- 综合排序
- 最热优先
- 最新优先
- 来自专栏分子生物和分子模拟计算
荧光探针分子与蛋白质的作用
通过分子对接和分子动力学模拟，验证探针分子与蛋白的作用形式和结合位置，解释荧光发光的机理。
45730发布于 2018-07-03 - 来自专栏DrugOne
Nature | 全新设计的跨膜荧光激活蛋白
这些 tmFAPs 能够特异性激活目标荧光配体 (HBC599)，显示出 中纳摩尔亲和力，并且 亮度和量子产率 显著高于 增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)。 研究目标 通过结合深度学习 (AlphaFold 2, ColabDesign) 和能量优化 (Rosetta)，设计具有 高活性和高特异性 的 荧光激活跨膜蛋白 (tmFAP)； 验证设计蛋白在 细菌和真核细胞膜中 的 荧光激活功能和结构稳定性； 证明 人工化学物质 (HBC599) 与跨膜蛋白在膜环境中 的 非共价相互作用 可以被 精准设计。 研究方法 本研究采用 两步设计协议： 水溶性荧光激活蛋白 (wFAP) 的设计 利用 四螺旋束 (four-helix bundle) 背骨，构建 中心口袋，以 氰基苯乙腈 (HBC599) 作为目标荧光配体 实验验证与结构解析 荧光激活实验 体外荧光激活实验：在 E. coli 和 CHO 细胞 中表达后显示出 强烈的荧光激活； 配体结合亲和力 (Kd) 测定：通过 荧光滴定实验 计算 HBC599 的 Kd
28010编辑于 2025-02-20 - 来自专栏聊点学术
如何降低荧光实验的自发荧光？
紫外和紫光区域激发的有色氨酸类、吲哚胺类、纤维蛋白原、二聚体、胶原等，蓝光区域激发主要是NADH、脂褐素、吲哚胺类、二聚体、核黄素等等。 3 — 自发荧光消除原则 3.1 标本固定 标本常规采用中性的多聚甲醛固定，而醛类固定剂会与胺和蛋白反应生成荧光产物，是造成自发荧光的重要因素之一。戊二醛的影响则是更大的。 若血清质量不好，里面可能含有纤维蛋白原(正常血清是不含有纤维蛋白原的)，一旦沾到组织上，基本洗不掉了，也会增强自发荧光信号。此外，低质量的血清还包含有很多其它杂质。 因为低质量的荧光二抗中往往残留较多的未标记游离荧光素，游离的荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，它们的自发荧光也是很强的。有人曾建议采用层析或者透析的方式去除，但是其实操性往往不甚理想。 6 — Evan's蓝或者台盼蓝 单标时，可以采用0.001%或至0.1%浓度的Evan's蓝或者台盼蓝染色，这种物质会均匀分布到组织或者细胞上，它能够结合不必要的固有荧光物质或背景性荧光物质，显著减少自发荧光
2.7K60发布于 2020-07-22 - 来自专栏生命科学
细胞转染、重组蛋白、荧光素酶检测试剂盒实验 | MedChemExpress
载体构建过程中，合适的标签蛋白可直接影响后续蛋白的表达与纯化，本心法主要针对 Flag 标签蛋白！ 知己知彼，才能百战百胜。 要想成功的将 Flag 标签蛋白纯化下来，肯定需要了解Flag 标签蛋白是什么啦 Flag 标签蛋白为编码 8 个氨基酸的亲水性多肽 (DYKDDDDK)，可通过基因工程技术加到目的蛋白末端。 “六合心法”第三式 ■ 双荧光素酶报告基因检测试剂盒 (Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit) 荧光素酶是自然界中能够产生生物荧光的酶的总称，可催化荧光素氧化成氧化荧光素 ，并在此过程中发出生物荧光，可用荧光测定仪测定。 目前最常见的荧光素酶是萤火虫荧光素酶 (Firefly luciferase) 和海肾荧光素酶 (Renilla luciferase)，前者用于荧光素酶报告基因的检测，后者则作为内参，消除细胞生长状态
47610编辑于 2023-03-03 - 来自专栏聊点学术
【原理篇】免疫荧光染色的平均荧光强度
一般来讲，荧光标记染色的目的有3个：①多种蛋白标记后，分析蛋白在空间上的分布特征；②免疫荧光标记后进行蛋白半定量分析，分析蛋白半定量表达量；③标记细胞核，以便分析细胞核数量，如凋亡细胞计数等。 ? 上方所述的第1条和第3条是荧光标记染色的最佳应用场景，个人并不推荐将荧光标记应用于第2条。原因在以前就讲过→【回顾：免疫荧光分析误区，别踩雷了！】 如果一定要在荧光图像上进行蛋白半定量分析呢？ ---- 1、灰度的概念应用 与WB蛋白条带分析原理一致，免疫荧光分析也是围绕灰度进行分析。不同的荧光强度本质上可以理解成灰度值的差异，因为在分析时，我们是在同一通道下进行比较的。 积分灰度值即图像上目标区域所有像素点的灰度值之和，可以代表目标区域所包含蛋白的总相对表达量。 平均灰度值即目标区域积分灰度值除以目标区域面积，可以代表目标区域的平均蛋白表达量。 常做蛋白条带分析的人肯定清楚，分析之前，先对原始图像去色，然后再转换成8bit 黑白图。荧光图像的灰度分析，也是这么个道理。 4、测量 测量是很简单的。
5K20发布于 2020-11-25 - 来自专栏科研猫
时隔6年，河北科技大学韩春雨团队在Nucleic Acids Res发表新成果
FE 型平台通常包含两个关键组件：充当报告器或跟踪器的荧光蛋白偶联 RNA 结合蛋白 (RBP-FP)，以及在目标 RNA 上遗传构建的特定 RBP 结合序列 (RBS)。 MBS 和 PBS（PCP 结合位点）将它们结合在一起之前，不会重建功能齐全的荧光蛋白。 CBS 结合诱导 Cas6 的构象变化，导致其 N 和 C 末端并列。利用这一特性，该研究将源自大肠杆菌的 Cas6 (EcCas6) 蛋白设计为 FA 型报告基因。 催化结构域突变的 EcCas6 (dEcCas6) 在其 N 端和 C 端分别附加了蛋白质 Venus、Venus-N (VN) 和 Venus-C (VC) 的非荧光部分。 由于荧光互补是由 Cas6 的变构开关介导的，该研究将此平台命名为基于 Cas6 的荧光互补 (Cas6FC)。因此，该研究设计了一个新的 FA 型 RNA 跟踪平台，具有良好的灵敏度和特异性。
64930编辑于 2022-02-28 - 来自专栏聊点学术
【操作篇】荧光共定位的定量分析！
聊点学术 荧光共定位是很常见的实验方法，一般用来验证2种或3种蛋白是否存在共定位关系。在常规Protocol的指导下进行实验操作，很容易得到双荧光或多重荧光染色图像。 ? 这种图像，一般由红色通道（代表蛋白A）和绿色通道（代表蛋白B）两种图像merge后得到。 ? （红色通道：蛋白A） ? （绿色通道：蛋白B） 仅仅通过肉眼和语言描述是很难说清楚蛋白A和蛋白B的共定位程度到底如何。因此，我们需要对这种共定位关系进行定量分析。 （这是红色通道-绿色通道性形成的散点图，可以看出散点几乎都落在对角线上，说明红绿通道相关性极强，且红绿通道荧光强度基本相当。） ? 5. 接着再次按照如下设置勾选，然后点击Forward。 ? 6. 什么是荧光原位杂交(FISH)？ 如何降低荧光实验的自发荧光？ Co-IP免疫共沉淀 【长文】—染色质免疫共沉淀（ChIP）原理及注意事项 Ending
5.2K30发布于 2020-09-04 - 来自专栏聊点学术
免疫荧光分析误区，别踩雷了！
问题3：蛋白免疫荧光适合半定量分析吗？ 答：不适合。免疫荧光染色的关键是荧光二抗，之后在荧光场下进行拍照，留取照片。 同样一张切片、细胞爬片，采用国产荧光二抗和进口荧光二抗，效果上存在非常大的差异，用过的都知道。此时，我们难道就能仅仅凭借荧光强度和分布范围就说蛋白表达水平不同吗？显然不行。 变量②：荧光拍摄条件。 变量这么多，你还敢对免疫荧光染色进行半定量分析吗？ ? 问题4：为什么WB蛋白条带可以半定量分析，而蛋白免疫荧光却不行呢？ 一旦信号衰减，阳性物的荧光就会衰减，分布面积会减小。此时我们无法再评价蛋白的表达水平了。 ? 问题6：既然免疫荧光不适合做半定量分析，那么它到底有什么作用呢？ 、胞核）进行评价，通过采用半定量分析法分析蛋白表达水平，巩固Western Blot半定量分析的结果； ④采用免疫荧光的方法，对目标蛋白的空间分布进行再评估，以巩固免疫化学染色时对蛋白空间分布的评估，
3.5K20发布于 2020-07-21 - 来自专栏Y大宽
6️⃣蛋白质序列的功能信息分析1:基于蛋白质基序motif
序列比对和序列特征分析总目录 蛋白质具有多种生物学功能，具体可参照《生物化学》。蛋白质若发挥生物学功能，须以空间结构形式。 而蛋白质多肽链一旦合成，即可在其他物质协助下，自然折叠，形成一定的空间构象。 1 如果两种蛋白质一级结构相似，那么其空间结构和功能也相似，也有例外。 因为蛋白质的空间结构是发挥功能的基础，凡是能影响蛋白质构象的物化和生物因素等，均可影响其功能。 依照蛋白质序列特征进行功能预测，主要有以下几种方法： 1 基于蛋白质基序 2 基于结构域 3 基于同源性搜索 ---- 基于蛋白质motif motif是指与蛋白质特定功能相关，具有特定的氨基酸排列顺序的片段 PROSITE PROSITE可以做什么 可以通过蛋白的UniProtKB中的ID，PDB ID或FASTA格式的蛋白质序列在PROSITE中搜索，判断该序列包含的功能位点，从而推测其可能属于哪个蛋白质家族
6.3K42发布于 2019-03-05 - 来自专栏智药邦
Nature｜前Meta科学家推出蛋白质AI设计巨型模型
他们曾使用ESM-2模型创建了一个包含6亿个预测蛋白质结构的免费数据库。 后来的工作--这一发现获得了诺贝尔奖--显示了GFP如何标记显微镜下观察到的其他蛋白质，解释了GFP发出荧光的分子基础，并开发了这种蛋白质的合成版本，使其发出的荧光更亮、颜色更多。 此后，研究人员又发现了其他形状类似的荧光蛋白，它们都有一个吸光和发光的“发色团”核心，周围环绕着桶状骨架。 大多数都不起作用，但有一种设计与已知的荧光蛋白不同，能发出微弱的荧光--其强度约为天然GFP的1/50。研究人员以这种分子的序列为起点，让ESM3改进其工作。 然而，其氨基酸序列却大相径庭，与训练数据集中最密切相关的荧光蛋白的序列匹配度不到60%。
44810编辑于 2024-07-16 - 来自专栏百味科研芝士
如何对荧光共定位进行定量分析？
荧光共定位是很常见的实验方法，一般用来验证2种或3种蛋白是否存在共定位关系。在常规Protocol的指导下进行实验操作，很容易得到双荧光或多重荧光染色图像。 ? 这种图像，一般由红色通道（代表蛋白A）和绿色通道（代表蛋白B）两种图像merge后得到。 ? （红色通道：蛋白A） ? （绿色通道：蛋白B） 仅仅通过肉眼和语言描述是很难说清楚蛋白A和蛋白B的共定位程度到底如何。因此，我们需要对这种共定位关系进行定量分析。 （这是红色通道-绿色通道性形成的散点图，可以看出散点几乎都落在对角线上，说明红绿通道相关性极强，且红绿通道荧光强度基本相当。） ? 5. 接着再次按照如下设置勾选，然后点击Forward。 ? 6. 7.总结一下，操作后我们得到红绿通道散点图、皮尔逊相关系数以及重叠系数，这三个要素是报告荧光共定位分析的最重要的数据，必须在论文中报告。
1.2K20发布于 2020-09-22 - 来自专栏生命科学
MCE | 自噬检测
(3) mCherry-eGFP-LC3B 双荧光系统检测自噬体与自噬溶酶体。mCherry (红光)-eGFP (绿光)-LC3B 串联荧光蛋白可用于检测自噬流水平的融合蛋白。 它利用了酸性自溶酶体和中性自噬体之间的 pH 差异以及不同荧光素对 pH 的敏感性差异，以监控从自噬体到自溶酶体的进程 (图 6a)。 如图 6a-b，mCherry 荧光基团的 pH 值稳定性比 GFP 高，GFP 荧光信号在进入溶酶体后由于 pH 值的下降会出现淬灭，而 mCherry 荧光基团进入溶酶体后仍能发出荧光。 因此若细胞内出现绿和红色荧光共定位，即出现黄色荧光时，表明：mCherry-eGFP-LC3B 融合蛋白并未与溶酶体发生融合, 说明了自噬流被阻断。 当细胞内仅出现红色荧光而无绿色荧光时，代表 mCherry-eGFP-LC3B 融合蛋白定位于溶酶体或自噬溶酶体内，即自噬流活化。
79620编辑于 2023-03-16 - 来自专栏生命科学
高通量筛选检测方法-分子篇 | MedChemExpress
下面将介绍了荧光偏振、荧光共振能量转移、酶联免疫吸附、表面等离子共振和核磁共振技术几种方法。 ■ 荧光偏振 荧光偏振是一项在高通量筛选中应用广泛的技术，适合研究不同质量分子之间的结合。 荧光偏振通常与结合物质的百分比成线性比例，由此定量地测定 IC50 值。其多应用于蛋白-分子 (配体)、蛋白-蛋白相互作用，核酸杂交等方面，几乎可以应用于所有蛋白类型，包括 GPCR、核受体及酶等。 目的蛋白的表达和纯化 → 优化分析系统 → 高通量筛选 → 结果分析 → 二次筛选 → 发现了至少两种有效的 HYPE 腺苷转移酶活性调节剂 ■ 荧光共振能量转移 荧光共振能量转移适用于检测两个蛋白质之间亲和力的变化 Expert Opin Drug Discov. 2011 Jan;6(1):17-32. 3. Ali Camara. BioDrugs. 2005;19(6):383-92. 11. Mohammed A Kashem .
61520编辑于 2023-02-28 Nature | 工程化蛋白中的量子自旋共振及其多模态传感应用
研究人员此前开发了一类磁敏感荧光蛋白(MagLOV)，显著克服了这些限制。本研究进一步通过定向进化工程化这些蛋白，使其对磁场与射频信号的响应特性可调控。 该效应源于蛋白骨架与黄素辅因子之间形成的自旋相关自由基对机制。基于此，研究人员实现了多种应用，包括：磁共振成像式空间定位、微环境感知、多信号复用及锁相检测，显著缓解散射与自发荧光干扰。 研究人员开发的MagLOV磁敏荧光蛋白来源于LOV2结构域，可在磁场作用下产生显著荧光变化，并可通过基因工程在细胞中表达，为量子传感提供了生物可编程平台。 多信号复用与锁相检测 基于不同变体的响应时间常数差异，研究人员实现： 混合细胞群体的磁响应分类； 在强背景噪声条件下区分目标蛋白信号； 显著提升弱荧光样本检测能力。 图6 ：顺磁离子浓度对磁场响应衰减影响。 讨论 研究人员成功将量子自旋动力学引入可工程化蛋白体系，标志着量子生物传感从自然现象走向可设计工具。
16620编辑于 2026-02-04- 来自专栏DrugOne
NeurIPS TAPE | 用于评估蛋白质表示学习性能的多任务平台
各个蛋白质嵌入模型对于接触预测的结果如表3、表4、表5所示，数据来自ProteinNet数据集。 ? 图2：接触预测 ? 表3：短范围内的接触预测结果。短范围指的是相隔6-11个氨基酸 ? . ，1195},这代表着不同的蛋白质折叠。远程同源检测在微生物和医学中具有重要意义，例如新出现的抗生素耐药基因和发现新的CAS酶，远程同源检测结果的细节如表6所示。 表6：远程同源检测结果 4.4荧光景观预测（蛋白质工程任务） 荧光景观预测（如图4）是一个回归任务，其中每个输入蛋白x映射到一个标签y∈R，对应于x的对数荧光强度，荧光预测任务测试了模型区分非常相似的输入的能力 图4：荧光景观检测 ? 表7：荧光景观预测结果，ρ代表Sparman ρ. 4.5稳定性预测（蛋白质工程任务） 稳定性预测（见图5）是一个回归任务，其中每个输入蛋白x被映射到一个标签y∈R,测量在最极端的情况下，蛋白x将其折叠保持在浓度阈值以上
1.4K30发布于 2021-01-28 一种基于双功能核仁素蛋白的“信号增强”型荧光纳米探针用于单细胞成像研究
二、核心工具：BiotinylatedNucleolin/NCLHis&AviTag蛋白在探针构建中的关键作用在开发新型靶向成像探针的过程中，获得高纯度、结构完整且便于偶联的功能性靶标蛋白是验证探针性能的基石 2.高效生物素化：预生物素化的蛋白可通过其生物素（Biotin）与链霉亲和素（Streptavidin）之间高达皮摩尔级的超强非共价结合，实现与各类载体（如纳米颗粒、荧光染料、磁珠）的快速、稳固且取向可控的偶联 三、智能"信号增强"型荧光纳米探针的设计与性能基于上述工具与策略，研究团队成功构建了一种用于原位监测核仁素的智能荧光纳米探针。 其核心创新在于“信号增强”机制：当探针未结合靶标时，荧光分子因受AuNPs表面能量转移效应而处于淬灭状态（“关闭”）；一旦AS1411与细胞表面或内部的核仁素结合，探针构象发生改变或与靶标蛋白的距离拉近 ，能量转移被阻断，荧光信号显著恢复（“开启”），从而实现高信噪比的检测。
9810编辑于 2026-01-29【辰辉创聚生物】重组蛋白常用标签技术解析：科研级蛋白表达与纯化中的关键工具
一、重组蛋白标签的基本概念重组蛋白标签是通过分子克隆手段，与目标蛋白在N端或C端融合表达的短肽序列或功能性蛋白结构域。 His标签（Polyhistidine Tag）His标签是目前应用最广泛的蛋白表达标签之一，通常由6个或8个组氨酸残基组成。 该体系具有背景低、洗脱条件温和的特点，适用于对构象和活性要求较高的重组蛋白研究。四、可溶性与结构辅助标签6. SUMO标签SUMO标签属于小泛素样修饰蛋白，可显著提升重组蛋白的可溶性和折叠质量。 五、荧光与示踪标签8. 荧光蛋白标签荧光蛋白标签（如GFP及其衍生物）可实现对重组蛋白表达、定位及动态变化的实时监测。 在细胞水平研究中，荧光蛋白标签是重要的功能性工具，同时也可结合抗体或亲和体系用于纯化和定量分析。六、标签的技术应用要点在科研实践中，标签的选择需结合实验目的、表达体系及下游应用方式进行综合考量。
26910编辑于 2025-12-29- 来自专栏Youngxj
canvas荧光表源码分享
context.save(); context.rotate( h + m/12 + s/720) ; context.beginPath(); context.moveTo(0,6) ; context.lineTo(0,-85); context.strokeStyle="green"; context.lineWidth=6; context.stroke
78230发布于 2018-06-07 - 来自专栏生命科学
MCE | 表观遗传：YTHDF蛋白调节 m6A-RNA
mRNA” 的研究，揭示了 YTHDF 蛋白调节 m6A 修饰的 mRNA 的功能统一模型。 与“不同的 m6A 位点结合不同的 DF 蛋白”的主流观点不同，该研究人员发现，所有 m6A 位点与三个 DF 蛋白都以基本相似的方式结合，它们以冗余的作用方式诱导同一子集的 mRNA 降解，没有证据表明它们能直接促进翻译 首先，研究人员观察DF1 和 DF2 YTH 结构域与含有 m6A 的 RNA 的结合，发现在整个转录组中，DF 蛋白结合 m6A 的氨基酸以及结合近端的氨基酸都是保守的，因此三个 DF 蛋白与 m6A 但是，不同的 DF 如何对 m6A-mRNAs 发挥不同的分子效应这个问题仍未解决，研究人员又分析了 DF 旁系同源物之间的效应区域差异，以及它们的相互作用蛋白 (不同的 DF 蛋白可能通过与不同的蛋白相互作用介导其不同的功能 根据已有报道，研究人员考虑到每种 DF 蛋白都有介导 m6A-mRNA 降解的可能性。
49120编辑于 2023-03-15 - 来自专栏聊点学术
【分析篇】荧光共定位的散点图解析！
聊点学术 上期推文中，我强调了荧光共定位定量分析的三大要点。→【操作篇】荧光共定位的定量分析！ 说明：蛋白A和蛋白B存在一定的共定位关系，但蛋白A荧光强度高于蛋白B。 ? ● 形态2： 总体呈直棒形状，线性分布，对角分布。 说明：蛋白A和蛋白B存在很强的共定位关系，且蛋白A荧光强度与蛋白B基本相当。 ? ● 形态3： 总体呈棒槌状，基本线性分布，靠近X轴（红色通道）。 说明：蛋白A和蛋白B存在一定的共定位关系，但蛋白B荧光强度高于蛋白A。 （2.2）如果蛋白A（红色通道）和蛋白B（绿色通道）的共定位关系很弱，那么散点图中的散点分布会呈现以下内凹形态，这。 ? （2.3）散点图中4代表的是共定位荧光图像中的背景荧光，该区域内散点越多，说明背景荧光越强，散点图中会呈现以下形态。 ? 下期预告：单通道荧光的散点图获取 往期推荐阅读： 各种细胞器典型标记物。
3.7K30发布于 2020-09-04
腾讯云开发者
Copyright © 2013 - 2026 Tencent Cloud. All Rights Reserved. 腾讯云 版权所有
深圳市腾讯计算机系统有限公司 ICP备案/许可证号：粤B2-20090059 
粤公网安备44030502008569号
腾讯云计算（北京）有限责任公司 京ICP证150476号 | 京ICP备11018762号