不同环境中可能发生变化。此外,不同物种中的NK细胞也可能存在一些差异。 细胞数量较多所以就被作者细分了: CD56亚群里面NK细胞数量较多所以就被作者细分了 值得注意是里面的NK-HSP仅仅是因为NK细胞有HSP的状态,其实也可以是干扰素状态,炎症状态,或者细胞增殖状态
最近单细胞数据挖掘文章如雨后春笋般冒出来了,总体来说就两个方向: 找到一个数据集,降维聚类分群后,拿到基因列表后,去TCGA建模 首先TCGA建模然后拿模型里面的基因去单细胞转录组数据集看是否有特殊的表现 ,三五分钟就可以出结果,但是我看到了它里面的NK细胞数量非常多,不太符合基础认知,如下所示: NK细胞数量非常多 我看了看文章里面的描述; Cells in clusters 0, 1, 2, 3, 7, 9, 10, 12, and 14 were annotated as NK cells based on SingleR 问题就出在这里,SingleR并不是不能使用,毕竟也有那么多人引用,但是它很大概率会被误用 ,而且我们也不推荐它作为唯一的或者说是最后的单细胞亚群命名标准。 细胞吗?
)和GSE150825(NLH单细胞转录组数据)进行分析 分析步骤: 对蛋白组数据进行分析,发现NK细胞介导的细胞毒性相关蛋白显著下调,NK细胞功能可能受到抑制。 免疫组化发现NK-NPC样本中,与NK细胞相关的B2M,CD56+,Granzyme B均下调 对NK-NPC单细胞转录组样本进行分析,T细胞,B细胞,NK细胞在所有类型的细胞中排名前三 对NK细胞取子集进行细分 ,得到1个mast cell和3个NK细胞cluster,从NK细胞毒性激活/抑制,细胞通讯,NK细胞功能相关的标志物,NK细胞介导的毒性通路等角度进行分析,并用NLH单细胞转录数据集进行验证 对上皮细胞取子集进行细分 ] # NK cell ['PTPRC','NKG7','CD96','KLRC1','NCAM1']---[7,11] [0,1,5,7,10,11,13] # Myeloid cells ['CD14 在信号通路水平推断细胞通讯 cellchat <- computeCommunProbPathway(cellchat) # Step7.
CD56是NK细胞的特征性标志物,但在不同NK细胞亚群中表达水平不同。CD16是另一个重要的NK细胞标志物,主要负责抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。 (1)基于CD56和CD16的表达,NK细胞可分为两个主要亚群[4]CD56dimCD16+NK细胞:这是外周血中最主要的NK细胞亚群,约占总NK细胞的90%以上,具有强大的细胞毒性功能。 衰竭标志物:PD-1、TIM-3等,在肿瘤微环境中NK细胞可能表现出PD-1表达增加,从而影响其功能[7]。表1. 粒细胞亚群标志物CD16区分功能亚群:CD56dimCD16+(90%,强细胞毒性);CD56brightCD16dim/-(10%,高细胞因子分泌)功能标志物CD69、CD107a、IFN-7、颗粒酶 B评估NK细胞活性与功能:CD69(活化早期)、CD107a(脱颗粒)、IFN-7(细胞因子)、颗粒酶B(杀伤潜能)MouseC57BL/6、BALB/c等不同种属标记物CD3-NK1.1+或CD3-CD49b
根据生信技能树发布的学徒作业:SingleR说是NK细胞你就相信了吗, 验证一下看真的是有这么多NK细胞 首先读取数据,然后降维分群 library(Seurat) library(dplyr) library # 免疫细胞 0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,15(7和14不是) DotPlot(sce,features = c('PTPRC','CD45')) # T细胞 ','SDC1','CD79A')) # NK细胞 0,4 DotPlot(sce,features = c('FGFBP2','FCG3RA','CX3CR1')) # NK细胞 0,1,3,4,9,10,13 细胞 看看NK细胞的marker 再上cellmarker看一下肝癌里NK细胞的marker DotPlot(sce,features = c('CD16','CD57','CD7','GNLY ,10,12,13都注释为NK cell 最后发现:相比手动注释的结果,它把部分B细胞,部分T细胞都归类为NK细胞,但是整体而言,无论是人工注释还是自动注释,这个数据里NK细胞确实占比较高
刺激与否的人类扁桃体ILC1细胞表达水平的变化:GSE107043 Colo38,Meljuso (both melanoma),OVCA (ovarian) and MCF7 (breast) 4种癌症细胞系的 NK细胞的效果类似。 检验PDGF-DD 作用于肿瘤细胞系 这里使用了 Colo38 and Meljuso (both melanoma), OVCA (ovarian) and MCF7 (breast)这4种癌症细胞系的 data portal (https://xenabrowser.net) and matched to the gene expression data (Figures 4C and 4D). 7 研究表明CpG-ODN免疫治疗可以刺激皮下B16黑素瘤NK细胞的招募、激活和NK细胞依赖的消退。 当浸润NK细胞被肿瘤表达的PDGF-DD激活时,CpG-ODN可以更有效地抑制实体瘤的生长。
聚类产生20个cluster,然后注释到10种细胞类型 T 细胞由 7 个高表达 CD3D 和 CD3E 的细胞簇组成; B 细胞以 CD19 和 MS4A1 表达为特征 经典和非经典单核细胞分别以 CD14 和 MS4A7 的存在为标志 NK 细胞表现出 NCAM1 (CD56) 的表达和 CD3 分子的缺乏 c12 中的特定基因包括血小板相关因子 PF4 和 PPBP,这两种蛋白质都属于 CXC 家族并从活化血小板的 得到2个 NK 细胞亚群(命名为 NK0 和 NK1) 对NK0 亚群而言,细胞毒性基因(如 GZMB 和 NKG7)以及 FCGR3A(引发抗体依赖性细胞毒性的重要受体)的高表达暗示了强大的杀伤能力, 和之前报道的 CD56 dim NK 细胞类似 NK1 亚群在细胞数量上不占优势,但是该亚群富含 GPR183、IL7R、SELL 和 TCF7 等基因,这些基因对淋巴细胞的激活、迁移和功能调节很重要, 表明它与 CD56 bright NK 细胞的身份相同 与健康对照相比,AS 患者 NK 细胞中细胞毒性基因的表达降低 为了了解 NK 细胞的减少是否伴随着转录本的改变,我们分析了两组之间 NK 细胞的基因表达水平
NK-1.1+(或DX5+) T淋巴细胞(NK-T细胞)上表达的抑制性受体)、C57BL/6小鼠的记忆性CD8+ T淋巴细胞和NK1.1+ γδ T细胞群以及BALB/c和C57BL/6小鼠的B-1细胞亚群发生反应 胸腺中表达Ly-49C/I的NK T细胞比例高于肝脏(分别为未成熟NK T细胞和成熟NK T细胞)(2-5倍),有证据表明,Ly-49受体表达的下调是正常NK T细胞发育所必需的。 检测原理PE/Cyanine7 标记抗小鼠 Ly-49C/I 抗体[5E6]通过特异性识别 Ly-49C 的 CRD 结构域,实现对表达 Ly-49C/I 受体细胞的精准标记。 应用领域免疫细胞表型分析:用于 NK 细胞、NK-T 细胞、记忆 CD8+ T 细胞等免疫细胞亚群的鉴定与分选,明确 Ly-49C/I 在不同细胞群体中的表达特征。 总结PE/Cyanine7 标记抗小鼠 Ly-49C/I 抗体[5E6]凭借高特异性、优异的荧光性能及广泛的应用场景,成为 Ly-49 受体家族研究、免疫细胞功能解析、移植免疫等领域的核心工具。
在NK细胞培养体系中,OK432主要作为免疫调节剂发挥作用,通过激活固有免疫信号通路,促进NK细胞的活化、增殖及功能成熟。 NK细胞作为天然免疫系统的关键效应细胞,可以清除病原体和肿瘤细胞,以此原理诞生了NK细胞过继法(Adoptive NK Cell Therapy)以抑制肿瘤。 其中NK细胞的体外扩增效率和功能状态直接影响其后继的研究应用。传统NK细胞作培养方法依赖饲养层细胞和多种细胞因子的组合,存在成本高、操作复杂等问题。 传统NK细胞培养方法如K562饲养细胞培养系统,是通过基因工程改造表达4-1BBL和IL-15等膜结合因子的K562细胞作为滋养层,为NK细胞提供持续刺激信号。 OK432相比传统方法具有显著优势:首先,无需饲养细胞即可实现高效扩增,规避了细胞共培养的污染隐患;其次,单次刺激即可维持7-10天的增殖活性,减少操作步骤和污染风险。
它能特异性识别小鼠多种品系的 Ly-49C 和 Ly-49I 抑制性受体,在 NK 细胞、NK-T 细胞等相关研究中表现优异,具备高特异性、稳定性能和便捷使用等优势,是生命科学研究中不可或缺的实验工具。 该受体主要表达于小鼠 NK 细胞、NK-1.1+(或 DX5+)T 淋巴细胞(NK-T 细胞)亚群,在 C57BL/6 小鼠的记忆 CD8+ T 淋巴细胞、NK1.1+ γδ T 细胞以及 BALB/c Ly-49C/I 的表达水平与细胞发育阶段相关,胸腺中 NK T 细胞的表达比例是肝脏中的 2-5 倍,其表达下调对 NK T 细胞正常发育至关重要。 此外,该受体通过其免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIMs)的酪氨酸磷酸化,介导 NK 细胞溶细胞活性的负调控,在同种异体和杂交抗 H-2d 骨髓移植抵抗中发挥作用。 应用领域小鼠 NK 细胞、NK-T 细胞的表型鉴定与分选。Ly-49 受体家族表达调控机制研究。MHC I 类抗原与 Ly-49 受体相互作用研究。免疫细胞发育及功能调控相关研究。
在ZNF683 NK细胞上表达的aNKR中,SLAMF7表达在患者和健康个体之间没有显著差异,但MM患者的ZNF683 NK细胞中几乎不存在SLAMF7的受体SH2D1B的表达。 ZNF683的表达随着NK细胞耗竭逐渐上调,且抑制性受体LAG3,CST7和ITGB1等也上调,而SH2D1B和XBP1等激活相关基因下调,这也解释了为什么ZNF683 NK细胞和 transitional 番外 SLAMF7 SLAMF7的受体SH2D1B,但是由于SH2D1B的缺失,SLAMF7也不能发挥作用。 信号淋巴细胞激活分子家族成员7(SLAMF7)是表达于NK细胞和免疫细胞亚群的活化受体。 最早研究发现其参与天然杀伤细胞(NK细胞)黏附功能。与正常浆细胞相比,多种免疫细胞包括NK细胞、NK样T细胞、CD8+T细胞、活化单核细胞及树突状细胞均低表达SLAMF7。 抗体与SLAMF7结合可以激活NK细胞和固有免疫。活化NK细胞可直接杀死肿瘤细胞。通过SLAMF持续活化NK细胞可能激活适应性免疫,并产生长期免疫力。
NK细胞亚群中NKG7的表达情况 最后一起看看NKG7在NK细胞中的表达情况,NK细胞中显著表达NKG7所以小提琴图和点的数量都很明显 # 提取NK细胞 NK_cells <- subset(pbmc, idents = "<em>NK</em>") # 如果你的细胞群ID不同,请修改"DC"为实际的DC群标签 dim(NK_cells) # 查看NKG7基因在NK细胞群中的表达 nkg7_expression_NK _NK <- mean(nkg7_expression_NK$NKG7) # 统计表达NKG7基因的细胞数量(表达量大于0的细胞) expressing_NKcells <- sum(nkg7_expression_NK $NKG7 > 0) summary(nkg7_expression_NK$NKG7) # 输出结果 cat("NK细胞群中NKG7基因的平均表达量为:", mean_nkg7_NK, "\n") cat ("NK细胞群中NKG7基因表达大于0的细胞数为:", expressing_NKcells, "\n")
Eomes)来影响NK细胞的抗肿瘤免疫。 NK细胞:转染Eomes过表达质粒(用于验证Eomes对DX5表达的挽救效应)。 原代NK细胞转染Eomes(Fig.5E): ◦ 实验内容:通过转染Eomes过表达质粒,恢复gp96缺陷型NK细胞中DX5的表达。 ◦ 结果:DX5+ NK细胞比例显著回升(p=0.0117),证明Eomes是gp96调控NK成熟的关键下游因子。2. HEK293细胞转染Trim28与Eomes(Fig.7C,7E): ◦ 实验内容:Trim28过表达导致Eomes蛋白减少及Lys63泛素化增强。
基于NK细胞的免疫疗法代表了克服癌症治疗瓶颈的一种有前途的策略。然而,由于肿瘤细胞表面的识别配体的下调,其治疗效果受到极大的限制,并且转化生长因子-β(TGF-β)会阻碍NK细胞介导的免疫反应。 SSB NMs将NK92细胞的肿瘤杀伤能力显著提高了2.1倍。 此外,亚毒性剂量的SSB NMs可有效地使MDA-MB-231三阴性乳腺癌(TNBC)细胞对7名临床患者产生的NK细胞敏感,导致癌症溶解度增加多达13.8倍。 该策略具有以下优点:(i)纳米化SeC的预处理可显著提高NK细胞的裂解能力,而SeC对NK细胞的细胞毒性则大大减弱。(ii)引入免疫调节剂后,体外和体内治疗效率进一步提高。 (iv)SSB NMs通过重新平衡Smad3 / Smad7信号传导来刺激NK92细胞表面的NKG2D表达,并增强对癌细胞的识别能力,从而提高了基于NK92细胞的过继免疫疗法的治疗效率。
7、TME中NK细胞与SDCs发生频繁而稳定的相互作用 NK细胞是肿瘤中SDC水平所必需的主要淋巴细胞。 与NK细胞基因标签结果一致(图5b),天然细胞毒性触发受体1的表达(NCR 1)、NK细胞上NK细胞受体基因的特异性表达(补充图6)与FLT3LG在肿瘤中的表达存在显著的个体相关性(补充图7a)。 肿瘤中的BDCA-3+DC与肿瘤中CD4+T辅助细胞(TH)、CD8+T细胞或CD 45-细胞水平无关(补充图7c-e),提示NK细胞与BDCA-3+DC之间存在特异性的相关性。 9、人类黑色素瘤中的NK细胞与整体存活率的提高相关 SDC与NK细胞呈正相关,从逻辑上预测NK细胞数量也能预测生存期。 这表明,在两个独立数据集的Kaplan-Meier图分析中,NK细胞数高的患者OS显着增加(图6A和补充图 7F)。
NK细胞GNLY 和 XCL1:NK细胞 的典型效应分子,参与抗病毒和抗肿瘤反应。 同时再看一下分辨率为0.6时的结果,我们发现第0, 1, 5簇属于CD4+T细胞,第2, 6, 8, 11簇属于CD8+T细胞,第10簇属于NK细胞,第3, 4, 7, 9簇暂时还不能够确定。 细胞,第10_0簇拟命名为CD8+ NK,但我们这里不重点探查NK细胞,因此这两群细胞统一命名为NK。 1簇可分到CD8+T细胞中去,第7_3簇分到CD4+T细胞中去,第7_0, 7_2,7_4暂定为CD3+T细胞 3.4 细胞命名table(sce2$RNA_snn_res.0.6_c1_sub)### "10_2","10_0" ),2]='NK'celltype[celltype$ClusterID %in% c("10_1","7_0","7_2","7_4" ),2]='CD3+T'table(
OK-432(AbMole,M9414)是一种源自链球菌的生物活性物质,具有免疫调节作用,能够显著增强NK细胞的活性和扩增效率,为促进NK细胞的体外扩增提供了新的选择。 传统NK细胞培养方法主要依赖K562饲养细胞系统,其原理是K562细胞通过细胞间接触和旁分泌作用以支持NK细胞的扩增,但这种方法操作复杂且存在潜在的污染风险。 OK432是一种新型的NK细胞培养用试剂,在分子机制上,OK432的核心活性成分中的肽聚糖与脂磷壁酸可模拟细菌感染,通过结合NK细胞表面Toll样受体4(TLR4)启动相应信号通路。 在与OK432的刺激下,TLR4胞内段与MyD88适配器结合,激活NF-κB与MAPK信号级联,最终促进NK细胞的增殖。与传统的NK细胞培养方法相比,OK-432的优势在于:1. 其机制是OK-432可能通过上调NK细胞表面的激活受体(如DNAM-1)或促进颗粒酶B、穿孔素等效应分子的释放,增强NK细胞对肿瘤细胞的杀伤能力。
在28个HCC组织中进行的mIHC空间映射显示,SPON2+ NK细胞是CD3−CD68−CD163−CD16+CD56+CD57+(扩展数据图7a),证实了它们的身份是NK细胞而非T细胞或巨噬细胞。 HCC单细胞RNA测序数据的配体-受体网络分析38,39揭示,II型干扰素(IFNγ)通路是区分SPON2+与SPON2− NK细胞的主要免疫相关信号(扩展数据图7b,c),预测CD8+ T细胞是主要产生作用于 SPON2+ NK细胞的IFNγ的来源(扩展数据图7d,e)。 制备了5 × 10^6 ml−1浓度的PKH67预染色的HepG2细胞单细胞悬液和1 × 10^7 ml−1浓度的PKH62预染色的NK92细胞单细胞悬液,并置于冰上保存。 7天后,将4×10^6个活化的人PBMC来源的NK细胞(用250U ml^-1 IL-2、10ng ml^-1 IL-15、10ng ml^-1 IL-12、50ng ml^-1 IL-18或10ng
数据介绍 本研究纳入7例病理诊断为ESCC的患者进行单细胞RNA-seq分析,手术切除后立即获得配对的、新鲜切除的ESCC肿瘤和邻近食管组织。邻近组织离肿瘤组织至少5cm。 02 T细胞和NK细胞的聚类及亚型分型 (1)T细胞和NK细胞是主要的免疫毒性细胞,文章识别出了CD4 T细胞群,7个CD8 T细胞群,1个CD4和CD8双阴性T细胞群,3个NK细胞群(a)。 (3)在ESCC中,PD1在CD8 T细胞中的表达始终较高(f),肿瘤中NK细胞的主要簇群由邻近组织的NKC1-NCR3转变为NK- c3 - klrc1,肿瘤中NK- c2 - stmn1显著增加。 (3)与匹配的邻近组织相比,7名患者中有4名出现了肿瘤克隆扩张。 (4)CD8 T细胞的克隆细胞明显多于CD4 T细胞,CD8 T细胞中细胞毒性细胞簇CD8- c1 - NKG7在癌旁组织中出现频率较高,在癌旁组织中也表现出较肿瘤组织中增加的克隆扩张(e)。
B7-H6作为SCLC中NK细胞激活性配体的作用。 其他通路分析还提示,cGAMP促进EC-NK细胞黏附(ICAM1)、单核细胞-NK细胞趋化(CCL家族) 以及NK-SCLC黏附(CD96)。 NK细胞和T细胞浸润。 同时耗竭NK细胞和CD8+ T细胞可显著削弱联合治疗疗效,表明NK细胞在该联合策略中发挥重要作用,但内源性NK细胞数量稀少可能限制其疗效。 联合CAR-NK细胞治疗(过继性转移):构建DLL3靶向的CAR-NK细胞,其在体外对CORL47细胞(包括B7-H6缺陷株)显示增强的杀伤能力。