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【免疫学实验】“Western Blot”的前世今生:免疫印迹技术简述
在生物医学实验室中，免疫印迹（Immunoblotting），也就是大家耳熟能详的 Western Blot（WB），是一项不可或缺的“明星技术”。 它与我们之前介绍的免疫沉淀（IP）技术一样，都是为了鉴定细胞裂解液中的特定蛋白质。但相比于IP，WB有着独特的优势。 ⚖️ 一、 为什么选择免疫印迹？ 免疫沉淀通常需要利用放射性同位素标记细胞，这对于实验条件和安全性都有较高要求。 而免疫印迹技术巧妙地避开了这一难题。它不需要对细胞进行放射性标记，而是通过“分离-转移-检测”三部曲来锁定目标蛋白。 转移（印迹）： 电泳结束后，将凝胶中的蛋白质通过电转印技术，转移到一种稳定的固相载体（通常是硝酸纤维素膜或PVDF膜）上。 检测： 这一步与免疫荧光或ELISA类似。 三、 广泛的应用场景 免疫印迹技术因其特异性高、结果直观，在基础研究和临床诊断中都有着广泛的应用。 基础研究： 用于验证特定蛋白的表达量、分子量以及翻译后修饰情况。
50610编辑于 2025-12-29- 来自专栏生命科学
蛋白酶抑制剂 Cocktail 的 IP实验 WB实验参考文献 | MCE
可用于蛋白质免疫分析 (WB)、免疫沉淀 (IP)、免疫共沉淀 (Co-IP)、pull-down、免疫组织化学 (IHC)、免疫荧光 (IF)、激酶研究等多种分析。 TNFR1或VASN，并对TNFR1和VASN进行免疫印迹。 方法： 采用空间转录组学、免疫印迹、球体形成试验、极限稀释和基因表达分析来确定 TNFα对 GSC 自我更新的作用。 s12943-024-01985-1.治疗诱导的衰老肿瘤细胞来源的细胞外囊泡通过 SERPINE1 介导的 NF-κB p65 核易位促进结直肠癌进展全细胞裂解物和 EV 中 EVs 标志物和内质网标志物的蛋白质印迹分析 B16-F10 细胞线粒体中 OVA 或 TRP2 水平的免疫印迹分析，或用携带线粒体的模型抗原（OVA 或 TRP2）构建稳定的 B16-F10 细胞系。抗 VDAC1 用作负载控制。
30310编辑于 2025-09-22 - 来自专栏Linux基础入门
（4）分子生物学专业名词
其中每一条肽链（即每个球状蛋白质）称为亚基或亚单位。 5、同源二聚体：二聚蛋白质是由同一类型的亚基组成，称为同源二聚体。 10、核转运蛋白：一组与转运分子穿过核孔复合体进入或输出核有关的蛋白质。既可与运载物结合，也可被核孔蛋白所识别和结合，协助运载物穿过核孔。 15、免疫印迹分析（immunoblotting），又称蛋白质印迹（Western blotting），根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法，是一种免疫生化技术。 免疫印迹法是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术。 免疫印迹法具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点，是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法，如组织抗原的定性定量检测、多肽分子的质量测定及病毒的抗体或抗原检测等。 ?
1.5K41发布于 2020-08-26 常规裂解液如何选择以优化蛋白质印迹样品质量？
一、为何蛋白质样品制备是蛋白质印迹成功的关键？蛋白质印迹技术是分子生物学与细胞生物学研究中不可或缺的分析手段，其成功高度依赖于起始蛋白质样品的质量。 此类裂解液以非离子型去垢剂为主，其裂解作用温和，能有效破碎细胞膜并释放胞质可溶蛋白及部分膜结合蛋白，同时最大程度地保持蛋白质的天然构象、酶活性以及蛋白质-蛋白质相互作用。 它适用于需要进行免疫共沉淀、Pull-down等蛋白互作研究，或需要检测蛋白质天然状态的情况。第二类，中等强度裂解液。以成分为主的裂解液是此类典型代表，也是实验室中最常用的类型。 它通常含有非离子与离子型去垢剂的混合成分，裂解能力较强，能有效提取包括部分核蛋白和膜蛋白在内的多种蛋白，同时其变性程度可控，在多数情况下能较好地平衡提取效率与蛋白免疫原性的保持，适用于常规的蛋白质印迹分析 对于强变性裂解液提取的样品，由于蛋白质已完全变性且浓度可能较高，在进行蛋白质印迹上样前，需精确测定蛋白浓度，并合理调整上样量，避免因上样过量导致电泳条带拖尾、弥散或转膜不均。
11710编辑于 2026-03-09- 来自专栏生命科学
蛋白 AG 磁珠免疫沉淀（IP）实验 精选参考文献｜MCE
MCE 蛋白质 A/G 磁珠通常用于从血清、细胞培养上清或腹水中分离抗体，以及从细胞或组织提取物中免疫沉淀和共免疫沉淀抗原。Free Sample (200 μL）限时可申请试用。 免疫印迹显示来自喂食对照饮食或KD 5周的雄性小鼠的肝脏中ALDOB的Kbhb或Kac。用来自小鼠肝全细胞裂解物的泛Kbhb或泛Kac抗体进行免疫沉淀。 5、去整合素和金属蛋白酶22通过其去整合素结构域激活整合素β1促进垂体腺瘤的进展Neuro Oncol. 2024 Jan 5;26(1):137-152.将上清液用与蛋白A/G磁珠预结合的抗体免疫沉淀 6、Cell Mol Immunol. 2023 Mar;20(3):292-304.用IL-17 A（100 ng/ml）处理的HaCaT细胞中抗FXYD 3或TRAF 3抗体的蛋白免疫沉淀（IP）的免疫印迹分析 用针对Myc-标签或Flag-标签的抗体免疫沉淀蛋白质提取物，然后用指定的抗体进行免疫印迹。
37110编辑于 2025-09-10 - 来自专栏科研猫
已经功成名就！杰出学者王雅不做/少做实验，伪造数据，被抓学术不端，将被撤回多篇高水平文章
ORI 发现王雅通过重复使用和重新标记相同的图像来代表 DNA 损伤和修复的哺乳动物组织培养模型中的不同实验条件图像，故意、有意和/或无意伪造蛋白质免疫印迹数据。 具体来说： 通过重复使用免疫印迹条带并重新标记它们以代表两 (2) 篇论文中的十一 (11) 个图形面板中的不同实验，不同转基因小鼠细胞系中总蛋白表达的蛋白质印迹图像被伪造，包括： Figure 3D (5) 篇论文中的七 (7) 个图形面板和一 (1) 个基金申请中的不同实验，对遭受基因耗竭和/或过度表达的人类细胞系中总蛋白表达的蛋白质印迹图像进行了伪造，包括： Figure 4A in NIH levels in human glioblastoma-derived cells with or without gene depletion 来自用对照或表达载体转染的小鼠细胞系中染色质 DNA 复合物的蛋白质的蛋白质印迹图像 ，在不存在或存在照射的情况下通过重复使用免疫印迹条带并重新标记它们以代表1篇文章三 (3) 个图形面板，包括： Figure 3 in J Biol Chem. 2014, representing chromatin-bound
73530发布于 2021-09-29 - 来自专栏流式抗体推文
目的细胞少信号弱？Elab Fluor® Violet 450 标记抗小鼠 Ig light chain κ 抗体[187.1]，精准捕获目标信号不遗漏！
产品介绍核心信息：单克隆抗体，克隆号 187.1，亚型为 Rat IgG1, κ，仅与小鼠免疫球蛋白 κ 轻链反应，交叉反应性明确。 储存条件：2-8℃冷藏可保存 12 个月，需避免长时间光照和冷冻，运输过程采用冰袋保鲜。 背景介绍187.1单克隆抗体与小鼠免疫球蛋白轻链的kappa链反应。κ链是构成免疫球蛋白轻链的两种多肽亚基之一。典型的抗体由两条免疫球蛋白重链和两条免疫球蛋白轻链组成。 这些基因经过V(D)J重组产生多种免疫球蛋白。 稳定性好：2-8℃冷藏可长期保存，无需冷冻，避免反复冻融导致的活性下降。使用灵活：支持根据实验体系调整用量，配套专用试剂齐全，适配多种样本处理场景。
18310编辑于 2025-11-20 【免疫学实验】揭秘蛋白互作：免疫沉淀与免疫共沉淀
一、 免疫沉淀（IP）：精准捕获目标蛋白 免疫沉淀是利用抗体从复杂的混合物中分离特定蛋白质的技术。 1. 这种方法可以将复杂混合物中的数百个蛋白质点清晰地分开，用于分析蛋白质的等电点、丰度及翻译后修饰（如分子量变化）。 免疫沉淀与 SDS-PAGE 分析 免疫沉淀法用于从细胞裂解液中富集特定抗原。 最后通过放射自显影（或显色）确定蛋白位置 三、 免疫共沉淀（Co-IP）：验证蛋白互作 如果说免疫沉淀是“抓单个”，那么免疫共沉淀就是“抓团伙”。 验证： 将沉淀下来的复合物进行电泳和免疫印迹（Western Blot），使用蛋白B的抗体进行检测。 结论： 如果在沉淀物中检测到了蛋白B，说明蛋白A与蛋白B在细胞内发生了物理结合。 总结 免疫沉淀技术不仅帮助我们纯化和鉴定蛋白质（分子量、等电点），更是通过免疫共沉淀技术，成为了揭示蛋白质之间物理相互作用的金标准实验方法。
36210编辑于 2025-12-29胞内 / 核内检测细胞易损失？Elabscience PE/Cyanine5 标记抗小鼠 Ig light chain κ 抗体适配优化流程，少量
它以大鼠为宿主，针对小鼠免疫球蛋白 κ 轻链设计，适配流式细胞术（FCM）应用，凭借稳定的性能、清晰的检测信号和便捷的使用体验，成为免疫相关研究的优质工具，为科研人员提供可靠的实验支持。 储存与运输：储存于 2-8℃环境下可稳定保存 12 个月，需避免长时间光照和冷冻，运输过程采用冰袋保鲜。 背景介绍187.1单克隆抗体与小鼠免疫球蛋白轻链的kappa链反应。κ链是构成免疫球蛋白轻链的两种多肽亚基之一。典型的抗体由两条免疫球蛋白重链和两条免疫球蛋白轻链组成。 这些基因经过V(D)J重组产生多种免疫球蛋白。 稳定性高：严格的生产工艺确保产品批间一致性，2-8℃储存条件便于实验室常规保存。适配性广：可与多种流式实验流程兼容，支持细胞表面和胞内靶标检测，满足不同研究场景。
19810编辑于 2025-11-20- 来自专栏流式抗体推文
Elabscience PECyanine5 标记抗小鼠 Ig light chain κ 抗体，助力免疫机制研究
内容概要PE/Cyanine5 标记抗小鼠 Ig light chain κ 抗体[RMK-45]由 Elabscience 研发生产，是针对小鼠免疫球蛋白 κ 轻链的单克隆抗体。 关键特性：仅与所有测试的小鼠单倍型（Igh-a 和 b）中的免疫球蛋白 κ 轻链反应，不与 λ 链交叉反应，特异性极强。 背景介绍免疫球蛋白轻链分为 κ 链和 λ 链两种类型，其表达与免疫细胞功能、免疫应答机制密切相关，是免疫相关研究的重要靶点。 检测原理PE/Cyanine5 作为荧光标记物，与抗小鼠 Ig κ 轻链单克隆抗体偶联后，可特异性结合样本中小鼠免疫球蛋白的 κ 轻链。 稳定性强：2-8℃可长期保存 12 个月，无需冷冻，运输和储存便捷。
27810编辑于 2025-11-12 - 来自专栏生命科学
奥密克戎——突变趋势可预测| MedChemExpress
研究表明，Omicron 在超过 85% (总测试中和抗体 247 种) 的中和抗体中展现出免疫逃逸特性[2]。Omicron 的持续进化使更具免疫逃逸能力的变异株陆续涌现。 SARS-CoV-2 由包膜蛋白 (Envelope)、核衣壳蛋白 (Nucleocapsid)、刺突蛋白 (Spike)、膜蛋白 (Membrane) 4 种结构蛋白组成，病毒通过其表面的刺突蛋白与受体 “免疫印迹”效应诱导趋同进化为研究 RBD 趋同进化的原因，研究者表征了 Omicron BA.2 和 BA.5 突破性感染 (新冠疫苗接种者以及 Omicron 感染康复者体内都能建立免疫保护屏障；突破性感染指机体在建立自身免疫保护屏障后依旧被病毒感染 这说明 Omicron 趋同进化过程中存在“免疫印迹”效应 (或称抗原原罪)。抗原原罪：首次感染病毒株时，免疫系统产生针对其主要抗原的有效抗体，从而消除感染。 但当后续感染同类型病毒株时，免疫系统仍产生针对首次感染病毒株的抗体，而非针对同类型新毒株抗原产生新的抗体。这导致产生无效的抗体，从而产生弱免疫力。
44200编辑于 2023-03-28 - 来自专栏生信菜鸟团
【生信文献200篇】18 新的抑癌基因LHPP
但事实上，因为紧邻胃肠道且需要过滤血液中很大一部分的抗原成分，肝脏的免疫环境非常特殊，免疫耐受尤为明显。而且很多肝癌患者一诊断出来就是晚期，肝脏已经严重受损，预后通常很差。 L-dKO肿瘤中LHPP被下调，NME1和NME2被上调 对在Ser240和Ser244磷酸化的S6蛋白（S6-pS240 / 244）和在Ser473磷酸化的AKT（AKT-pS473）进行的免疫印迹分析分别证实了 与对照组织相比，肿瘤中1-pHis和3-pHis的免疫印迹信号均较高 NME1和NME2通常会自磷酸化His118的N1位，然后将该磷酸转移到目标蛋白中的组氨酸（N1或N3）上。 通过免疫印迹证实了在AAV-LHPP感染的L-dKO小鼠（20周）的肝中LHPP的过表达 ? AAV-LHPP的L-dKO小鼠几乎没有小肿瘤 ? 与免疫印迹分析一致，免疫组化显示，与另外两名患者的相邻非肿瘤组织相比，HCC中LHPP表达低而NME1和NME2表达高 ? 与匹配的非肿瘤组织相比，肝癌中LHPP的表达显著下调 ?
1.4K20发布于 2021-03-04 AbMole| BS3助力揭秘衣康酸转运体ABCG2抑制免疫抗菌能力
衣康酸是一种由免疫应答基因1(IRG1)对TCA循环中间产物顺乌头酸进行脱羧而合成的代谢产物，随后被转运到细胞质中，从而在巨噬细胞中发挥多种调节作用。然而，衣康酸从巨噬细胞中排出的机制仍不清楚。 免疫印迹和生化分析结果表明，在 LPS 刺激下，ABCG2/Abcg2 基因敲除（KO）不会改变IRG1的水平，但是细胞内衣康酸水平升高，而培养上清液中的衣康酸水平下降，提示 ABCG2 能促进衣康酸从 此外，免疫印迹分析和ELISA结果表明，ABCG2/Abcg2的缺失，在LPS刺激下会升高NRF2和ATF3的蛋白水平，抑制IL-1b 分泌。 结果表明，ABCG2 的缺失会以 IRG1 依赖性的方式促进体内的先天免疫抗菌防御。 本研究使用了Bis(sulfosuccinimidyl)suberate(BS3，M9872)，BS3是一种活性交联剂，常用于蛋白质、多肽和细胞表面的交联反应中。
14410编辑于 2025-12-23- 来自专栏流式抗体推文
靶向 CCL2 通路研究！Elab Fluor® 647 标记抗人 CCL2 抗体[2H5]，赋能基础科研与药物研发
标记抗人 CCL2 抗体[2H5]（货号：AN00841M）是一款专为流式细胞术（FCM）打造的单克隆抗体，源自亚美尼亚仓鼠，以 Elab Fluor®647 为荧光标记，可特异性识别并结合人 CCL2 蛋白 存储与运输：2-8℃避光保存可稳定 12 个月，禁止冷冻，运输过程采用冰袋保鲜。 背景介绍CCL2（Chemokine (C-C motif) ligand 2）又称单核细胞趋化蛋白 - 1（MCP-1）、单核细胞趋化激活因子（MCAF），是 β（C-C）趋化因子亚家族的重要成员，对应 应用领域免疫细胞功能研究：如单核细胞、巨噬细胞等免疫细胞中 CCL2 的表达检测与功能分析。炎症疾病机制探索：包括感染性炎症、自身免疫性疾病等场景下，CCL2 介导的免疫应答研究。 稳定性佳：2-8℃长期保存可达 12 个月，无需冷冻，运输与储存条件宽松，减少抗体活性损失。规格灵活：提供多规格选择，满足不同实验规模需求，性价比高，适合常规实验与批量研究使用。
30010编辑于 2025-11-26 - 来自专栏生信菜鸟团
围绕中性粒细胞，生信能做什么
方法：我们利用高分辨率质谱（HRMS）、先进的计算工具和Western印迹进行了深度蛋白质组学分析，以验证蛋白质组学数据。 结果：与 10 名健康对照组相比，我们在 10 名子宫内膜癌（EC）患者的血清白蛋白贫化外泌体中鉴定出了 3628 个蛋白质。这是目前在子宫内膜癌血清外泌体中发现的数量最多的蛋白质。 方法：通过生物信息学、Western 印迹和免疫组织化学方法评估了 IGF2BP2 在 LUAD 患者标本和对照组中的表达。 利用STRING数据库构建了SULT1E1蛋白相互作用网络。为了进行功能富集和免疫浸润分析，采用了TCGA的LUAD数据集。 随后，通过 Western 印迹等方法检测了 SULT1E1 在 LUAD 细胞系、人类 LUAD 组织和正常组织中的表达水平。
37410编辑于 2025-02-18 KRAS Q61H与cRAF结合检测试剂盒的技术解析
KRAS蛋白通过结合GTP激活下游效应因子，其中RAF激酶家族是最主要的效应分子之一。在KRAS众多突变亚型中，Q61H突变因显著改变蛋白构象并增强与cRAF的相互作用而备受关注。 待测样本中的KRASQ61H突变蛋白在特定缓冲体系下与cRAF结合域发生特异性相互作用，通过离心分离去除未结合成分后，利用SDS-PAGE电泳及免疫印迹法对结合产物进行定量检测。 捕获系统包括GST-cRAF融合蛋白包被的琼脂糖凝胶珠和结合缓冲液，其中结合缓冲液的离子强度和去垢剂浓度经过优化，可在维持蛋白质相互作用的同时最大限度降低非特异性吸附。 免疫印迹检测环节需注意上样量的一致性，电泳转移效率需通过丽春红染色或内参蛋白检测进行验证。化学发光信号的采集应在仪器线性范围内进行，避免信号过饱和影响定量准确性。 数据分析时应考虑样本间总蛋白表达量的差异，建议同时检测细胞裂解液中总KRAS蛋白水平，将结合信号与总蛋白信号进行标准化处理。
12910编辑于 2026-02-28- 来自专栏生信技能树
细胞通讯分析的背景知识
不同细胞类型和组织中的细胞之间相互作用(CCI)，主要是通过各种分子包括离子、代谢物、整联蛋白、受体、连接蛋白、结构蛋白、配体和细胞外基质的分泌蛋白来实现的。 主要是流程就是根据数据库记录的参与细胞间通讯的相互作用蛋白列表，筛选表达矩阵后，看配体和受体表达量根据某个评分函数的交流得分，多个配体和受体聚合成为细胞与细胞之间的总体交互状态，最后通过网络可视化展现出来 数据库大全 数据库记录着参与细胞间通讯的相互作用蛋白列表，最常用的蛋白-蛋白的相互作用(PPI)是string数据库，但是 软件工具算法大全 主要是分成4种 基于差异分析 基于网络连通 基于表达量排序 就有必要进行一定程度的验证了，主要是下面的3种： 通过蛋白质组学，酶联免疫吸附测定，蛋白质印迹或免疫组化可以看蛋白质表达情况 通过显微镜结合免疫染色，单分子荧光原位杂交或通过流式细胞术测量共存看相邻细胞的作用关系
1.3K32发布于 2020-12-17 Elabscience PE抗小鼠CD80抗体：精准解析免疫调控的利器
靶标分子CD80（别名：Activation B7-1 antigen、B7、Cd80 等）抗体特性单克隆抗体，克隆号 16-10A1，亚型为 Armenian Hamster IgG标记物PE（藻红蛋白 ）浓度5 μL/Test形态液体适用物种小鼠应用技术流式细胞术（FCM）储存条件2-8°C 储存 12 个月，避免 prolonged 光照及冷冻储存缓冲液pH 7.2 磷酸盐缓冲液，含 0.09% 叠氮化 na和 1% 牛血清白蛋白（BSA）运输方式冰袋运输免疫细胞功能研究：可检测树突状细胞、巨噬细胞、B 细胞、T 细胞等免疫细胞在不同活化状态下 CD80 的表达变化，解析免疫细胞活化调控机制。 炎症与自身免疫病研究：探究炎症反应或自身免疫性疾病模型中 CD80 的表达异常，揭示疾病发生发展的免疫调控机制。 稳定性佳：采用优化的储存缓冲液配方，2-8°C 条件下可稳定保存 12 个月，便于长期储存与实验规划。
29910编辑于 2025-09-17- 来自专栏流式抗体推文
免疫调控研究利器！Elabscience PECyanine5 标记Ly-49CI 抗体，解锁 NK 细胞负调控机制
内容概要Elabscience PE/Cyanine5 标记抗小鼠 Ly-49C/I 抗体[5E6]专为小鼠 Ly-49C/I 蛋白检测设计，适用于流式细胞术（FCM）。 储存与运输：2-8℃避光保存，有效期 12 个月，冰袋运输，禁止冷冻。配套试剂：可搭配 10×ACK 裂解液（E-CK-A105）、细胞染色缓冲液（E-CK-A107）使用。 背景介绍Ly-49C/I 属于 Ly-49 家族抑制性受体，是二硫键连接的 II 型跨膜蛋白同源二聚体，含胞外碳水化合物识别域（CRD）。 免疫调控机制研究：探究 Ly-49C/I 在 NK 细胞活性负调控、免疫耐受维持中的作用。移植免疫研究：分析 Ly-49C/I 介导的同种异体和杂交抵抗 H-2d 骨髓移植的机制。 储存便捷：2-8℃即可长期保存，无需特殊低温设备，运输过程冰袋保护，活性有保障。规格灵活：提供多种测试规格选择，满足不同实验规模需求，性价比高。
22610编辑于 2025-11-13 - 来自专栏流式抗体推文
告别非特异性干扰！Elabscience FITC标记抗小鼠Foxp3抗体[3G3]，配合同型对照更可靠
一、内容概要本产品是 Elabscience 研发的鼠源单克隆抗体，以 FITC（异硫氰酸荧光素）为标记物，特异性识别小鼠 Foxp3 蛋白，核心应用于 ICFCM（细胞内流式细胞术）检测。 抗体亚型为 Mouse IgG1, κ，可通过 488nm 蓝光激发，在 530nm 左右波长下检测荧光信号，能精准定位细胞核内的 Foxp3 蛋白，助力科研人员高效分析 Treg 细胞的数量与功能。 Tests（¥1728.00）、100 Tests（¥2736.00）、100 Tests×2（¥4104.00）浓度与形态浓度：5 μL/Test；形态：液体（直接使用，无需复溶）储存与运输储存：2- 核心性能特点高特异性：单克隆抗体（克隆号 3G3）精准靶向 Foxp3 蛋白，无交叉反应，且提供 FITC Mouse IgG1, κ Isotype Control [MOPC-21] 作为同型对照， 激发与发射光谱明确，适配主流流式细胞仪，荧光信号强度高、背景低，便于数据采集与分析；规格灵活：提供 50-200 Tests 多种规格，满足小剂量预实验、中大规模验证实验等不同需求，性价比高；储存条件友好：2-
35910编辑于 2025-10-11
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