今天分析CITE-seq数据的时候遇到了一个error:“Invalid class "LogMap" object: Duplicate rownames not allowed”。
系统评估表明,scTranslator 在多种测序技术(CITE-seq、REAP-seq、NEAT-seq、空间CITE-seq等)、多种细胞类型(单核细胞、巨噬细胞、T细胞、B细胞)、不同组织(血液 图3|蛋白推断任务的系统性基准比较 在独立数据中的鲁棒表现 研究人员在四个独立数据集(ECCITE-seq PBMCs、CITE-seq mouse、空间CITE-seq、NEAT-seq)上进行留一类型验证 CITE-seq mouse: 尽管预训练仅基于人类数据,模型在鼠源数据上依然保持优异表现,表明跨物种泛化能力。 空间CITE-seq: 模型在不同组织(胸腺、脾脏、扁桃体、皮肤)中准确度最高,显示其从单细胞数据到空间组学的迁移潜力。
以CITE-seq为例,其ADT模式聚焦于表面蛋白。ADT数据显示了较低的丢失率,因此可以可靠地量化细胞活性。对于本研究分析的五个CITE-seq数据集,其ADT数据的丢失率高达12%。 同时,CiteFuse、Seurat V4和Specter可以使用基于距离的图来聚类CITE-seq数据。 从对CITE-seq和SMAGE-seq数据的大量实验中可以观察到scMDC的优越性能。 图1 scMDC模型架构 结果 真实CITE-seq数据评估 作者首先评估了scMDC在CITE-seq数据集上的聚类性能,并与10种竞争方法进行了比较。 作者在七个单批次CITE-seq数据集和两个多批次CITE-seq数据集上测试了这些方法。在这10种比较方法中,只有scMDC、Seurat和TotalVI可以在聚类前校正批次效应。
/www.nature.com/articles/s41590-021-00933-1 发表期刊:Nature Immunology (2021-05-24) 数据是公开的:GSE158769 ,采用CITE-seq TH17) 细胞状态,在结核杆菌发展成肺结核病的过程中丰度和功能都有所下降 方法 数据准备 PBMC sample preparation Flow cytometry of total PBMCs CITE-seq scRNA数据质控 降维 聚类+注释 bulk RNA-seq 比对+定量 利用MASC(modeling of associations of single cells )评价不同细胞状态与疾病的关系 先用CITE-seq 测了>500,000个T细胞 在秘鲁首都利马进行了一次大型的流行病学调查(n= 18,544),从其中招募了264个人,采样了外周血单核细胞进行CITE-seq测定,同时还加入了基因表型数据和蛋白数据
一种多用途深度学习方法,用于CITE-seq和单细胞RNA-seq数据与细胞表面蛋白预测和插补的集成 CITE-seq 分析的一个挑战是多个 CITE-seq 数据集的集成。 这并非微不足道,因为不同 CITE-seq 数据集的蛋白质面板通常有一些不重叠情况,这会阻止简单的连接。 这允许 sciPENN 从具有部分不重叠蛋白质面板的多个 CITE-seq 数据集中学习,估算组成每个 CITE-seq 数据集的缺失蛋白质,甚至从部分重叠的 CITE-seq 数据集学习后可以预测外部 此外,sciPENN 比上述两个方法快一个数量级,使其成为综合 CITE-seq 和 scRNA-seq 数据分析的理想工具。
如前文对CITE-seq的研究所述,与RNA分子相比,蛋白质分子拷贝数的增加通常会导致对蛋白质特征的更强检测。 因此,我们使用我们的WNN图来推导一个集成的UMAP和我们的CITE-seq数据集的聚类(图1E)。 我们利用CITE-seq技术以及优化的抗体panel和整合的WNN分析策略,生成人类PBMC的多模态图谱。 在这两种情况下,我们检查了根据我们的CITE-seq数据预计将被DE的基因表达水平,并且我们观察到在排序的剖面和CITE-seq簇之间有明确的一致(图4D, E)。 重要的是,我们证明了可以很容易地挖掘CITE-seq数据来为任何感兴趣的亚群识别最佳的免疫表型标记panel。
在我们新的预印本中,我们生成了一个CITE-seq数据集,其中包含转录组和228种表面蛋白的配对测量,并利用WNN定义了人类PBMC的多模态参考基。 您可以使用WNN分析来自各种技术的多模态数据,包括CITE-seq、ASAP-seq、10X Genomics ATAC + RNA和SHARE-seq。 single-cell data(https://satijalab.org/v4preprint) Vignette: Multimodal clustering of a human bone marrow CITE-seq NearestNeighbor analysis(WNN) (A, B) Independent analysis of transcriptome (A) and protein (B) modalities from a CITE-seq
比如CITE-seq(转录组和表位的细胞索引)是一种基于 RNA 测序的方法,可在单细胞读数中同时量化细胞表面蛋白和转录组数据。 , scRNA-seq, and T cell receptor sequencing (TCR-seq) CITE-seq panels included 15 an- tibodies to validate RNA-based cell-type annotation, and were expanded up to 81 antibodies for more specific investigation CITE-seq 也就是说,之前大家解决不了的单细胞转录组里面的 t细胞里面的cd4和cd8总是混合在一起的情况,可以通过添加蛋白质表达量来辅助区分,最出名的就是 CITE-seq single-cell expression 不知道能不能让能让大量的cite-seq数据起死回生不。。。。
在这个例子中,我们将10Xgenomic发表的2700个PBMC的第一个scRNA-seq数据集之一映射到我们最近描述的用228个抗体测量的162,000个PBMC的Cite-seq参考。 在这个小节中,我们演示了如何使用先前建立的参考来解释scRNA-seq查询:1.基于一组参考定义的细胞状态来注释每个查询细胞2.将每个拟要做分析的细胞投影到先前计算的UMAP可视化中3.在CITE-SEQ 我们建议对CITE-SEQ数据集使用有监督的主成分分析,并在本教程的的下一个数据集上演示如何计算这种转换。但是,您也可以使用标准的PCA变换。 0.121 0.005 5.072808e-12## FRS2 2.983908e-15 0.1906088 0.152 0.009 3.751369e-11最后,我们可以基于CITE-SEQ 作为参考,我们使用了我们使用加权最近邻分析(WNN)分析的人类BMNC的Cite-Seq参考此节展示了与上一个节上的PBMC示例相同的引用两个数据集的功能。
10X Genomics公司早期发布的一个包含2700个外周血单核细胞(PBMC)的单细胞RNA测序(scRNA-seq)数据集,与我们最近创建的一个使用228种抗体测量的、包含162,000个PBMC的CITE-seq 估算在CITE-seq参考数据集中测量到的表面蛋白的预测水平。 要运行本示例,请确保安装了Seurat v4,该软件可在CRAN上下载。同时,您还需要安装SeuratDisk包。 我们建议对CITE-seq数据集采用监督主成分分析方法,并将在本指南的下一个部分展示如何执行这一变换。当然,您也可以选择使用传统的主成分分析(PCA)变换。 0.021 3.498588e-14 ## IL2RA 1.808612e-14 4.137935 0.208 0.014 2.273787e-10 最终,我们能够展示根据 CITE-seq
在此示例中,我们映射了 10X Genomics的(2,700 个PBMC)的scRNA-seq 数据集,到我们最近发表的 CITE-seq 参考的 162,000 PBMC,使用了 228 种抗体[1 在此教程中,我们演示了如何使用先前已建立的参考集来注释 scRNA-seq 查询集: 根据参考集的细胞状态注释每个查询集细胞 将每个查询细胞投影到以前计算的 UMAP 图中 估算CITE-seq 参考集中测量的表面蛋白质的水平 我们建议将受监督的 PCA 用于 CITE-seq 数据集,并在此教程的下一部分演示如何计算此转换。但是,您也可以使用标准的 PCA 转换。 0.005 5.072808e-12 ## FRS2 2.983908e-15 0.1906088 0.152 0.009 3.751369e-11 最后,我们可以可视化根据CITE-seq 我们使用加权邻近分析(WNN)[9]中的人类BMNC的CITE-seq作为参考。 此教程显示的参考映射功能与前面的 PBMC 示例相同。
d, 使用超聚类 CITE-seq 数据从 Visium 解卷积推断出的细胞定位。 e, 分割和 CITE-seq 导出注释后的 IBEX 细胞位置。 CITE-seq sample preparation CITE-seq样本制备 Para_01 细胞通过逐渐加入15个体积的预温IMDM培养基缓慢解冻,并在4°C下以1700转/分钟离心6分钟。 CITE-seq quality control and denoising CITE-seq 质量控制和去噪 Para_01 CITE-seq 数据使用 R 包 Seurat (v.4.3.0),SeuratObject CITE-seq annotation CITE-seq 注释 Para_01 CITE-seq 数据的注释是在整合的 RNA 和去噪的 ADT 模态上进行的。 CITE-seq pseudotime analysis CITE-seq伪时间分析 Para_01 为了对 αβT 细胞系进行轨迹推断,CITE-seq 数据被子集化以包含 DP_pos_sel、DP
例如,CITE-SEQ能够同时测量同一细胞的转录本和细胞表面蛋白。 例如,我们演示了如何基于测量的细胞转录本对CITE-SEQ数据集进行聚类,并随后发现在每个聚类中丰富的细胞表面蛋白。 to discard all but the top 100 most# highly expressed mouse genes, and remove the 'HUMAN_' from the CITE-seq ")p2 <- FeaturePlot(cbmc, "rna_CD19") + ggtitle("CD19 RNA")p1 | p2图片识别scRNA-seq集群的细胞表面标志物我们可以利用我们整合的CITE-seq
研究人员在模拟数据以及多个真实数据集上验证了 APOLLO 的性能,包括 SHARE-seq、CITE-seq 以及多重单细胞成像数据。 在 CITE-seq 数据中实现批次效应与生物信息分离 在 CITE-seq 数据分析中,APOLLO 的共享潜在空间主要反映细胞类型差异,而 RNA 特异空间则捕捉实验批次效应。
通过CITE-seq和10x multiome两种单细胞多模态技术,展示了WNN分析的应用。不再仅仅依据单一数据类型来定义细胞状态,而是综合两种数据类型的信息来进行定义。 CITE-seq、RNA + ADT 的 WNN 分析 利用了 Stuart 和 Butler 等人在《Cell》杂志 2019 年发表的研究中的 CITE-seq 数据集,这个数据集由 30,672
其他单细胞多组学技术的到来,如scTCR-seq、scBCR-seq、scATAC-seq、CITE-seq和scCUT&Tag,使通过捕捉转录组学、表观遗传学和功能方面来解释细胞异质性和研究免疫系统成为可能 当前版本的scImmOmics记录了来自七种单细胞测序技术(scRNA-seq、scTCR-seq、scBCR-seq、scATAC-seq、CITE-seq、ECCITE-seq和scCUT&Tag-pro 对于CITE-seq和ECCITE-seq数据,我们展示了每个细胞中感兴趣蛋白质的活性(图2C)。 (I) CITE-seq样本的UMAP投影。(J) 蛋白质活性(CITE-seq)。(K) '综合分析'工具。 值得注意的是,我们在其他组学样本中也观察到了显著富集,例如CITE-seq样本‘PBMC_0016’和scATAC-seq样本‘PBMC_0010’(图3H)。
多模态融合 整合基因表达、染色质可及性(ATAC)、蛋白质(CITE-seq)等多组学数据,通过共享隐空间构建联合距离度量。 2. 空间转录组增强:从单细胞到组织微环境 在肝脏空间转录组数据中,moscot将CITE-seq的91,000个单细胞(含蛋白质数据)映射至36.7万个空间位点,成功定位中央静脉(CV)和门静脉(PV)标志基因
例如CITE-seq能够同时检测来自同一细胞的转录组和细胞表面蛋白质。其他令人兴奋的技术,如[10 XGenomics],允许对 scRNA-seq和scATAC-seq进行配对检测。 to discard all but the top 100 most # highly expressed mouse genes, and remove the 'HUMAN_' from the CITE-seq 识别 scRNA-seq 亚群的细胞表面marker 我们可以利用我们的配对 CITE-seq 测量来帮助注释源自 scRNA-seq 的cluster,并识别蛋白质和RNA标记。
主要实验方法 流式细胞术、10xChromium单细胞转录组建库(Illumina HiSeq 4000仪器测序 )、CITE-seq(与10x文库合并用Illumina HiSeq 4000仪器测序 PS:CITE-seq(Cellular Indexing of Transcriptomes and Epitopes by sequencing)通过测序来进行转录组和表位的细胞索引技术的新型测序技术
估算在CITE-seq参考数据集中测量到的表面蛋白的预测水平。 要运行本示例,请确保安装了Seurat v4,该软件可在CRAN上下载。同时,您还需要安装SeuratDisk包。 我们以之前使用加权最近邻分析(WNN)方法分析过的人类BMNC的CITE-seq参考集作为比对标准。 query data InstallData('hcabm40k') hcabm40k <- LoadData(ds = "hcabm40k") 参考数据集构建了一个加权最近邻(WNN)图,该图体现了在本次CITE-seq