前些天我在生信技能树提出来了一个转录组数据分析的疑难杂症:RNA-seq的fastq文件里面为什么有gc含量的双峰,就是fastq测序数据质量控制的时候发现了GC含量的双峰,然后我简单分析了那些高重复的 bowtie2建立rRNA索引 bowtie2-build hg38_rRNA.fasta hg38_rRNA 这个时候的比对工具的选择,并不一定要bowtie2软件哈。 使用bowtie2去除rRNA,重点--un-conc-gz参数。查阅hisat2的帮助文档,发现有同样的参数,所以可以用hisat2完成同样的操作。 bowtie2运行耗时20min左右,如果是hisat2,可能会更快,大家可以自行测试和比较一下。 可以看到,GC含量最后一个峰是由rRNA导致,因为8百万条reads被去除后,该峰就消失了。 最后剩下的问题,就是GC含量的另外一个峰。我们后续再谈它!
我们在对测序数据进行fastqc质控时,会比较关注样本的GC含量,较好的数据如下图所示 Normal data 事实上,我们的测序结果会受到建库方式、样本质量等很多因素的影响,其GC含量也会千差万别 下图是真实测序结果的fastqc报告,很明显其GC含量有多个峰值,相当的“红”。我们在进行后续分析之前,首先要对其进行一定处理,去掉杂峰的影响。 rawdata_qc 下图是双端测序结果的fastqc质控报告中的GC含量部分,我们可以看到有几个异常峰值。 /SRR11178348_1.fastq.gz -2 /home/xiaowang/GSE145894/2.raw_fq/SRR11178348_2.fastq.gz --un-conc-gz . 含量的双峰
对NGS测序得到的成千上万条reads的GC含量进行统计,并且与正态分布形式对比已经是常规操作了,一般用fastqc软件即可分析,如下: ? 但现实情况往往不是这样。 Statistics Per base sequence quality Per sequence quality scores Per base sequence content Per base GC content Per sequence GC content Per base N content Sequence Length Distribution Sequence Duplication Levels Overrepresented sequences Kmer Content 那么问题来了,不同物种的ngs组学的GC含量理想范围是什么?
fastq测序数据质控的时候 首先fastq测序数据质量控制表格就发现质量差的可怜,而且居然有GC含量的双峰,如下: ? 遇到这样的情况,就必须单独看具体的每个样本,上面的GC含量图表是项目里面全部的样本的multiqc汇总图表。 我随机抽一个样本的fastqc报告看了看,如下: ? 这个59%到67%的GC含量reads有点多啊,就是第一个GC峰值。 然后80%附近GC含量reads也有点多,就是第二个GC含量峰值。 这两个GC含量峰值就是需要解决的问题,正常的RNA-seq数据不会出现这样的情况。 (下面的思维导图来自于:https://mp.weixin.qq.com/s/vpe8W0QMKngeQ2UuBPd-Gg ) ?
含量片段偏好性。 if $F[2]=~/[GC]/;$counts_sum{$key}+=$F[3];$number{$key}++;}END{print "$_\t$number{$_}\t$GC{$_}\t$counts_sum 我觉得我这次画的图还不错,很明显能看到这个趋势,GC含量比较高的窗口,有着相应比较高的测序深度! ? 至此,完美的证明了文章开头的结论! /tmp.txt') a$GC = a[,4]/a[,3] a$depth = a[,5]/a[,3] a = a[a$depth<100,] plot(a$GC,a$depth) library(ggplot2 "="~r2, list(a = format(coef(m)[1], digits = 2), b = format(coef(m)[2], digits = 2), r2 = format(summary
含量片段偏好性。 if $F[2]=~/[GC]/;$counts_sum{$key}+=$F[3];$number{$key}++;}END{print "$_\t$number{$_}\t$GC{$_}\t$counts_sum 我觉得我这次画的图还不错,很明显能看到这个趋势,GC含量比较高的窗口,有着相应比较高的测序深度! ? 至此,完美的证明了文章开头的结论! /tmp.txt')a$GC = a[,4]/a[,3]a$depth = a[,5]/a[,3]a = a[a$depth<100,]plot(a$GC,a$depth)library(ggplot2 "="~r2,list(a = format(coef(m)[1], digits = 2),b = format(coef(m)[2], digits = 2),r2 = format(summary
计算gc含量 seqkit.exe fx2tab --name --only-id --gc output.fasta -o gc.txt ? image.png 计算序列长度 seqkit.exe fx2tab --name --only-id -l output.fasta -o seqlen.txt ? image.png ggplot2 作图 极坐标情况下添加直线 自己没有想法如何实现,搜索引擎搜索关键词 ggplot2 polar and then add straight lines找到参考链接 r 代码暂时还看不明白,他是自己重新定义了一个函数,代码我先复制过来,后面有时间来研究 library(tidyverse) library(ggplot2) df <- tibble(x = rep( "z", yend = 3 ), arrow = arrow(length = unit(0.2, "cm")), col = "red", size = 2
以前是自己写脚本: 【直播】我的基因组47:测序深度和GC含量的关系 可能是太复杂,大多数读者表示看不懂,所以我重新使用已有的轮子来做这件事。 下载hg38参考基因组 直接谷歌搜索即可: ? 107043718 chr15 101991189 chr16 90338345 chr17 83257441 chr18 80373285 chr19 58617616 chr2 含量 因为使用的是bedtools这样成熟的轮子, 所以就是一行代码而已: bedtools nuc -fi hg38.fa -bed 200k.bed | cut -f 1-3,5 > 200k_gc.bed # 4_pct_at 5_pct_gc 6_num_A 7_num_C 8_num_G 9_num_T 10_num_N 文件如下: $head 200k_gc.bed #1_usercol 2_usercol 3_usercol 5_pct_gc chr1 0 200000 0.420110 chr1 200000 400000 0.220065 chr1
, 0x2b12bcc0, 0x2b12be00, 0x2b3d0000) rw space 12288K, 46% used [0x2b3d0000, 0x2b972060, 0x2b972200, , 0x2b12bcc0, 0x2b12be00, 0x2b3d0000) rw space 12288K, 46% used [0x2b3d0000, 0x2b972060, 0x2b972200, -Xms和-Xmx设为相同值.为了优化GC,最好让-Xmn值约等于-Xmx的1/3[2]. 2.一个GUI程序最好是每10到20秒间运行一次GC,每次在半秒之内完成[2]. 注意: 1.增加Heap的大小虽然会降低GC的频率,但也增加了每次GC的时间.并且GC运行时,所有的用户线程将暂停,也就是GC期间,Java应用程序不做任何工作. 2.Heap大小并不决定进程的内存使用量 如果你的程序需要频繁创建很多transient对象,会导致JVM频繁GC.这种情况你可以增加机器的内存,来减少Swap空间的使用[2]. 4.4种GC 第一种为单线程GC,也是默认的GC.
DNA 序列的 GC 含量是指序列中'G'和'C'所占的百分比。 一条 DNA 序列很容易表示,但是如果有多条 DNA 序列放在一起,则每条序列必须被标记,通常的做法是保存为 FASTA 格式文件。 需得:GC 含量最高的序列名称及其 GC 含量(各占一行行输出)。 ) def test(): item = max_gc_content('rosalind_gc_test.txt') return item[0] == 'Rosalind_0808 ("cout_gc_content:Failed") sys.exit(1) item = max_gc_content('rosalind_gc.txt') print ,特别是为其构造一个 key 函数并传入,这是解本题的关键,GC 含量本身是很容易理解的。
哈哈,这个话题带点江湖气息:开发有时觉得“自己写代码是造房子”,而测试“就是来找茬的”,于是容易说出“测试没技术含量”这种欠扁的话。 面对“测试没技术含量”这类轻视言论,不需要情绪化“怼”,而是用理性、专业、有深度的回应让对方闭嘴甚至肃然起敬。 他们没技术含量?那你去应聘试试?”“微软的测试工程师要会写编译器插件做静态分析,Amazon的QA要会建分布式压测平台 —— 你觉得这是‘点点点’?” ✍️ 总结:你可以这样优雅回击“测试当然有技术含量 —— 它是在不确定性中寻找确定性,在混沌中建立秩序,在沉默的系统中听见即将爆炸的声音。undefined我们不生产代码,我们生产信心。 谁敢说显微镜没技术含量,那是眼界问题。
这个包主要是处理基因组的一些序列信息,包括:序列翻译、DNA/RNA互转、统计各个碱基的含量、三连字母的含量.....这些都是一行命令可以解决的。今天就先来教大家怎样计算GC/AT含量。 ? 安装完毕,只需敲几行代码,就可以实现GC/AT含量可视化。 /dell/Desktop/sequence.fasta"#读取文件(FASTA格式)x<-readDNAStringSet(filepath)chrom<-x[[1]]#每100个碱基为窗口计算AT含量 T")))/100#获取描述性统计量根据此设置坐标summary(at)#画图plot(at,type='l',axes=F,xlab=NA,ylab=NA,ylim=c(0.2,0.8))axis(2,
2)可达性分析算法 GC Root 也称为根对象,代表的是当前时刻仍然存活着的对象,可作为根对象的主要有以下几类: ① 在虚拟机栈中引用的对象,例如参数、局部变量、临时变量等; ② 在方法区中类静态属性 5、垃圾收集行为 1)Partitional GC:部分收集 分为以下三种: ① Minor GC:针对新生代的收集; ② Major GC:针对老年代的收集,目前只有 CMS 收集器会有单独收集老年代的行为 ; ③ Mixed GC:新生代老年代混合收集,目前只有 G1 收集器有这种行为; 2) Full GC:整堆收集 针对整个 Java 堆和方法区的收集。 收集效率较低,因此不建议手动调用 System.gc() 进行 Full GC。 6、垃圾收集算法 1)标记-清除算法 该算法分为两个阶段:标记和清除。 7、GC 相关参数 GC相关参数 8、垃圾收集器 1)分类 垃圾收集器分类 2)Serial 这是一款最基础的垃圾收集器,它是单线程的,并且在进行垃圾收集工作时会停掉其他的工作线程,直到收集完毕。
这种情况是由于hiveserver2自身的复杂压力大,内存损耗严重,严重GC进而导致hiveserver2故障。 这种故障对应于上面介绍的“故障现象1”,通过jdbc无法正常连接到hiveserver2。为了解决该故障,可以通过优化内存GC可以缓解hiveserver2的GC卡死问题。 以下是hiveserver2发生卡死,jdbc无法连接到hiveserver2的时候,统计GC的结果: 可以看到,当hiveserver2发生严重卡死时,也就是hiveserver2 进程发生严重GC 因此,可以通过优化hiveserver2的内存GC来优化hiveserver2,使之支持更高的并发、能够执行更复杂的sql任务。 因此,将hiveserver2迁移到资源非常空闲的另外一台服务器。 4.2 采用优化GC机制和参数 之前hiveserver2进程的启动参数没有添加GC参数,也就是说采用系统默认的GC机制。
序列名称
序列长度
GC 含量
Low fetal fraction has been linked to very early gestations, high maternal BMI, maternal medications, smoking and factors which lead to a smaller placenta, such as trisomies 13 and 18 (Kuhlmann-Capek et al. 2019)
= 全局sweepgen atomic.Store(&s.sweepgen, h.sweepgen) // 放到全局span列表中, 这里的sweepSpans的长度是2 // sweepSpans[h.sweepgen/2%2]保存当前正在使用的span列表 // sweepSpans[1-h.sweepgen/2%2]保存等待sweep 的span列表 // 因为每次gcsweepgen都会加2, 每次gc这两个列表都会交换 h.sweepSpans[h.sweepgen/2%2].push(s) // = s.npages << _PageShift s.divShift = 0 s.divMul = 0 s.divShift2 = 0 && t.now-lastgc > forcegcperiod forcegcperiod的定义是2分钟, 也就是2分钟内没有执行过GC就会强制触发.
今天主要谈谈JVM GC的类型和策略,特别是大家经常混淆的Minor GC、Major GC、Full GC,年轻代GC、老年代GC,之间有什么区别和联系。 2.年老代 年老代内存里包含了长期存活的对象和经过多次Minor GC后依然存活下来的对象,通常会在老年代内存被占满时进行垃圾回收。 Major GC 老年代的垃圾收集叫做Major GC,Major GC通常是跟full GC是等价的,收集整个GC堆。 Minor GC和Major GC其实就是年轻代GC和年老年GC的俗称。 而在Hotspot VM具体实现的收集器:Serial GC, Parallel GC, CMS, G1 GC中,大致可以对应到某个Young GC和Old GC算法组合。 分代GC并不收集整个GC堆的模式,而是只专注分代收集 Young GC:只收集年轻代的GC Old GC:只收集年老代的GC(只有CMS的concurrent collection是这个模式) Mixed
首先构建10x对象,这里就不赘述了,我在我在单细胞天地的2个教程: 使用seurat3的merge功能整合8个10X单细胞转录组样本 seurat3的merge功能和cellranger的aggr整合多个 10X单细胞转录组对比 展示的非常清楚啦,因为每个教程想说明的情况不一样,所以需要重新把计算线粒体基因含量讲解一下。 一般来说,这个过滤起码得是线粒体基因含量占比25%以下的细胞才保留,当然也得考虑到生物学课题啦。 第二种方法 上面的方法是修改 sce[["percent.mt"]] ,下面我们演示 AddMetaData 函数,同样是可以增加线粒体基因含量信息到我们的seurat对象。 也可以是免疫球蛋白相关基因含量等等,取决于大家的生物学课题啦。
所以分配率越高,越频繁执行 Minor GC。 2、内存池被填满的时候,其中的内容全部会被复制,指针会从0开始跟踪空闲内存。 0.0 34047.1 272640.0 245801.5 1756416.0 597362.6 21504.0 20390.6 3072.0 2750.3 13 1.183 2 0.0 34048.0 272640.0 21474.1 1756416.0 757347.0 22012.0 20792.0 3200.0 2791.0 15 1.336 2 基于该信息,我们可以得出这样的结果,运行了12次 Minor GC、2次 Full GC,时间总跨度为50毫秒。 2、并行执行标记和清洗阶段。这些都是和应用程序线程并行的。 3、最后 Remark 阶段,花费了0.0462010秒约46ms。这个阶段会再次暂停所有的事件。 4、并行执行清理操作。