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细胞转染小秘籍 | MedChemExpress
不都告诉你们细胞转染的一大法宝了吗！赶紧搬好小板凳跟着我一起复习一下。细胞转染实验是生物学实验中较为基础的实验，主要指将 DNA/RNA 导入真核细胞。 细胞转染方法五花八门，常见的可分为化学法、物理法和病毒法。 但对于一些难转染细胞，建议刚开始转染前使用无血清培养基，至少转染一小时后再换成有血清培养基。小白: 那培养基中含有抗生素会对细胞转染有影响吗？小M: 可添加抗生素。 宿主范围广MCE PolyFast Transfection Reagent 对多种常见细胞具有高水平转染效率，也可转染一些原代细胞和难转染细胞。 ：293 T 细胞，pcDNA3-C-REP 质粒 (2.5 μg)；PolyFast Transfection Reagent (7.5 μL)；右：Huh-7 细胞活力测定看了这么多，是不是心动啦？
49210编辑于 2023-02-15 AbMole细胞实验必备：G-418--构建稳定转染细胞株的关键分子
G-418（遗传霉素，AbMole，M2719）一种在分子生物学和细胞生物研究中常用且重要的工具分子，多用于细胞转染后的筛选、转基因动植物研究等实验。 在真核细胞转染或者原核转化中，实验人员可以选择Neo基因（编码氨基糖苷磷酸转移酶，APH）作为筛选标记，与目的基因串联一起进行转染/转化。 该酶能够共价修饰 G-418，改变 G-418 的化学结构，使其无法与核糖体正常结合，从而削弱了 G-418 对细胞蛋白质合成的抑制作用。成功转染的细胞即可获得对 G-418 的抗性。 G418结构式二、G-418用于稳定转染细胞筛选在细胞生物学研究中，稳定转染细胞系的建立是深入研究基因功能、信号通路等的重要手段。 确定最佳筛选浓度后即可进行筛选，一般在转染后的24小时将细胞消化重新铺板，在上述操作中需要控制细胞的密度，不要超过50%，待细胞再次铺板完成后即可加入筛选培养基，注意每隔3~5天更换一次筛选培养基。
21910编辑于 2025-12-01NK+HEK293细胞双杀！AD600150玩转Trim28-Eomes互作实验
ZETA life转染试剂（AD600150）在实验中的应用转染试剂型号：Advanced DNA RNA Transfection Reagent（货号：AD600150）转染细胞及基因：• 原代小鼠 NK细胞：转染Eomes过表达质粒（用于验证Eomes对DX5表达的挽救效应）。 转染实验数据及贡献分析实验数据定位1. 原代NK细胞转染Eomes（Fig.5E）： ◦ 实验内容：通过转染Eomes过表达质粒，恢复gp96缺陷型NK细胞中DX5的表达。 HEK293细胞转染Trim28与Eomes（Fig.7C,7E）： ◦ 实验内容：Trim28过表达导致Eomes蛋白减少及Lys63泛素化增强。 5.转染试剂的核心贡献• 高效递送能力：成功转染难转染的原代NK细胞（转染效率>60%），为功能挽救实验提供技术保障。
22110编辑于 2025-05-27- 来自专栏生命科学
细胞转染、重组蛋白、荧光素酶检测试剂盒实验 | MedChemExpress
(PolyFast Transfection Reagent) 细胞转染主要将 DNA/RNA 导入真核细胞；转染方法五花八门，常见的转染方法可分为化学法、物理法和生物法。 先了解一下常见的几项转染技术 不同转染技术都有各自明显的优缺点，是不是不知道该怎么选择啦？告诉你一个绝招吧！ 其原理是当带正电荷的聚合物和带负电荷的 DNA/RNA 结合成复合物后，通过胞吞作用进入细胞，并在胞质中将核酸释放出来，完成转染。 操作简单，适用性广，在体内和体外都有很高的转染效率，且对细胞几乎没有毒性，这可是转染实验中的一大法宝。 对多种常见细胞具有高水平转染效率，对原代细胞和难转染细胞也具有较好的效果 Anti-Flag Affinity Gel 是一种纯化的小鼠 IgG2b 单克隆抗体，共价连接琼脂糖 Sepharose 4B
47610编辑于 2023-03-03 哺乳动物重组蛋白表达｜HEK293CHO细胞蛋白表达服务｜哺乳表达
细胞转染细胞转染即将构建好的载体导入细胞。常用的转染方法有：①脂质体转染操作简便，适合小规模实验；②PEI转染性价比高，适合中等规模；③电转染适合难转染的细胞。4. 蛋白表达一般情况下，细胞转染后48-72小时即可收获蛋白。对于难表达的蛋白，可以尝试低温培养，例如30-33℃。5. 蛋白收获分泌表达的蛋白可直接收集培养上清，通过离心去除细胞碎片即可。 7. 质量检测表达成功的蛋白，通过SDS-PAGE检测纯度和分子量，Western blot验证特异性。另外，根据需要还可以进行糖基化分析和生物活性检测等更严格的质控。 Q2：HEK293和CHO细胞系应该如何选择？A：选择主要取决于实验目的。HEK293细胞转染效率高，适合快速小规模表达；CHO细胞则更适合需要长期稳定表达和大规模生产。 A：主要影响因素包括：载体启动子强度、基因序列优化程度、转染效率、细胞培养条件和诱导表达参数等。需要系统优化各个环节才能获得理想表达量。Q4：瞬时表达和稳定表达各有什么优缺点？
46010编辑于 2025-07-16ZETA life介导THP-1细胞BAMBI基因调控巨噬细胞极化研究
ZETA life转染试剂应用： ● 转染细胞：Huh7（肝癌细胞）、THP-1（单核细胞，分化为M0/M1/M2巨噬细胞）。 ● 转染基因： ◦ Huh7细胞：过表达BAMBI（BAMBI质粒）、敲低BAMBI（shR-BAMBI）。 ◦ THP-1细胞: 实现了BAMBI基因的过表达和敲低，进而影响了巨噬细胞的极化状态，表明BAMBI基因在促进M1巨噬细胞极化中扮演重要角色。 5. 实验数据与解读： ● Huh7细胞转染（图4A）： ◦ 过表达BAMBI显著上调SLC2A1、PIGQ、PKM、LDHA（糖酵解基因）及SIRT1、ACACA（脂代谢基因）； ◦ 敲低 ● 小鼠模型验证（图4B-D）： ◦ 高表达BAMBI的Huh7细胞移植瘤中，上述基因在肿瘤、肺、肝转移灶中高表达。 ◦ 作用：证实BAMBI在体内外促进糖脂代谢重编程。
29710编辑于 2025-06-16- 来自专栏生命科学
MCE | 抗生素抗性筛选
转染与抗生素筛选 转染 (Transfection) 是真核细胞主动或被动导入外源核酸片段而获得新表型的过程，引入的遗传物质 (DNA 和 RNA) 稳定或暂时存在于细胞中，据此，转染可分为稳定转染和瞬时转染 稳定转染：引入的遗传物质常带选择性标记基因，它们被整合到宿主的基因组中，即使在宿主细胞分裂传代后也能维持转基因的表达。即稳转的细胞系通过一些选择性标记反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。 关于抗生素抗性筛选：携带抗生素抗性标记的载体进入细胞，转染成功的细胞在含有抗生素的选择培养基中生长，而不带有抗性基因的细胞会被抗生素杀死，最后获得稳定的带抗性细胞株。 首先将 HEK293TCas9细胞进行慢病毒转染，然后再用嘌呤霉素孵育进行筛选。因低浓度的嘌呤霉素对活细胞具有毒性，所以筛选后存活下来的细胞即具有嘌呤霉素抗性。 ，在用慢病毒转染后，用嘌呤霉素感染细胞 1 周或更长时间，通过 RT-qPCR 和 WB 分析确定转染的效率。
67820编辑于 2023-03-10 纳米快递员已上线! LNP 精准投递_MedChemExpress(MCE 中国)
细胞转染不顺利？基因递送总是失败？别担心！ MCE LNP 试剂盒：纳米级解决方案，细胞顺利签收• 精准投递，细胞无可拒签：LNP 特有的跨膜转运及逃逸机制，实现 RNA 的高效递送；• “零”暴力拆箱：温和转染，微量样品的包封率 > 80%，递送效率高 ；• 超广谱兼容：多种配方适配悬浮细胞、贴壁细胞、免疫细胞、干细胞等多种细胞类型，确保各类细胞“乖乖签收”。 传统转染 VS MCE LNP 试剂盒投递无忧：用数据说话精准投递不是说说而已——来看实测数据，带你直观感受我们 LNP 试剂盒是如何让细胞“签收率”一路飙升的！ Transfection Reagent (Local Effect)• 瘤内注射-实现 RNA 在肿瘤组织的高效表达 (Balb/c 小鼠，瘤内注射 Fluc mRNA-LNP 复合物，单次给药剂量 0.35 mpk (7
60910编辑于 2025-06-25- 来自专栏芒果先生聊生信
慢病毒：肿瘤研究的利器
（来自吉满生物公众号） 常用的293T细胞转染效率就很高，但是大多数细胞转染效率通常比较低。据芒果本人经验，慢病毒在构建过表达、干扰和敲除方面都是效率极高的，甚至可以用于假病毒包装。 CAS9稳转细胞的构建 实验流程 制备慢病毒穿梭质粒及辅助包装质粒，用无内毒素的试剂盒抽提，共转染 293T 细胞，转染后 18小时后更换为完全培养基，培养 48 小时后，收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液 293T细胞：细胞铺板，6孔板按照（6~8）x10^5/孔铺板，一般早上铺板，第二天下午就可以做转染了。 转染体系：pLenti-CAS9-puro，pSPAX2, pMD2G按照4：3：1的比例（2μg，1.5μg和0.5μg）混匀，再与转染试剂混匀加入前天准备好的293T细胞中，钙转或PEI转染，293T 有时还要进行T7E1实验验证CAS9酶切效果。 第一步CAS9稳转细胞株构建，完成。 第二步sgRNA library载体的慢病毒包装、感染与第一步类似，不再赘述。
2K10发布于 2020-08-04 - 来自专栏生命科学
实验操作 | 质粒构建、转化、提取、鉴定、转染、测定（完整版）| MedChemExpress (MCE)
2分组(1) 正常对照组 (C)：正常培养 SH-SY5Y 细胞。(2) 阴性对照组 (NC)：SH-SY5Y 细胞转染阴性对照质粒。 (3) 过表达组 (PC)：SH-SY5Y 细胞转染过表达质粒。 3转染细胞铺板 24 h 后，按照 Lipofectamine 说明书用其进行转染。 转染 48 h 后，荧光显微镜下观察其 GFP 的表达情况及统计其转染效率 (对明场及暗场荧光细胞计数，得：转染效率 = 暗场荧光细胞个数 / 明场细胞个数；也可通过流式等观察统计其转染情况)。 结果显示，阴性对照组和 Parkin 过表达组细胞内可观察到较多的绿色荧光蛋白表达，而正常组细胞没有观察到，则质粒成功转染至细胞内。图 5. 转染后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达[1]。A. 图 7. 过表达质粒转染后 SH-SY5Y 细胞内 Parkin 蛋白的相对表达情况[1]。1如何做好细菌培养？建议统一使用 LB 培养基来培养细菌。
1.9K11编辑于 2024-06-28 - 来自专栏单细胞天地
单细胞分析揭示了ZNF683在多发性骨髓瘤的NK细胞耗竭中的关键作用
在ZNF683 NK细胞上表达的aNKR中，SLAMF7表达在患者和健康个体之间没有显著差异，但MM患者的ZNF683 NK细胞中几乎不存在SLAMF7的受体SH2D1B的表达。 转录因子ZNF683的转染促进耗竭且降低NK细胞的细胞毒性 ZNF683 NK细胞怎么表现为这种耗竭状态 与空载体（EV）转染的NK细胞相比，ZNF683转染显著诱导了抑制性受体LAG3，CTLA4，TIGIT 结果表明，ZNF683的转染在NK细胞中诱导了与耗竭相关的表型。 双荧光素酶报告基因说明ZNF683转染SH2D1B报告基因的HEK293细胞比EV转染的细胞显示出显著更高的荧光素酶活性，表明转录因子ZNF683直接与SH2D1B的启动子结合。 番外 SLAMF7 SLAMF7的受体SH2D1B，但是由于SH2D1B的缺失，SLAMF7也不能发挥作用。 信号淋巴细胞激活分子家族成员7（SLAMF7）是表达于NK细胞和免疫细胞亚群的活化受体。
1.1K30编辑于 2022-11-24 ZETA life转染试剂助力揭示lncRNA Gm28309在RAW264.7和THP-1巨噬细胞中调控布鲁氏菌炎症反应的ceRNA机制
ZETA life转染试剂（AD600150）的应用 转染细胞及基因： • RAW264.7细胞（小鼠巨噬细胞系）： ◦ 转染基因：lncRNA Gm28309过表达质粒（Gm28309-pcDNA3.1 • THP-1细胞（人单核细胞系，经PMA诱导为巨噬细胞）： ◦ 转染基因：siRNA靶向候选lncRNAs（如P33714、P3852等）。 4. 转染实验数据及解读 具体实验数据： 1. RAW264.7细胞转染Gm28309（图4A, 4D）： ◦ 结果：过表达Gm28309显著降低NLRP3炎症小体蛋白（NLRP3、Pro-caspase-1）和炎性因子（IL-1β、IL-18） THP-1细胞转染siRNA靶向lncRNAs（图3A, 3B）： ◦ 结果：敲低P33714（Gm28309人源同源物）增加IL-1β/IL-18分泌，促进布鲁氏菌清除（p<0.01）。 • 低细胞毒性保障了炎症相关基因表达的精准检测。
35010编辑于 2025-05-23- 来自专栏转染
LONZA 4D核转技术--查找适合自己实验的程序
以下内容及截图信息来源于LONZA官网，此知识主要为自己学习所用，如有错误，还请多多批评指正~之后会根据自己的实际应用再进一步完善和更正定义：转染技术是细胞生物学中经常用到的处理手段将DNA、RNA、核糖核蛋白 （RNPs）或蛋白质引入细胞以改变其基因组成或功能——这一过程称为转染——在许多生命科学应用中是必不可少的。 1.电转对细胞损伤大，也需要足够量的细胞基数，不适用于微量细胞；2.脂质体转染主要适用于贴壁细胞，原代悬浮细胞不适用。LONZA 4D核转技术相对而言更适用于原代悬浮细胞。 Nucleofector®技术是一种改进的电穿孔方法，能够高效转染原代细胞，干细胞，神经元和细胞系。 关于敲除程序的选择，可以在LONZA官网查找LONZA官网给出了很多转染技术以及不同细胞类型的转染具体信息，可参考下面的网址Knowledge Center | Lonza例如DC细胞的转染protocol
35310编辑于 2024-12-02 - 来自专栏生命科学
PMA实验步骤详解_PMA佛波酯溶解方法大全｜MCE
通常，αT3-1细胞通过ExGen 500或通过jetPRIME瞬时转染，而LβT2细胞仅通过jetPRIME转染试剂瞬时转染。 对于显性阴性（DN）PKC的实验，用1.5 μg p38α-GFP与3 μg对照载体pCDNA 3或3 μg DN-PKC构建体转染αT3-1细胞（在6cm板中）。 对于LβT2细胞，用4 μg p38α-GFP沿着9 μg对照载体pCDNA 3或9 μg DN-PKC构建体进行转染（在10 cm平板中）。 转染后约30小时，将细胞血清饥饿（0.1%FCS）16小时，随后用GnRH或PMA刺激，用冰冷的PBS洗涤两次，用裂解缓冲液处理，然后进行一个冻融循环。 135只Wistar大鼠随机分为7组。
32610编辑于 2025-10-14 【辰辉创聚生物】CHOHEK293抗体表达平台｜高效哺乳动物细胞表达｜快速重组抗体生产
HEK293表达系统则更灵活，转染效率高，适合做抗体快速表达和初期筛选。不同细胞系有各自的特点和适用场景，选择合适的哺乳动物细胞表达平台对后续的抗体质量和产量都有重要影响。 瞬时转染技术的优势瞬时转染是快速表达重组抗体的常用方法。通过把抗体基因片段导入细胞，不用建立稳定株，就能在几天内获得大量蛋白。这对于抗体快速表达和功能验证很有帮助。 尽管表达时间短，但如果优化转染条件，依然可以获得不错的产量。稳定细胞株构建相比瞬时转染，稳定细胞株构建更适合长期抗体生产。过程包括载体整合、筛选单克隆细胞、表达验证等。 抗体表达平台依托CHO和HEK293等哺乳动物细胞表达系统，结合瞬时转染和稳定细胞株构建技术，可以满足从抗体快速表达到大规模生产的不同需求。 Q2: 瞬时转染技术如何保证抗体快速表达的效率？A: 瞬时转染通过优化转染试剂、质粒载体设计及细胞状态，最大化表达效率。虽然表达时间短（通常数天），但可快速获得高水平抗体，适合筛选和早期实验。
40600编辑于 2025-08-06【辰辉创聚生物】稳定细胞系构建｜蛋白表达细胞株｜高表达细胞株
在构建过程中，选择合适的宿主细胞、表达载体设计、转染方法、筛选单克隆细胞株及表达优化，是保证蛋白表达细胞系质量的关键步骤。 2. 宿主细胞与表达系统 使用最多的宿主细胞包括CHO细胞系构建和HEK293稳定表达系统，两者均为哺乳动物细胞，具备良好的蛋白折叠和人源化糖基化能力，广泛应用于定制细胞系和转染稳定细胞株开发。 表达载体通常设计为双基因表达系统，确保轻链与重链同步表达，搭配强启动子和筛选标记，提高转染效率及筛选成功率。 4. 转染与筛选技术 转染技术主要分为瞬时转染和稳定转染两类。 稳定转染通过抗性药物筛选，获得持续表达的细胞株。筛选阶段重点在于利用药物筛选结合单克隆挑选，确保获得单克隆细胞株。 现代技术结合自动化筛选平台，加速高效筛选高表达细胞株，显著提升筛选效率与表达水平。 A:基因整合细胞系表达稳定，适合长期培养和生产；瞬时表达周期短，但表达不稳定。 Q5：转染稳定细胞株有哪些常用方法？ A:常见方法包括脂质体转染、电穿孔及病毒介导转染等。
40510编辑于 2025-09-18- 来自专栏芒果先生聊生信
HEK293细胞系，最全总结
总体而言，293细胞容易转染，是实验室最常用的表达兴趣基因的细胞株。 ? 最原始的HEK293细胞来源于一个夭折的人类胚胎肾细胞（1973年）。 293T细胞还表达E1A蛋白，SV40 large T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。293T细胞容易转染，用磷酸钙、PEI或脂质体转染，效率均可达90%以上。 293T/17细胞是293T细胞中共转染pBND和pZAP质粒而获得的具有G418耐受的细胞系。该细胞系仍保留高转染效率的特点。 293T/17SF细胞是在293T细胞中转入EBV基因形成的转化细胞系，该细胞系主要用于瞬时转染及蛋白表达，类似于293E细胞的作用。 293SG是293S细胞用甲基磺酸乙酯诱变处理，蓖麻毒素选择后再转染pcDNA6/TR质粒得到耐受蓖麻毒素的细胞系。
7.4K20发布于 2020-08-28 【辰辉创聚生物】一文读懂基因过表达细胞系基因 | 过表达细胞系构建全流程解析 | 稳定转染技术 | 载体设计优化
宿主细胞选择与准备细胞系选择标准常用的宿主细胞系包括HEK293、CHO、HeLa等，选择依据包括：细胞的转染效率、增殖速率、蛋白加工能力及实验目的特异性要求。 细胞培养质量控制在转染前需对细胞状态进行严格评估，包括细胞形态观察、生长曲线测定和支原体检测。细胞传代次数应控制在适当范围内（通常不超过20代），以保证细胞状态的稳定性。 转染前24小时将细胞以适宜密度接种，确保转染时细胞处于对数生长期，达到最佳转染效率。基因导入与筛选流程转染技术选择与优化根据细胞类型和研究需求，可选择脂质体转染、电穿孔或病毒转导等方法。 脂质体转染适用于大多数贴壁细胞，操作简便但转染效率因细胞类型而异。电穿孔技术对悬浮细胞和难转染细胞系效果显著，但需优化电压、脉冲时间等参数。 表达验证与稳定性评估蛋白表达验证采用Western blot技术检测目标蛋白表达，需设立未转染细胞和空载体转染细胞作为阴性对照。对于分泌型蛋白，可使用ELISA法检测培养上清中的蛋白浓度。
22910编辑于 2026-01-16- 来自专栏技术学习
筛出核心基因的下一步
沉默持续时间短，仅能维持7-10天，无法用于长期实验（如分化、多代细胞增殖，稳定细胞系构建）。 存在脱靶风险，可能非特异性沉默其他基因，需严格设置阴性对照（ scramble siRNA）。 转染效率依赖细胞类型，对原代细胞等难转染细胞效果较差。 适用情景 初步验证基因是否与表型相关。 机制研究中需要快速敲低。 不适合长期实验（分化、慢性疾病模型）。 可在难转染的细胞（免疫细胞、原代细胞）中发挥作用。 适合体内实验（肿瘤皮下瘤/转移模型）。 局限 随机整合：可能影响宿主基因（需多克隆验证）。 安全等级要求（BSL-2）。 siRNA 不够稳定或细胞难转染时。 关键注意点 多个细胞克隆或 pool 实验都要验证。 控制表达水平，避免假阳性。 shRNA 一定要至少使用2条，严格做 off-target 控制。 ：改用慢病毒转染/CRISPR，构建稳定细胞系，进行长期表型观察和通路机制分析； 体内初步验证阶段：用慢病毒改造细胞+动物移植（如将过表达基因的肿瘤细胞注入小鼠体内），2-3个月内验证体内效果，成本低于转基因动物
19810编辑于 2025-12-24 【辰辉创聚生物】哺乳动物瞬时蛋白表达|CHO细胞蛋白表达|HEK293细胞蛋白表达
宿主细胞系HEK293 系列细胞蛋白表达系统：如 HEK293E、293T、293F 等，该细胞易于转染、增殖快、可适应无血清悬浮培养体系，转染效率高。 转染方法与试剂在 TGE 中，非病毒转染方法被广泛采用，其中聚乙烯亚胺（PEI）因价格低廉和操作简便而成为首选。脂质体试剂也能提供较高的转染效率，但成本相对较高。 对于难以转染的细胞，电穿孔和其他物理方法可以作为补充。在一些特定情况下，病毒载体（如腺病毒、杆状病毒）也被用于辅助转染，以提高转染效率和基因导入量。4. 细胞系工程改造利用 CRISPR/Cas9 工具敲除凋亡相关基因（如 Apaf1），可显著提高 CHO 细胞在转染后的存活率与表达量。 转染工艺和培养流程优化转染时的 DNA/试剂比例、细胞密度、培养基成分等因素均会影响表达效率。通过优化这些工艺参数，可以显著提高产量并改善细胞状态。
46110编辑于 2025-09-10
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