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【免疫学实验】“Western Blot”的前世今生:免疫印迹技术简述
在生物医学实验室中，免疫印迹（Immunoblotting），也就是大家耳熟能详的 Western Blot（WB），是一项不可或缺的“明星技术”。 它与我们之前介绍的免疫沉淀（IP）技术一样，都是为了鉴定细胞裂解液中的特定蛋白质。但相比于IP，WB有着独特的优势。 ⚖️ 一、 为什么选择免疫印迹？ 免疫沉淀通常需要利用放射性同位素标记细胞，这对于实验条件和安全性都有较高要求。 而免疫印迹技术巧妙地避开了这一难题。它不需要对细胞进行放射性标记，而是通过“分离-转移-检测”三部曲来锁定目标蛋白。 转移（印迹）： 电泳结束后，将凝胶中的蛋白质通过电转印技术，转移到一种稳定的固相载体（通常是硝酸纤维素膜或PVDF膜）上。 检测： 这一步与免疫荧光或ELISA类似。 三、 广泛的应用场景 免疫印迹技术因其特异性高、结果直观，在基础研究和临床诊断中都有着广泛的应用。 基础研究： 用于验证特定蛋白的表达量、分子量以及翻译后修饰情况。
64910编辑于 2025-12-29- 来自专栏生命科学
蛋白酶抑制剂 Cocktail 的 IP实验 WB实验参考文献 | MCE
TNFR1或VASN，并对TNFR1和VASN进行免疫印迹。 方法： 采用空间转录组学、免疫印迹、球体形成试验、极限稀释和基因表达分析来确定 TNFα对 GSC 自我更新的作用。 NF-κB p65 核易位促进结直肠癌进展全细胞裂解物和 EV 中 EVs 标志物和内质网标志物的蛋白质印迹分析。 3、Cell Mol Immunol. 2024 Aug 20. doi: 10.1038/s41423-024-01203-4.工程线粒体作为癌症疫苗平台发挥强大的抗肿瘤免疫作用在蛋白酶抑制剂混合物（ B16-F10 细胞线粒体中 OVA 或 TRP2 水平的免疫印迹分析，或用携带线粒体的模型抗原（OVA 或 TRP2）构建稳定的 B16-F10 细胞系。抗 VDAC1 用作负载控制。
35810编辑于 2025-09-22 - 来自专栏Linux基础入门
（4）分子生物学专业名词
4、亚基：一条肽链通过α折叠和β转角形成具有特定构象的蛋白质（称为三级结构）。由两条或两条以上的，具有三级结构的球状蛋白质通过非共价键，彼此配合在一起聚合成的特定的构象称四级结构。 10、核转运蛋白：一组与转运分子穿过核孔复合体进入或输出核有关的蛋白质。既可与运载物结合，也可被核孔蛋白所识别和结合，协助运载物穿过核孔。 15、免疫印迹分析（immunoblotting），又称蛋白质印迹（Western blotting），根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法，是一种免疫生化技术。 免疫印迹法是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术。 免疫印迹法具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点，是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法，如组织抗原的定性定量检测、多肽分子的质量测定及病毒的抗体或抗原检测等。 ?
1.6K41发布于 2020-08-26 - 来自专栏生命科学
蛋白 AG 磁珠免疫沉淀（IP）实验 精选参考文献｜MCE
然后加入制备的蛋白质上清液，并将与磁珠缀合的抗体和蛋白质在翻转混合器上于4°C温育2小时。 细胞质YAP 1与ESCRT-III复合物亚基带电多泡体蛋白2 B（CHMP 2 B）和液泡蛋白分选4同源物B（VPS 4 B）结合，促进CHMP 2 B-VPS 4 B的组装并激活自噬体形成。 免疫印迹显示来自喂食对照饮食或KD 5周的雄性小鼠的肝脏中ALDOB的Kbhb或Kac。用来自小鼠肝全细胞裂解物的泛Kbhb或泛Kac抗体进行免疫沉淀。 6、Cell Mol Immunol. 2023 Mar;20(3):292-304.用IL-17 A（100 ng/ml）处理的HaCaT细胞中抗FXYD 3或TRAF 3抗体的蛋白免疫沉淀（IP）的免疫印迹分析 用针对Myc-标签或Flag-标签的抗体免疫沉淀蛋白质提取物，然后用指定的抗体进行免疫印迹。
41410编辑于 2025-09-10 - 来自专栏科研猫
已经功成名就！杰出学者王雅不做/少做实验，伪造数据，被抓学术不端，将被撤回多篇高水平文章
ORI 发现王雅通过重复使用和重新标记相同的图像来代表 DNA 损伤和修复的哺乳动物组织培养模型中的不同实验条件图像，故意、有意和/或无意伪造蛋白质免疫印迹数据。 具体来说： 通过重复使用免疫印迹条带并重新标记它们以代表两 (2) 篇论文中的十一 (11) 个图形面板中的不同实验，不同转基因小鼠细胞系中总蛋白表达的蛋白质印迹图像被伪造，包括： Figure 3D (5) 篇论文中的七 (7) 个图形面板和一 (1) 个基金申请中的不同实验，对遭受基因耗竭和/或过度表达的人类细胞系中总蛋白表达的蛋白质印迹图像进行了伪造，包括： Figure 4A in NIH levels in human glioblastoma-derived cells with or without gene depletion 来自用对照或表达载体转染的小鼠细胞系中染色质 DNA 复合物的蛋白质的蛋白质印迹图像 ，在不存在或存在照射的情况下通过重复使用免疫印迹条带并重新标记它们以代表1篇文章三 (3) 个图形面板，包括： Figure 3 in J Biol Chem. 2014, representing chromatin-bound
79530发布于 2021-09-29 常规裂解液如何选择以优化蛋白质印迹样品质量？
一、为何蛋白质样品制备是蛋白质印迹成功的关键？蛋白质印迹技术是分子生物学与细胞生物学研究中不可或缺的分析手段，其成功高度依赖于起始蛋白质样品的质量。 此类裂解液以非离子型去垢剂为主，其裂解作用温和，能有效破碎细胞膜并释放胞质可溶蛋白及部分膜结合蛋白，同时最大程度地保持蛋白质的天然构象、酶活性以及蛋白质-蛋白质相互作用。 它适用于需要进行免疫共沉淀、Pull-down等蛋白互作研究，或需要检测蛋白质天然状态的情况。第二类，中等强度裂解液。以成分为主的裂解液是此类典型代表，也是实验室中最常用的类型。 它通常含有非离子与离子型去垢剂的混合成分，裂解能力较强，能有效提取包括部分核蛋白和膜蛋白在内的多种蛋白，同时其变性程度可控，在多数情况下能较好地平衡提取效率与蛋白免疫原性的保持，适用于常规的蛋白质印迹分析 对于强变性裂解液提取的样品，由于蛋白质已完全变性且浓度可能较高，在进行蛋白质印迹上样前，需精确测定蛋白浓度，并合理调整上样量，避免因上样过量导致电泳条带拖尾、弥散或转膜不均。
17110编辑于 2026-03-09- 来自专栏生命科学
奥密克戎——突变趋势可预测| MedChemExpress
SARS-CoV-2 由包膜蛋白 (Envelope)、核衣壳蛋白 (Nucleocapsid)、刺突蛋白 (Spike)、膜蛋白 (Membrane) 4 种结构蛋白组成，病毒通过其表面的刺突蛋白与受体 “免疫印迹”效应诱导趋同进化为研究 RBD 趋同进化的原因，研究者表征了 Omicron BA.2 和 BA.5 突破性感染 (新冠疫苗接种者以及 Omicron 感染康复者体内都能建立免疫保护屏障；突破性感染指机体在建立自身免疫保护屏障后依旧被病毒感染 这说明 Omicron 趋同进化过程中存在“免疫印迹”效应 (或称抗原原罪)。抗原原罪：首次感染病毒株时，免疫系统产生针对其主要抗原的有效抗体，从而消除感染。 该研究从新冠疫苗接种者、疫苗接种后的新冠康复者以及 BA.1 感染康复者体内分离出抗体，并根据表位分布对抗体进行分组 (图 4a)。 然而野生型康复者激发的抗体富含 A、B 和 C 组的抗体 (图 4b)，它们与 ACE2 竞争，表现出强的中和效力。
49000编辑于 2023-03-28 【免疫学实验】揭秘蛋白互作：免疫沉淀与免疫共沉淀
一、 免疫沉淀（IP）：精准捕获目标蛋白 免疫沉淀是利用抗体从复杂的混合物中分离特定蛋白质的技术。 1. 这种方法可以将复杂混合物中的数百个蛋白质点清晰地分开，用于分析蛋白质的等电点、丰度及翻译后修饰（如分子量变化）。 免疫沉淀与 SDS-PAGE 分析 免疫沉淀法用于从细胞裂解液中富集特定抗原。 最后通过放射自显影（或显色）确定蛋白位置 三、 免疫共沉淀（Co-IP）：验证蛋白互作 如果说免疫沉淀是“抓单个”，那么免疫共沉淀就是“抓团伙”。 验证： 将沉淀下来的复合物进行电泳和免疫印迹（Western Blot），使用蛋白B的抗体进行检测。 结论： 如果在沉淀物中检测到了蛋白B，说明蛋白A与蛋白B在细胞内发生了物理结合。 总结 免疫沉淀技术不仅帮助我们纯化和鉴定蛋白质（分子量、等电点），更是通过免疫共沉淀技术，成为了揭示蛋白质之间物理相互作用的金标准实验方法。
48210编辑于 2025-12-29- 来自专栏生信菜鸟团
【生信文献200篇】18 新的抑癌基因LHPP
确定了每个肿瘤大约4,500种蛋白质 与对照相比，在至少10个肿瘤中检测到433种蛋白质被上调，而262种蛋白质被下调 ? 至少十种肿瘤中显著失调的已知或可能的磷酸酶和激酶 ? L-dKO肿瘤中LHPP被下调，NME1和NME2被上调 对在Ser240和Ser244磷酸化的S6蛋白（S6-pS240 / 244）和在Ser473磷酸化的AKT（AKT-pS473）进行的免疫印迹分析分别证实了 与对照组织相比，肿瘤中1-pHis和3-pHis的免疫印迹信号均较高 NME1和NME2通常会自磷酸化His118的N1位，然后将该磷酸转移到目标蛋白中的组氨酸（N1或N3）上。 通过免疫印迹证实了在AAV-LHPP感染的L-dKO小鼠（20周）的肝中LHPP的过表达 ? AAV-LHPP的L-dKO小鼠几乎没有小肿瘤 ? 与免疫印迹分析一致，免疫组化显示，与另外两名患者的相邻非肿瘤组织相比，HCC中LHPP表达低而NME1和NME2表达高 ? 与匹配的非肿瘤组织相比，肝癌中LHPP的表达显著下调 ?
1.5K20发布于 2021-03-04 - 来自专栏生信菜鸟团
围绕中性粒细胞，生信能做什么
方法：我们利用高分辨率质谱（HRMS）、先进的计算工具和Western印迹进行了深度蛋白质组学分析，以验证蛋白质组学数据。 此外，CCL4、CCL5 和 CCL21 的失调与临床分期密切相关，而 CCL4、CCL11 和 CCL28 水平的升高与 CRC 患者生存期的明显延长有关。 CCLs（CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL11、CCL21 和 CCL28）与主要浸润相关免疫细胞（包括 B 细胞、CD8+ T 细胞、CD4+ T 细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞 方法：通过生物信息学、Western 印迹和免疫组织化学方法评估了 IGF2BP2 在 LUAD 患者标本和对照组中的表达。 利用STRING数据库构建了SULT1E1蛋白相互作用网络。为了进行功能富集和免疫浸润分析，采用了TCGA的LUAD数据集。
41310编辑于 2025-02-18 KRAS Q61H与cRAF结合检测试剂盒的技术解析
KRAS蛋白通过结合GTP激活下游效应因子，其中RAF激酶家族是最主要的效应分子之一。在KRAS众多突变亚型中，Q61H突变因显著改变蛋白构象并增强与cRAF的相互作用而备受关注。 待测样本中的KRASQ61H突变蛋白在特定缓冲体系下与cRAF结合域发生特异性相互作用，通过离心分离去除未结合成分后，利用SDS-PAGE电泳及免疫印迹法对结合产物进行定量检测。 结合反应在4℃条件下进行，孵育时间需精确控制。过短的反应时间会导致结合不充分，而过长的孵育则会增加非特异性背景。 免疫印迹检测环节需注意上样量的一致性，电泳转移效率需通过丽春红染色或内参蛋白检测进行验证。化学发光信号的采集应在仪器线性范围内进行，避免信号过饱和影响定量准确性。 数据分析时应考虑样本间总蛋白表达量的差异，建议同时检测细胞裂解液中总KRAS蛋白水平，将结合信号与总蛋白信号进行标准化处理。
19610编辑于 2026-02-28- 来自专栏生信技能树
细胞通讯分析的背景知识
不同细胞类型和组织中的细胞之间相互作用(CCI)，主要是通过各种分子包括离子、代谢物、整联蛋白、受体、连接蛋白、结构蛋白、配体和细胞外基质的分泌蛋白来实现的。 主要是流程就是根据数据库记录的参与细胞间通讯的相互作用蛋白列表，筛选表达矩阵后，看配体和受体表达量根据某个评分函数的交流得分，多个配体和受体聚合成为细胞与细胞之间的总体交互状态，最后通过网络可视化展现出来 数据库大全 数据库记录着参与细胞间通讯的相互作用蛋白列表，最常用的蛋白-蛋白的相互作用(PPI)是string数据库，但是 软件工具算法大全 主要是分成4种 基于差异分析 基于网络连通 基于表达量排序 就有必要进行一定程度的验证了，主要是下面的3种： 通过蛋白质组学，酶联免疫吸附测定，蛋白质印迹或免疫组化可以看蛋白质表达情况 通过显微镜结合免疫染色，单分子荧光原位杂交或通过流式细胞术测量共存看相邻细胞的作用关系
1.4K32发布于 2020-12-17 AbMole| BS3助力揭秘衣康酸转运体ABCG2抑制免疫抗菌能力
衣康酸是一种由免疫应答基因1(IRG1)对TCA循环中间产物顺乌头酸进行脱羧而合成的代谢产物，随后被转运到细胞质中，从而在巨噬细胞中发挥多种调节作用。然而，衣康酸从巨噬细胞中排出的机制仍不清楚。 免疫印迹和生化分析结果表明，在 LPS 刺激下，ABCG2/Abcg2 基因敲除（KO）不会改变IRG1的水平，但是细胞内衣康酸水平升高，而培养上清液中的衣康酸水平下降，提示 ABCG2 能促进衣康酸从 此外，免疫印迹分析和ELISA结果表明，ABCG2/Abcg2的缺失，在LPS刺激下会升高NRF2和ATF3的蛋白水平，抑制IL-1b 分泌。 结果表明，ABCG2 的缺失会以 IRG1 依赖性的方式促进体内的先天免疫抗菌防御。 本研究使用了Bis(sulfosuccinimidyl)suberate(BS3，M9872)，BS3是一种活性交联剂，常用于蛋白质、多肽和细胞表面的交联反应中。
16810编辑于 2025-12-23CKS1 GST Tag融合蛋白：细胞周期调控机制研究的核心工具
一、CKS1蛋白的生物学功能与调控机制CKS1是细胞周期调控网络中不可或缺的衔接蛋白，其主要功能是作为桥梁分子，将关键的细胞周期蛋白依赖性激酶与泛素连接酶复合物进行特异性连接。 二、CKS1GSTTag融合蛋白的表达与纯化策略为获得高纯度、高活性的CKS1重组蛋白用于体外研究，常采用融合蛋白表达系统。 3.功能抗体开发与筛选：高纯度的CKS1GSTTag蛋白可作为优质的免疫原，用于制备高特异性的多克隆或单克隆抗体。 这些抗体进一步可用于免疫沉淀、免疫印迹、免疫组织化学染色以及流式细胞术等，以研究内源性CKS1在不同生理及病理状态下的表达水平、亚细胞定位及修饰变化。 4.酶活性调控分析：利用重组CKS1蛋白，可在体外激酶反应体系中，研究其对CDK-Cyclin复合物激酶活性的调节作用，或探索其如何影响激酶对特定底物的识别与磷酸化效率。
17310编辑于 2026-02-13- 来自专栏生命科学
中药单体库 ｜ 高通量药筛化合物库| MedChemExpress
通过液相色谱和质谱分析进一步鉴定Hit 化合物，并通过蛋白免疫印迹 (Western blotting) 和免疫荧光初步探索其作用机制 (图 2)。 然后，结合高效液相色谱-质谱 (HPLC-MS)、蛋白质印迹法 (Western blot) 和免疫荧光，最终鉴定出 3 个具有良好抗病毒活性的 hit 化合物，并对其作用机制进行了探讨。 并且进行了表面等离子共振分析，蛋白质印迹和免疫组织化学和体内异种移植肿瘤生长实验等，以确定化合物在 CSC 中的潜在机制 (图 3)。 最终从根生植物 Tacca. subflabellata 中鉴定出 Taccaoside A 可作为潜在的抗 CSC 药物的先导化合物[4]。 validation from traditional Chinese medicine Zhongjing formulary.Pharmacol Res. 2019 Jul;145:104248.[4]
80710编辑于 2023-03-29 - 来自专栏量子位
少糖的理由＋1，新研究表明：高糖环境不利于肌肉修复和维持
△在两种葡萄糖培养基中原代卫星细胞的增殖 团队还使用荧光分析，观察Ki67（细胞增殖标志物）阳性细胞所占比例，以及使用免疫印迹法分析Ki67蛋白的表达水平： ? △Ki67阳性细胞观察、Ki67蛋白表达的蛋白质印迹 结果显示，二者在低糖环境中的值均高于高糖环境： ? △Ki67阳性细胞占比、蛋白质印迹分析结果 此外，利用EdU脉冲追踪测定的结果表明：低葡萄糖培养基中生长的卫星细胞，具有更高的EdU阳性细胞数量。 ? 不仅如此，衍生的成肌细胞在培养后，能融合并表达MHC蛋白，这证明了它们还具有分化能力。 ? 由于低葡萄糖可能会降低细胞的能量水平，因此生物能量代谢调节的关键分子——AMP激活的蛋白激酶（AMPK），可能在细胞增殖中起了作用。
58720发布于 2021-04-23 - 来自专栏医学数据库百科
人类蛋白免疫组化表达数据库
写在前面 我们在进行基因的蛋白表达检测的时候，通常的方法是进行western blot以及免疫组化进行检测的。 对于某一个蛋白免疫组化的结果呈现，数据库是分成了四个分类来呈现的，分别是：没有检测到、低表达、中表达以及高表达。、 ? 数据库使用 数据库的使用和基因的检索数据库是一样的。 其中对于某一个组织当中详细的免疫组化的染色情况，我们可以点击具体的部位，然后就可以看到其组织免疫组化的具体图片了。 ? 2. 蛋白表达定位情况 在 CELL部分，我们可以看到这个蛋白在细胞当中的什么部位表达，通过蛋白的表达位置来确定这个蛋白可能具有的功能。 ? 3. 通过以上的查询，我们就可以了解我们目标蛋白在某一个癌种当中的表达情况怎么样了。但是相对来说，这个数据库对于正常样本的免疫组化也就是做了两三个，然后对于癌症的话也就是十几个样本。
3.8K40发布于 2020-07-16 - 来自专栏生命科学
免疫沉淀常见问题解答 | MedChemExpress
抗原样品应始终保存在冰上，并将蛋白酶抑制剂 添加到裂解液中以防止蛋白水解。注 1：Co-IP 实验时，常用 NP-40 等非离子型裂解液，以免破坏蛋白-蛋白相互作用。 ■ Step 3——抗原洗脱一般根据下游应用选择洗脱方法：1) 变性洗脱法：如果下游分析是用免疫印迹 (Western Blot)，则通常直接使用 SDS-PAGE Loading Buffer 进行洗脱 ■ Step 4——WB 验证设计好实验，优化好条件，配好各种 buffer 和工作液，按照 protocol，小心翼翼的丝毫不敢怠慢，一通操作猛如虎，一看结果。 抗体污染问题：参考前面关于抗体交联固定的讨论或使用不同种属的一抗进行 IP 和蛋白质免疫印迹检测；e. 使用恰当的蛋白酶抑制剂，防止蛋白降解；f. 阳性对照：证实细胞裂解物中确实存在靶蛋白 (IP) 或者互作蛋白对 (Co-IP，比如诱饵蛋白 X 和靶蛋白 Y)，即为常说的 input。
77920编辑于 2023-02-03 - 来自专栏全栈程序员必看
常用分子生物学实验技术–整理「建议收藏」
一次试验中可同时检测几百甚至几千种目标蛋白或多肽。 （3）免疫印迹技术 Western blotting：利用抗原抗体特异反应的原理。 （4）免疫共沉定技术（co-immunoprecipitation，Co-IP） （5）GST pull-down技术 （6）生物信息学预测蛋白质 核酸分子杂交（nucleic acid （4）人工合成的寡核苷酸探针：如果只知道蛋白质的氨基酸排列顺序，而不知其编码基因的碱基顺序，可以利用人工合成的寡核苷酸探针来探查未知基因的序列。 核酸分子杂交的类型： （1）Southern印迹杂交：将电泳分离的待测DNA片段转移并结合到一定的固相支持物上，并与标记过的DNA探针进行杂交检测的一种方法。 （2）Northern印记杂交：检测样品的RNA的一种印迹方法。 （3）原位杂交（ISH）：不改变核酸所在的位置，直接与探针进行杂交的方法。可分为组织原位杂交和菌落原位杂交。
3.4K13编辑于 2022-09-07 - 来自专栏纳米药物前沿
ACS AMI：一种三管齐下的协同治疗来增强抗肿瘤作用
首先，该团队采用无种子法成功合成了光热剂金纳米棒(GNRs)，并引入牛血清白蛋白(BSA)作为桥接剂，使其能够有效地负载DOX与Fe3+的络合物(DOX-Fe3+)，从而得到形貌为规则球形的纳米级GBD-Fe 免疫蛋白印迹实验明确了GBD-Fe对肿瘤细胞蛋白的调节作用。 (B) 免疫印迹检测 4T1细胞分别被PBS,DOX, DOX−Fe和GBD-Fe共孵育24 h后NOX4, BID和Bcl-2蛋白的表达水平。 通过免疫印迹结果定量分析 (C)NOX4，(D)BID和 (E)Bcl-2的表达水平。* p< 0.05, ** p < 0.01，和***p < 0.001。 化疗药物DOX诱导NOX4蛋白表达产生H2O2，并与Fe3+发生氧化还原反应，增强CDT的作用，改善GNRs的光热性能。
1.2K30编辑于 2022-08-15
腾讯云开发者
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