“六合心法”第一式 ■ PolyFast 转染试剂 本心法中的 是由高质量的鼠源 lgG2b 单克隆抗体与琼脂糖 Sepharose 4B 共价偶联而得,具有较高的 Flag 标签蛋白结合容量,可用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中 Flag “六合心法”第三式 ■ 双荧光素酶报告基因检测试剂盒 (Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit) 荧光素酶是自然界中能够产生生物荧光的酶的总称,可催化荧光素氧化成氧化荧光素 相关产品 PolyFast Transfection Reagent 高效低毒、操作简便、重复性好的转染试剂盒。可高效地对 DNA、RNA进行转染。 对多种常见细胞具有高水平转染效率,对原代细胞和难转染细胞也具有较好的效果 Anti-Flag Affinity Gel 是一种纯化的小鼠 IgG2b 单克隆抗体,共价连接琼脂糖 Sepharose 4B
2. 2024年影响因子 期刊:Frontiers in Immunology 影响因子:约8.8。 3. ZETA life转染试剂(AD600150)的应用 转染细胞及基因: • RAW264.7细胞(小鼠巨噬细胞系): ◦ 转染基因:lncRNA Gm28309过表达质粒(Gm28309-pcDNA3.1 ◦ 解读:ZETA life试剂高效递送Gm28309质粒,验证了其对炎症的负调控作用。 2. RAW264.7转染miR-3068-5p mimic(图5C, 5D): ◦ 结果:miR-3068-5p过表达降低kB-Ras2(NF-κB抑制因子)的荧光素酶活性,激活炎症通路。 ◦ 解读:试剂高效转染miRNA,揭示ceRNA调控机制。 ZETA life试剂的贡献: • 高转染效率确保基因操作(过表达/敲低)的可靠性,支撑了全文分子机制验证。
先前小 M 已经介绍过各种转染方法的优缺点了 (见 “六合心法” 有三式~),在传统的转染方法 (如磷酸钙法、电穿孔法、病毒法等) 转染效率低、细胞毒性大、重复性差的情况下,以 Lipo3000 为主的阳离子脂质体转染试剂脱颖而出 稍一不慎,人财两空,哦不,是细胞和试剂都没了,岂是一个惨字了得。想要高效又价美的转染试剂吗? 小白: PolyFast Transfection Reagent 也是属于阳离子脂质体转染试剂吗?小M: 不是哦! PolyFast Transfection Reagent 属于阳离子聚合物转染试剂,在确保高转染效率的同时,对细胞毒性更小!小白: 那可以使用有血清的培养基吗?小M: 可以使用有血清的培养基。 小M: 此外,除了转染质粒 DNA,我们的转染试剂也适用于 RNA 转染~小白: 那可以同时转染两个质粒吗?小M: 当然也可以啦!
2. 期刊影响因子Nature Communications 影响因子:16.63. ZETA life转染试剂(AD600150)在实验中的应用转染试剂型号:Advanced DNA RNA Transfection Reagent(货号:AD600150)转染细胞及基因:• 原代小鼠 转染实验数据及贡献分析实验数据定位1. 原代NK细胞转染Eomes(Fig.5E): ◦ 实验内容:通过转染Eomes过表达质粒,恢复gp96缺陷型NK细胞中DX5的表达。 2. HEK293细胞转染gp96与Eomes(Fig.6G): ◦ 实验内容:过表达gp96增强Eomes的蛋白稳定性。 5.转染试剂的核心贡献• 高效递送能力:成功转染难转染的原代NK细胞(转染效率>60%),为功能挽救实验提供技术保障。
2. ZETA life Advanced DNA RNA转染试剂(货号:AD600150)的应用 • 转染细胞:K562细胞(人慢性髓系白血病细胞系)。 • 转染基因: ◦circ-0008102过表达载体(circ-0008102 overexpression vector) ◦circ-0008102 siRNA(si-circ-0008102 转染实验数据及解读 • 实验数据来源: ◦Supplementary Fig. S1:circ-0008102过表达或敲低对γ-珠蛋白mRNA表达的调控(P<0.05)。 • 数据解读: ◦ZETA life转染试剂高效递送circ-0008102载体和siRNA至K562细胞,验证了circ-0008102通过调控γ-珠蛋白和miRNAs参与β-thal的分子机制 ◦转染效率高,数据重复性好,支持了circ-0008102作为生物标志物的结论。 • 主要贡献: ◦为circ-0008102功能研究提供可靠的基因操作工具。
细胞转染不顺利?基因递送总是失败?别担心! Section.02LNP 试剂盒为何如此抢手? MCE LNP 试剂盒:纳米级解决方案,细胞顺利签收• 精准投递,细胞无可拒签:LNP 特有的跨膜转运及逃逸机制,实现 RNA 的高效递送;• “零”暴力拆箱:温和转染,微量样品的包封率 > 80%,递送效率高 传统转染 VS MCE LNP 试剂盒投递无忧:用数据说话精准投递不是说说而已——来看实测数据,带你直观感受我们 LNP 试剂盒是如何让细胞“签收率”一路飙升的! Pharmaceutics. 2021 Feb 2;13(2):206.
2. 高效转染是构建的技术基础为了将上述构建好的载体引入宿主细胞,科研上广泛采用高效转染方法。 常用的转染技术包括:化学法:基于阳离子脂质体等试剂(如 Lipofectamine 系列)与DNA复合,从而被细胞摄取。 转染效率直接影响稳定细胞系构建的效率和质量,因此在转染环节选择适合的方案、适宜的转染试剂是关键。3. 抗性筛选与单克隆挑选转染后细胞通常是多种状态混合群体,其中只有一部分细胞完成了外源基因的整合。 实验中所用的抗体、qPCR 引物探针、Western blot试剂等科研试剂都直接影响数据的准确性,是表达验证的重要组成。5. 细胞培养环境与支持试剂稳定细胞系的建立与维护还依赖于良好的细胞培养环境。 Commun. 12, 4567 (2022).2.Zhang, X. et al.
技术上,CHO细胞系支持大规模悬浮培养和高细胞密度扩增,配合高效转染方法,可为科研用途提供毫克至克级别的蛋白产量,同时维持一致的翻译后修饰谱。 HEK293细胞系:快速表达与人源化修饰的优势相比之下,HEK293细胞系是源自人胚肾组织的宿主细胞,其高水平的瞬时转染效率和较短的表达周期使其在科研快速验证阶段非常受欢迎。 在瞬时转染模式下,HEK293细胞可在数天内表达大量重组蛋白,适合快速筛选表达构建体或评估功能。 表达体系的配套试剂还包括高效的转染试剂(如PEI、脂质体类转染介质)、无血清培养基、抗生素筛选剂等,它们共同构成了完整的哺乳动物蛋白表达工具包。 通过合理选择表达策略、表达载体及配套试剂,并结合现代蛋白纯化和定量分析技术,这些体系能够持续为科研提供高质量的重组蛋白试剂支持。
小 M 为大家整理了抽提的主要试剂及注意事项,可自行点赞收藏喔~表 2. 提取主要试剂、原理与注意事项。1细胞培养小M已做过细胞培养相关推文 (详见往期推文:实验操作 | 小白第一课! 2分组(1) 正常对照组 (C):正常培养 SH-SY5Y 细胞。(2) 阴性对照组 (NC):SH-SY5Y 细胞转染阴性对照质粒。 (3) 过表达组 (PC):SH-SY5Y 细胞转染过表达质粒。 转染 48 h 后,荧光显微镜下观察其 GFP 的表达情况及统计其转染效率 (对明场及暗场荧光细胞计数,得:转染效率 = 暗场荧光细胞个数 / 明场细胞个数;也可通过流式等观察统计其转染情况)。 MCE 转染1RT-PCR▐ 实时荧光定量 PCR(RT-PCR)检测 EGFP-Parkin mRNA 的表达水平大家可根据购买的试剂盒进行操作,小 M 在下方为大家整理了文献中的操作步骤,供大家参考 文献参考步骤[1]:(1) 蛋白提取、定量及变性:BCA 蛋白定量试剂盒提取蛋白并检测蛋白浓度。
2. 表达载体与调控元素表达载体是 TGE 的核心,通常包含启动子、增强子、转录终止信号及选择标记等元素。 转染方法与试剂在 TGE 中,非病毒转染方法被广泛采用,其中聚乙烯亚胺(PEI)因价格低廉和操作简便而成为首选。脂质体试剂也能提供较高的转染效率,但成本相对较高。 对于难以转染的细胞,电穿孔和其他物理方法可以作为补充。在一些特定情况下,病毒载体(如腺病毒、杆状病毒)也被用于辅助转染,以提高转染效率和基因导入量。4. 2. 蛋白分泌信号与融合标签设计对于分泌型蛋白,信号肽的选择会显著影响分泌效率和最终产量。研究者对不同信号肽进行比较,发现一些优化信号肽能够在 CHO 和 HEK293 系统中显著提高分泌蛋白的水平。 转染工艺和培养流程优化转染时的 DNA/试剂比例、细胞密度、培养基成分等因素均会影响表达效率。通过优化这些工艺参数,可以显著提高产量并改善细胞状态。
CAS9稳转细胞的构建 实验流程 制备慢病毒穿梭质粒及辅助包装质粒,用无内毒素的试剂盒抽提,共转染 293T 细胞,转染后 18小时后更换为完全培养基,培养 48 小时后,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液 实验材料:慢病毒载体、包装细胞和菌株 包装质粒 pSPAX2, pMD2G, pLenti-CAS9-puro。 包装细胞 293T细胞。 转染体系:pLenti-CAS9-puro,pSPAX2, pMD2G按照4:3:1的比例(2μg,1.5μg和0.5μg)混匀,再与转染试剂混匀加入前天准备好的293T细胞中,钙转或PEI转染,293T 转染18~24小时后,更换为新鲜培养基。 病毒收集:转染后 48 小时收集病毒上清,0.45 μm滤器过滤,2mL EP管中,4℃,3000g/min 离心 5分钟。 第四步,抽提基因组和PCR扩增 完成靶细胞的富集和扩大培养后,抽提细胞基因组,这个市面上有很多试剂盒。接下来实验的关键是要做PCR扩增。模板是抽提得到的基因组,引物是什么呢?
目前存在多种转染方法,选择合适的方法取决于其是否适合您的特定需求。之前使用过 电转和脂质体转染。 1.电转对细胞损伤大,也需要足够量的细胞基数,不适用于微量细胞;2.脂质体转染主要适用于贴壁细胞,原代悬浮细胞不适用。LONZA 4D核转技术相对而言更适用于原代悬浮细胞。 关于敲除程序的选择,可以在LONZA官网查找LONZA官网给出了很多转染技术以及不同细胞类型的转染具体信息,可参考下面的网址Knowledge Center | Lonza例如DC细胞的转染protocol :cells (请注意其platform的信息,具体是否为4D,比如DC细胞这个平台即为Ⅰ/Ⅱ/2b,而不是4D,如果需要使用4D,具体还是需要参考4D platform的protocol;如果适用于自己的实验要求 此外具体实验的操作步骤,还需要结合自己具体的试剂 和 substrate说明书进行调整或改善。
2. 期刊:International Journal of Molecular Sciences . 3. ZETA life转染试剂应用: ● 转染细胞:Huh7(肝癌细胞)、THP-1(单核细胞,分化为M0/M1/M2巨噬细胞)。 ● 转染基因: ◦ Huh7细胞:过表达BAMBI(BAMBI质粒)、敲低BAMBI(shR-BAMBI)。 实验数据与解读: ● Huh7细胞转染(图4A): ◦ 过表达BAMBI显著上调SLC2A1、PIGQ、PKM、LDHA(糖酵解基因)及SIRT1、ACACA(脂代谢基因); ◦ 敲低 ● THP-1分化实验(图9A-B): ◦ M1巨噬细胞中BAMBI表达高于M0,M2无显著差异; ◦ 过表达BAMBI促进THP-1向M1极化(CD11c、IL-12升高),敲低则抑制
2. 外源基因引入与高效转染将构建完成的过表达系统引入宿主细胞,是实现基因过表达的首要步骤。科研实验中,高效转染是确保足够比例细胞获得外源基因的技术前提。 常见的转染方式包括:脂质体介导转染:通过阳离子脂质体与核酸形成复合物,被细胞吞噬后释放至胞内;电穿孔法:利用短暂电脉冲在细胞膜上形成可逆孔洞,使DNA直接进入细胞;病毒介导转导:借助病毒载体将目的基因高效导入细胞并实现基因组整合 在这些技术中,转染试剂的选择和使用对转染效率、细胞状态以及后续筛选效果具有直接影响,是过表达细胞系构建中不可忽视的技术环节。3. 这些检测方法依赖于高质量的抗体、引物、标准品等科研试剂,其性能直接影响数据的重复性与可靠性。6. 细胞培养与支持条件基因过表达细胞系的稳定维持还依赖于适宜的细胞培养环境。 Commun. 13, 4189 (2022).2.Huang, L. & Zhao, Y.
当ERK1/2被上游信号磷酸化并激活后,会转位至细胞核内,磷酸化并激活三元复合物因子(如Elk-1)。激活的转录因子复合物与报告质粒上的SRE序列特异性结合,从而驱动荧光素酶基因的转录与表达。 三、UA-Glo®Bio-lucLuciferaseAssaySystem的技术优势为了确保检测结果的准确性、灵敏度与可重复性,选择合适的检测试剂盒至关重要。 2.稳定性与均一性:试剂设计确保了发光信号的稳定性,有效减少因信号衰减带来的读数误差,并保障了多孔板检测中孔间信号的均一性,提高了数据的可靠性。 3.兼容性与便捷性:该系统与多种细胞裂解方法兼容,操作步骤简便,试剂即用即取,适合自动化工作站操作,能显著提升实验效率。 2.细胞转染与处理:将构建好的SCD1启动子报告质粒与作为内参的海肾荧光素酶报告质粒共转染至合适的细胞系(如HepG2细胞)。转染后,用目标化合物(如黄连素)处理细胞。
HEK293表达系统则更灵活,转染效率高,适合做抗体快速表达和初期筛选。不同细胞系有各自的特点和适用场景,选择合适的哺乳动物细胞表达平台对后续的抗体质量和产量都有重要影响。 瞬时转染技术的优势瞬时转染是快速表达重组抗体的常用方法。通过把抗体基因片段导入细胞,不用建立稳定株,就能在几天内获得大量蛋白。这对于抗体快速表达和功能验证很有帮助。 尽管表达时间短,但如果优化转染条件,依然可以获得不错的产量。稳定细胞株构建相比瞬时转染,稳定细胞株构建更适合长期抗体生产。过程包括载体整合、筛选单克隆细胞、表达验证等。 抗体表达平台依托CHO和HEK293等哺乳动物细胞表达系统,结合瞬时转染和稳定细胞株构建技术,可以满足从抗体快速表达到大规模生产的不同需求。 Q2: 瞬时转染技术如何保证抗体快速表达的效率?A: 瞬时转染通过优化转染试剂、质粒载体设计及细胞状态,最大化表达效率。虽然表达时间短(通常数天),但可快速获得高水平抗体,适合筛选和早期实验。
CTG 法检测原理 ■ 案例 1:细胞增殖测定如图 3 所示,为了探究 SIPL1 对 TNBC 细胞增殖的影响,将 SIPL1 表达载体转染至 BT-549 与 MDA-MB-231 细胞, 并使用 CCK-8 检测:TNBC 细胞瞬时转染 shRNA 或过表达质粒并培养 24 h 后检测。CTG 发光细胞活力测定:TNBC 细胞在 37°C 下培养过夜。 结果显示,转染靶向 SIPL1 shRNAs 的 BT-549 和 MDA-MB-231 细胞系的细胞增殖显著降低 (图 3)。 综上检测结果表明,MCE CTG 试剂盒可实现稳定、灵敏、批次间差异较小的不同细胞系的细胞活力检测。表 2. 冻融时,可能会导致试剂中出现少量沉淀,可平衡至室温后观测沉淀溶解情况,如仍有残留,可离心后去除。2. 本产品在使用或分装时所使用耗材应注意避免 ATP 污染。3.
引入了jasypt-spring-boot-starter的jar包之后,项目启动的时候,是如何加载jasypt的呢? 这利用的是项目启动类上的一个注解@SpringBootApplication,这个注解中引用了@EnableAutoConfiguration注解。
AbMole为全球科研客户提供高纯度、高生物活性的抑制剂、细胞因子、人源单抗、天然产物、荧光染料、多肽、靶点蛋白、化合物库、抗生素等科研试剂,全球大量文献专利引用。 在真核细胞转染或者原核转化中,实验人员可以选择Neo基因(编码氨基糖苷磷酸转移酶,APH)作为筛选标记,与目的基因串联一起进行转染/转化。 成功转染的细胞即可获得对 G-418 的抗性。 G418结构式二、G-418用于稳定转染细胞筛选在细胞生物学研究中,稳定转染细胞系的建立是深入研究基因功能、信号通路等的重要手段。 图2. The effect of SPATA4 on adipocyte differentiation[1].参考文献及鸣谢[1] Z. Li, K. Xu, S.
Corn oil试剂 玉米介绍Corn oil 是从玉米胚芽中提取出来的一种油,可作为活性分子分子的载体;CAS:8001-30-7作为生化试剂,其最主要用途是作为脂溶性化合物的载体。 其多功能性使其横跨生命科学、生物制药、兽医研发等多个领域,成为连接脂 类基础研究与应用开发的关键试剂。 Corn oil 更推荐用于灌胃[4]腹腔内涂抹 Corn oil 会导致局部炎症,同时消耗常驻腹腔巨噬细胞[5]Corn oil试剂文献参考1、Liver-targeted degradation of TGF-β 激活的 LX-2 细胞经 XZ1606 治疗后,纤维化标志物显著减少,与 BRD4 水平的降低相关。 随后,实验数据证实了 GSN 与 MDM2 的共表达关系,并发现 GSN 通过 MDM2 促进 P53 的泛素化及其后续降解,而 P53 的降解是肝脏保护的关键过程。