- 综合排序
- 最热优先
- 最新优先
- 来自专栏生命科学
细胞转染小秘籍 | MedChemExpress
不都告诉你们细胞转染的一大法宝了吗！赶紧搬好小板凳跟着我一起复习一下。细胞转染实验是生物学实验中较为基础的实验，主要指将 DNA/RNA 导入真核细胞。 细胞转染方法五花八门，常见的可分为化学法、物理法和病毒法。 但对于一些难转染细胞，建议刚开始转染前使用无血清培养基，至少转染一小时后再换成有血清培养基。小白: 那培养基中含有抗生素会对细胞转染有影响吗？小M: 可添加抗生素。 如有必要，可在 1:1-1:5 的范围内调整以优化转染效果。最佳转染条件因不同的细胞类型和培养条件而有所区别，转染前，可做预实验摸索最佳转染比例。 宿主范围广MCE PolyFast Transfection Reagent 对多种常见细胞具有高水平转染效率，也可转染一些原代细胞和难转染细胞。
49210编辑于 2023-02-15 AbMole细胞实验必备：G-418--构建稳定转染细胞株的关键分子
G-418（遗传霉素，AbMole，M2719）一种在分子生物学和细胞生物研究中常用且重要的工具分子，多用于细胞转染后的筛选、转基因动植物研究等实验。 在真核细胞转染或者原核转化中，实验人员可以选择Neo基因（编码氨基糖苷磷酸转移酶，APH）作为筛选标记，与目的基因串联一起进行转染/转化。 该酶能够共价修饰 G-418，改变 G-418 的化学结构，使其无法与核糖体正常结合，从而削弱了 G-418 对细胞蛋白质合成的抑制作用。成功转染的细胞即可获得对 G-418 的抗性。 G418结构式二、G-418用于稳定转染细胞筛选在细胞生物学研究中，稳定转染细胞系的建立是深入研究基因功能、信号通路等的重要手段。 确定最佳筛选浓度后即可进行筛选，一般在转染后的24小时将细胞消化重新铺板，在上述操作中需要控制细胞的密度，不要超过50%，待细胞再次铺板完成后即可加入筛选培养基，注意每隔3~5天更换一次筛选培养基。
21910编辑于 2025-12-01NK+HEK293细胞双杀！AD600150玩转Trim28-Eomes互作实验
ZETA life转染试剂（AD600150）在实验中的应用转染试剂型号：Advanced DNA RNA Transfection Reagent（货号：AD600150）转染细胞及基因：• 原代小鼠 NK细胞：转染Eomes过表达质粒（用于验证Eomes对DX5表达的挽救效应）。 转染实验数据及贡献分析实验数据定位1. 原代NK细胞转染Eomes（Fig.5E）： ◦ 实验内容：通过转染Eomes过表达质粒，恢复gp96缺陷型NK细胞中DX5的表达。 ◦ 结果：DX5+ NK细胞比例显著回升（p=0.0117），证明Eomes是gp96调控NK成熟的关键下游因子。2. 5.转染试剂的核心贡献• 高效递送能力：成功转染难转染的原代NK细胞（转染效率>60%），为功能挽救实验提供技术保障。
22110编辑于 2025-05-27ZETA life转染试剂助力揭示lncRNA Gm28309在RAW264.7和THP-1巨噬细胞中调控布鲁氏菌炎症反应的ceRNA机制
/NF-κB Pathway》 方向：研究布鲁氏菌（Brucella）感染如何通过下调长链非编码RNA（lncRNA Gm28309）激活miR-3068-5p/NF-κB信号通路，从而触发巨噬细胞的炎症反应及其分子机制 ZETA life转染试剂（AD600150）的应用 转染细胞及基因： • RAW264.7细胞（小鼠巨噬细胞系）： ◦ 转染基因：lncRNA Gm28309过表达质粒（Gm28309-pcDNA3.1 • THP-1细胞（人单核细胞系，经PMA诱导为巨噬细胞）： ◦ 转染基因：siRNA靶向候选lncRNAs（如P33714、P3852等）。 4. 转染实验数据及解读 具体实验数据： 1. THP-1细胞转染siRNA靶向lncRNAs（图3A, 3B）： ◦ 结果：敲低P33714（Gm28309人源同源物）增加IL-1β/IL-18分泌，促进布鲁氏菌清除（p<0.01）。 RAW264.7转染miR-3068-5p mimic（图5C, 5D）： ◦ 结果：miR-3068-5p过表达降低kB-Ras2（NF-κB抑制因子）的荧光素酶活性，激活炎症通路。
35010编辑于 2025-05-23- 来自专栏生命科学
细胞转染、重组蛋白、荧光素酶检测试剂盒实验 | MedChemExpress
(PolyFast Transfection Reagent) 细胞转染主要将 DNA/RNA 导入真核细胞；转染方法五花八门，常见的转染方法可分为化学法、物理法和生物法。 先了解一下常见的几项转染技术 不同转染技术都有各自明显的优缺点，是不是不知道该怎么选择啦？告诉你一个绝招吧！ 其原理是当带正电荷的聚合物和带负电荷的 DNA/RNA 结合成复合物后，通过胞吞作用进入细胞，并在胞质中将核酸释放出来，完成转染。 操作简单，适用性广，在体内和体外都有很高的转染效率，且对细胞几乎没有毒性，这可是转染实验中的一大法宝。 对多种常见细胞具有高水平转染效率，对原代细胞和难转染细胞也具有较好的效果 Anti-Flag Affinity Gel 是一种纯化的小鼠 IgG2b 单克隆抗体，共价连接琼脂糖 Sepharose 4B
47610编辑于 2023-03-03 - 来自专栏芒果先生聊生信
HEK293细胞系，最全总结
HEK293细胞是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒DNA（Ad5 DNA）而得到的永生化细胞，表达稳转的Ad5 DNA的基因，不易贴壁，表达E1A蛋白。 293T细胞还表达E1A蛋白，SV40 large T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。293T细胞容易转染，用磷酸钙、PEI或脂质体转染，效率均可达90%以上。 293T/17细胞是293T细胞中共转染pBND和pZAP质粒而获得的具有G418耐受的细胞系。该细胞系仍保留高转染效率的特点。 该细胞系为悬浮培养，缺少N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶 (N-acetyl-glucosaminyl transferase I, GnTI）活性，可促进蛋白的Man5GlcNAc2N-聚糖型糖基化修饰。 Nature communications, 2014, 5: 4767.
7.4K20发布于 2020-08-28 哺乳动物重组蛋白表达｜HEK293CHO细胞蛋白表达服务｜哺乳表达
细胞转染细胞转染即将构建好的载体导入细胞。常用的转染方法有：①脂质体转染操作简便，适合小规模实验；②PEI转染性价比高，适合中等规模；③电转染适合难转染的细胞。4. 蛋白表达一般情况下，细胞转染后48-72小时即可收获蛋白。对于难表达的蛋白，可以尝试低温培养，例如30-33℃。5. 蛋白收获分泌表达的蛋白可直接收集培养上清，通过离心去除细胞碎片即可。 Q2：HEK293和CHO细胞系应该如何选择？A：选择主要取决于实验目的。HEK293细胞转染效率高，适合快速小规模表达；CHO细胞则更适合需要长期稳定表达和大规模生产。 A：主要影响因素包括：载体启动子强度、基因序列优化程度、转染效率、细胞培养条件和诱导表达参数等。需要系统优化各个环节才能获得理想表达量。Q4：瞬时表达和稳定表达各有什么优缺点？ Q5：如何提高表达蛋白的可溶性和生物活性？A：可尝试优化表达温度（如30-33℃）、添加分子伴侣、调整培养时间等。对于特别难表达的蛋白，可能需要尝试不同的表达系统和优化策略。
46010编辑于 2025-07-16【辰辉创聚生物】一文读懂基因过表达细胞系基因 | 过表达细胞系构建全流程解析 | 稳定转染技术 | 载体设计优化
转染前24小时将细胞以适宜密度接种，确保转染时细胞处于对数生长期，达到最佳转染效率。基因导入与筛选流程转染技术选择与优化根据细胞类型和研究需求，可选择脂质体转染、电穿孔或病毒转导等方法。 脂质体转染适用于大多数贴壁细胞，操作简便但转染效率因细胞类型而异。电穿孔技术对悬浮细胞和难转染细胞系效果显著，但需优化电压、脉冲时间等参数。 初筛后选取5-10个高表达克隆进行扩大培养，用于进一步的蛋白水平验证。表达验证与稳定性评估蛋白表达验证采用Western blot技术检测目标蛋白表达，需设立未转染细胞和空载体转染细胞作为阴性对照。 稳定性测试方法将候选细胞系在常规培养基中连续传代培养，每5代取样检测目标基因表达水平。稳定性测试通常持续20-30代，期间需监测细胞生长状态和形态变化。 建立主细胞库和工作细胞库管理体系，规范细胞的保存和使用流程。常见问题与解决方案针对表达沉默现象，可通过添加组蛋白去乙酰化酶抑制剂（如TSA）或DNA甲基化抑制剂（如5-aza）进行干预。
22910编辑于 2026-01-16【辰辉创聚生物】稳定细胞系构建｜蛋白表达细胞株｜高表达细胞株
在构建过程中，选择合适的宿主细胞、表达载体设计、转染方法、筛选单克隆细胞株及表达优化，是保证蛋白表达细胞系质量的关键步骤。 2. 宿主细胞与表达系统 使用最多的宿主细胞包括CHO细胞系构建和HEK293稳定表达系统，两者均为哺乳动物细胞，具备良好的蛋白折叠和人源化糖基化能力，广泛应用于定制细胞系和转染稳定细胞株开发。 表达载体通常设计为双基因表达系统，确保轻链与重链同步表达，搭配强启动子和筛选标记，提高转染效率及筛选成功率。 4. 转染与筛选技术 转染技术主要分为瞬时转染和稳定转染两类。 5. 表达优化与质量控制 表达优化包括培养条件的调控、培养基优化及共表达分子伴侣，提升蛋白正确折叠与分泌效率。 A:基因整合细胞系表达稳定，适合长期培养和生产；瞬时表达周期短，但表达不稳定。 Q5：转染稳定细胞株有哪些常用方法？ A:常见方法包括脂质体转染、电穿孔及病毒介导转染等。
40510编辑于 2025-09-18【辰辉创聚生物】CHOHEK293抗体表达平台｜高效哺乳动物细胞表达｜快速重组抗体生产
瞬时转染技术的优势瞬时转染是快速表达重组抗体的常用方法。通过把抗体基因片段导入细胞，不用建立稳定株，就能在几天内获得大量蛋白。这对于抗体快速表达和功能验证很有帮助。 尽管表达时间短，但如果优化转染条件，依然可以获得不错的产量。稳定细胞株构建相比瞬时转染，稳定细胞株构建更适合长期抗体生产。过程包括载体整合、筛选单克隆细胞、表达验证等。 抗体表达平台依托CHO和HEK293等哺乳动物细胞表达系统，结合瞬时转染和稳定细胞株构建技术，可以满足从抗体快速表达到大规模生产的不同需求。 Q2: 瞬时转染技术如何保证抗体快速表达的效率？A: 瞬时转染通过优化转染试剂、质粒载体设计及细胞状态，最大化表达效率。虽然表达时间短（通常数天），但可快速获得高水平抗体，适合筛选和早期实验。 通过优化表达载体和细胞系，确保双抗正确组装和功能实现。Q5: 抗体纯化过程中常用的方法有哪些？A: 主要包括Protein A/G亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析。
40600编辑于 2025-08-06- 来自专栏生命科学
MCE | 抗生素抗性筛选
转染与抗生素筛选 转染 (Transfection) 是真核细胞主动或被动导入外源核酸片段而获得新表型的过程，引入的遗传物质 (DNA 和 RNA) 稳定或暂时存在于细胞中，据此，转染可分为稳定转染和瞬时转染 稳定转染：引入的遗传物质常带选择性标记基因，它们被整合到宿主的基因组中，即使在宿主细胞分裂传代后也能维持转基因的表达。即稳转的细胞系通过一些选择性标记反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。 关于抗生素抗性筛选：携带抗生素抗性标记的载体进入细胞，转染成功的细胞在含有抗生素的选择培养基中生长，而不带有抗性基因的细胞会被抗生素杀死，最后获得稳定的带抗性细胞株。 ，在用慢病毒转染后，用嘌呤霉素感染细胞 1 周或更长时间，通过 RT-qPCR 和 WB 分析确定转染的效率。 注: 只有经转座子 Tn5 或 Tn601 的 neo 基因转染的细胞可获得对 G418 的抗性；G418 的有效浓度因细胞的生长培养基、培养条件和代谢率而异。
67820编辑于 2023-03-10 - 来自专栏芒果先生聊生信
慢病毒：肿瘤研究的利器
（来自吉满生物公众号） 常用的293T细胞转染效率就很高，但是大多数细胞转染效率通常比较低。据芒果本人经验，慢病毒在构建过表达、干扰和敲除方面都是效率极高的，甚至可以用于假病毒包装。 293T细胞生长状态要好，新复苏的细胞最好传代2次以上再用于病毒包装，传代次数超过20次的也不要用。正常情况下，293T细胞为贴壁依赖型成上皮样细胞。 菌株 大肠杆菌菌株 DH5α。 293T细胞：细胞铺板，6孔板按照（6~8）x10^5/孔铺板，一般早上铺板，第二天下午就可以做转染了。 转染18~24小时后，更换为新鲜培养基。 病毒收集：转染后 48 小时收集病毒上清，0.45 μm滤器过滤，2mL EP管中，4℃，3000g/min 离心 5分钟。 感染靶细胞 细胞准备：将状态良好的目的细胞（上述论文中为RD横纹肌肉瘤细胞，是Entrovirus B的嗜性细胞）接种到6孔板，使浓度为 (4~6)×10^5/ml 细胞。
2K10发布于 2020-08-04 circ-0008102过表达与敲低：ZETA life转染试剂在K562细胞中的应用
ZETA life Advanced DNA RNA转染试剂（货号：AD600150）的应用 • 转染细胞：K562细胞（人慢性髓系白血病细胞系）。 ，序列：5'-GAACGGGGACACUUAGUCGTT-3'） ◦阴性对照（si-control，序列：5'-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3'） 3. S3：circ-0008102过表达抑制miR-372-3p、miR-329-5p等5种miRNA的表达（P<0.001），敲低则增加其表达（P<0.05）。 • 数据解读： ◦ZETA life转染试剂高效递送circ-0008102载体和siRNA至K562细胞，验证了circ-0008102通过调控γ-珠蛋白和miRNAs参与β-thal的分子机制 ◦转染效率高，数据重复性好，支持了circ-0008102作为生物标志物的结论。 • 主要贡献： ◦为circ-0008102功能研究提供可靠的基因操作工具。
19900编辑于 2025-05-23【辰辉创聚生物】哺乳动物瞬时蛋白表达|CHO细胞蛋白表达|HEK293细胞蛋白表达
宿主细胞系HEK293 系列细胞蛋白表达系统：如 HEK293E、293T、293F 等，该细胞易于转染、增殖快、可适应无血清悬浮培养体系，转染效率高。 转染方法与试剂在 TGE 中，非病毒转染方法被广泛采用，其中聚乙烯亚胺（PEI）因价格低廉和操作简便而成为首选。脂质体试剂也能提供较高的转染效率，但成本相对较高。 对于难以转染的细胞，电穿孔和其他物理方法可以作为补充。在一些特定情况下，病毒载体（如腺病毒、杆状病毒）也被用于辅助转染，以提高转染效率和基因导入量。4. 细胞系工程改造利用 CRISPR/Cas9 工具敲除凋亡相关基因（如 Apaf1），可显著提高 CHO 细胞在转染后的存活率与表达量。 5. 转染工艺和培养流程优化转染时的 DNA/试剂比例、细胞密度、培养基成分等因素均会影响表达效率。通过优化这些工艺参数，可以显著提高产量并改善细胞状态。
46110编辑于 2025-09-10- 来自专栏生命科学
实验操作 | 质粒构建、转化、提取、鉴定、转染、测定（完整版）| MedChemExpress (MCE)
2分组(1) 正常对照组 (C)：正常培养 SH-SY5Y 细胞。(2) 阴性对照组 (NC)：SH-SY5Y 细胞转染阴性对照质粒。 (3) 过表达组 (PC)：SH-SY5Y 细胞转染过表达质粒。 转染 48 h 后，荧光显微镜下观察其 GFP 的表达情况及统计其转染效率 (对明场及暗场荧光细胞计数，得：转染效率 = 暗场荧光细胞个数 / 明场细胞个数；也可通过流式等观察统计其转染情况)。 结果显示，阴性对照组和 Parkin 过表达组细胞内可观察到较多的绿色荧光蛋白表达，而正常组细胞没有观察到，则质粒成功转染至细胞内。图 5. 转染后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达[1]。A. 转染后 SH-SY5Y 细胞内 Parkin mRNA 表达情况：RT-PCR 结果显示，Parkin 过表达质粒转染后，正常对照组与阴性对照组的 Parkin-mRNA 水平没有明显差异 (P>0.05 过表达质粒转染后 SH-SY5Y 细胞 Parkin-mRNA 的相对表达情况[1]。 A.RT-PCR 的扩增曲线 B. 溶解曲线 C.
1.9K11编辑于 2024-06-28 稳定细胞系构建原理与流程解析
一、稳定细胞系的基本原理稳定细胞系的核心是基因的基因组整合：基因组整合目标基因通过各种方法插入宿主细胞的染色体中，而不是停留在细胞质内（如瞬时转染）。 避免了瞬时转染中蛋白表达随时间衰减的问题。二、稳定细胞系构建的流程稳定细胞系的开发一般包括以下几个核心环节：1. 设计与载体构建目标基因优化：提高翻译效率，添加信号肽和标签。 宿主细胞匹配：根据蛋白特性选择 CHO、HEK293 或其他专用细胞系。2. 基因递送与整合转染/转导方法：化学转染：适用于多数易转染细胞电穿孔：适合难转染或悬浮细胞病毒载体（慢病毒、腺病毒等）：高效率，适合非分裂细胞整合方式：随机整合：快速，但表达水平受染色体位置影响位点特异性整合 方法：极限稀释法流式细胞分选（FACS）克隆成像系统（如 CloneSelect）5.
13610编辑于 2026-01-14- 来自专栏转染
LONZA 4D核转技术--查找适合自己实验的程序
以下内容及截图信息来源于LONZA官网，此知识主要为自己学习所用，如有错误，还请多多批评指正~之后会根据自己的实际应用再进一步完善和更正定义：转染技术是细胞生物学中经常用到的处理手段将DNA、RNA、核糖核蛋白 （RNPs）或蛋白质引入细胞以改变其基因组成或功能——这一过程称为转染——在许多生命科学应用中是必不可少的。 1.电转对细胞损伤大，也需要足够量的细胞基数，不适用于微量细胞；2.脂质体转染主要适用于贴壁细胞，原代悬浮细胞不适用。LONZA 4D核转技术相对而言更适用于原代悬浮细胞。 Nucleofector®技术是一种改进的电穿孔方法，能够高效转染原代细胞，干细胞，神经元和细胞系。 关于敲除程序的选择，可以在LONZA官网查找LONZA官网给出了很多转染技术以及不同细胞类型的转染具体信息，可参考下面的网址Knowledge Center | Lonza例如DC细胞的转染protocol
35310编辑于 2024-12-02 【辰辉创聚生物】稳定细胞系构建 | 稳定株开发服务 | 高表达克隆筛选
这类细胞系是进行蛋白功能研究、信号通路分析、生物药物研发及大规模表达等实验的核心工具。构建稳定细胞系的核心环节包括外源基因载体构建、有效转染、筛选与克隆扩增、表达持续性验证等步骤。1. 高效转染是构建的技术基础为了将上述构建好的载体引入宿主细胞，科研上广泛采用高效转染方法。 常用的转染技术包括：化学法：基于阳离子脂质体等试剂（如 Lipofectamine 系列）与DNA复合，从而被细胞摄取。 转染效率直接影响稳定细胞系构建的效率和质量，因此在转染环节选择适合的方案、适宜的转染试剂是关键。3. 抗性筛选与单克隆挑选转染后细胞通常是多种状态混合群体，其中只有一部分细胞完成了外源基因的整合。 5. 细胞培养环境与支持试剂稳定细胞系的建立与维护还依赖于良好的细胞培养环境。关键包括：基础培养基：如 DMEM、RPMI 1640 等，是维持细胞生命活动的基础。
12700编辑于 2026-01-26ZETA life介导THP-1细胞BAMBI基因调控巨噬细胞极化研究
文章核心总结：BAMBI通过调控巨噬细胞极化、糖酵解及脂代谢影响肝癌预后，揭示其作为预后标志物的潜力。 2. ZETA life转染试剂应用： ● 转染细胞：Huh7（肝癌细胞）、THP-1（单核细胞，分化为M0/M1/M2巨噬细胞）。 ● 转染基因： ◦ Huh7细胞：过表达BAMBI（BAMBI质粒）、敲低BAMBI（shR-BAMBI）。 ◦ THP-1细胞: 实现了BAMBI基因的过表达和敲低，进而影响了巨噬细胞的极化状态，表明BAMBI基因在促进M1巨噬细胞极化中扮演重要角色。 5. 实验数据与解读： ● Huh7细胞转染（图4A）： ◦ 过表达BAMBI显著上调SLC2A1、PIGQ、PKM、LDHA（糖酵解基因）及SIRT1、ACACA（脂代谢基因）； ◦ 敲低
29710编辑于 2025-06-16- 来自专栏芒果先生聊生信
芒果实验室，293细胞背景
总体而言，293细胞容易转染，是实验室最常用的表达兴趣基因的细胞株。 HEK293细胞是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒DNA（Ad 5 DNA）而得到的永生化细胞，表达稳转的Ad5 DNA的基因，不易贴壁，表达E1A蛋白。 line was initiated by the transformation and culturing of normal HEK cells with sheared adenovirus 5 Human adenovirus 5 causes a range of respiratory illnesses. 293T细胞容易转染，用磷酸钙、PEI或脂质体转染，效率均可达90%以上。
1.8K20发布于 2020-06-28
腾讯云开发者
Copyright © 2013 - 2026 Tencent Cloud. All Rights Reserved. 腾讯云 版权所有
深圳市腾讯计算机系统有限公司 ICP备案/许可证号：粤B2-20090059 
粤公网安备44030502008569号
腾讯云计算（北京）有限责任公司 京ICP证150476号 | 京ICP备11018762号