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  • 来自专栏生命科学

    细胞凋亡通路 | MedChemExpress

    细胞凋亡 细胞凋亡是程序性细胞死亡的最佳表征形式,不会引起炎症反应,对器官发育、组织重塑、免疫反应和肿瘤抑制至关重要。 内在或外在途径受 p53、NF-κB、泛素蛋白体系统和 PI3K 途径等蛋白质的调控,由于一些信号可以激活这两种途径,因此这两种细胞凋亡途径之间也存在广泛的串扰。 因而,坏死性凋亡及其关键调节蛋白 MLKL、RIPK1 和 RIPK3 是治疗与坏死性凋亡相关的疾病十分有潜力的靶点。 LY294002 广谱 PI3K 抑制剂,是自噬 (autophagy) 和凋亡 (apoptosis) 激活剂。 Necrosulfonamide 坏死性凋亡抑制剂,选择性靶向 (MLKL),阻止 MLKL-RIP1-RIP3 坏死小体复合体与其下游效应子相互作用。

    68630编辑于 2023-03-08
  • 来自专栏生物信息云

    TUNEL 检测细胞凋亡(附视频)

    其原理是:先增加细胞膜通透性,让 rTDT 和荧光素生物素标记的 dUTP 进入细胞内,在脱氧核糖核苷酸末端转移酶的辅助下将脱氧核糖核苷酸和荧光素等形成 的衍生物标记到 DNA 的 3’ 末端,从而可进行凋亡细胞的检测 如:0.2% TritonX 100, TUNEL检测试剂盒(包含 10×TdT 酶浓缩液、荧光素标记的 1×dUTP、转化剂POD),DAB 试剂盒, 3%过氧化氢甲醇,磷酸缓冲液 PBS 等。 封闭 用滤纸擦去周围多余的 PBS, 滴加 3%过氧化氢甲醇, 室温孵育 10min, 消除内源性过氧化物酶干扰后, 弃去将载玻片用 PBS 洗 2 次,每次 5min细胞通透化去尽 PBS 后,滴加 在光学显微镜下,结合 3 组结果分析,经过 DAB 和苏木素复染后,凋亡细胞 核被染成棕黄色,正常细胞核呈蓝色。可通过实验组凋亡细胞数判断凋亡水平。 目前流式细胞仪检测细胞凋亡已逐渐成为趋势,利用Annexin V-FITC和PI染色, 流式细胞仪检测早期凋亡率。Annexin V -FITC检测凋亡

    2.8K42发布于 2019-09-17
  • 来自专栏生命科学

    细胞凋亡检测方法有哪些?常用的细胞凋亡检测实验步骤 | MCE

    细胞凋亡的主要特征是:(1) 电子致密核 (早期边缘化);(2) 核碎裂;(3) 完整的细胞膜;(4) 杂乱无章的细胞质、 细胞器;(5) 大而透明的空泡;(6) 细胞表面有气泡。 如 Figure 4 所示,TEM 显示 BBR (小檗碱) 或 DDP (顺铂) 诱导大量 OVCAR3 细胞凋亡。变化主要包括细胞 质皱缩、质膜起泡、染色质浓缩和凋亡小体形成。 TEM 检测小檗碱 (BBR) (100 μΜ) 和顺铂 (DDP) (5 μg/mL) 诱导 OVCAR3 细胞 24 h 后的细胞凋亡形态[5]。 03基于生物学功能3.1 凋亡相关标志物检测如前所述,细胞凋亡途径最终均导致 Caspase-3 的切割和激活。因此,可以通过 Caspase-3 来对晚期细胞 凋亡进行检测。 Cy3 (Ex=550 nm; Em=570 nm) 染色后,凋亡细胞显示 红色荧光 (用 HY-K1078 则凋亡细胞呈绿色荧光),正常细胞无荧光。

    1.4K11编辑于 2025-05-19
  • 来自专栏生命科学

    细胞凋亡 VS 细胞焦亡 | MedChemExpress

    细胞凋亡(Apotosis) 细胞凋亡是发现最早 与细胞坏死过程中发生的核溶解和细胞肿胀破裂不同,细胞凋亡的主要形态学特征为染色质固缩、DNA 片段化、细胞膜起泡、细胞皱缩、凋亡小体的形成等。 外源性途径是由跨膜受体(如肿瘤坏死因子 TNF 受体超家族)介导的细胞凋亡过程。 一旦 caspase-8 激活,细胞凋亡的执行阶段就被激活。细胞凋亡的内源性途径则是由线粒体事件启动的,由胞内的信号刺激产生,并直接作用于胞内的靶点。 一些细胞压力状况(如辐射、缺氧、感染等)会引起线粒体内膜的变化,导致线粒体膜电位丧失,线粒体孔道开放,从而导致线粒体内促凋亡物质(如细胞色素 C 等)释放到细胞膜内,激活 caspase-9 介导的凋亡过程

    80610编辑于 2023-02-22
  • 来自专栏生命科学

    细胞凋亡——如何检测?| MedChemExpress

    用 0、0.3、0.6、0.9 和 1.2 mg/mL 的茎提取物处理 PC-3 细胞 24h 后,细胞出现典型的凋亡细胞核形态变化。照片在 20× 荧光显微镜下拍摄。箭头表示凋亡细胞。 绝大多数情况下,所有的凋亡信号都会汇集到凋亡的最终执行者 Caspase-3 上。在正常细胞中,Caspase-3 以酶原形式存在,在凋亡早期 Caspase-3 被激活,并执行最后的凋亡程序。 因此可以通过检测 Caspase 3 剪切体的含量或 Caspase 3 的活性来反应细胞凋亡过程。 此外,也可以通过检测 Caspase-3 的底物——PARP 蛋白的含量来检测细胞凋亡细胞凋亡时,相关 DNA 内切酶被激活,进而切断核小体间的基因组 DNA,产生 180-200 bp 的 DNA ladder,暴露的 3’-OH 在末端脱氧核苷酸转移酶 (Terminal Deoxynucleotidyl

    90930编辑于 2023-02-06
  • 来自专栏生命科学

    细胞凋亡抑制剂 | MedChemExpress

    AG825 能明显加速人中性粒细胞凋亡。AG-825 是一种潜在的克服锰诱导的神经毒性或阿尔茨海默病 (AD) 发展的药物。 ErbB2 是 ErbB 酪氨酸激酶受体 (RTK) 家族的成员。 AG-825 (40 μM) 能干扰 SKBR3 和 MDCK 细胞中 ErbB2- 核仁蛋白复合物的形成。 在 SKBR3 和 MDCK 细胞中,AG-825 和 GroA 的联合使用显著降低细胞存活率,促使细胞死亡,且对细胞集落形成具有长期影响,显著减少了两个细胞系菌落的总面积,优于两者单一处理效果。 在三维立体培养中,GroA 和 AG-825 均能干扰 SKBR3 细胞非锚定依赖的生长能力,两者共处理干扰效果更好,还能显著减少通过 Cultrex 基底膜侵入的细胞数,但不影响细胞生长形态。 Bay 61-3606 作用于乳腺癌细胞,通过下调 Mcl-1 促进 TRAIL 诱导的细胞凋亡。 Bay 61-3606 通过两种调节 Mcl-1 的机制使细胞对 TRAIL 敏感。

    52620编辑于 2023-03-02
  • 来自专栏生信菜鸟团

    细胞凋亡—流式细胞仪检测

    细胞凋亡之所以成为人们研究的一个热点,在很大程度上决定于细胞凋亡与临床病毒的密切关系。 因此将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。下面以检测海马神经元凋亡率为例简单介绍细胞凋亡检测的一般步骤及方法。 具体步骤: 1. 海马神经元单细胞悬液的制备:在各组中取生后第7天、生后第21天的仔鼠各两只,冰浴上快速切取海马组织,用冰冷的D-Hanks液洗2-3次,弃上清,剪碎,加入0.25%胰酶1.0ml,37℃恒温水浴30min 3. 检测条件:激发光光栅5nm,发射光光栅10nm,测定温度维持在(37±1℃),避光。取细胞悬液,以激发波长340nm和380nm,发射波长510nm进行扫描。 应用该法可降低晚期凋亡和坏死比例,增加早期凋亡细胞比例。 3.

    1.1K10发布于 2021-11-15
  • AbMole| 焦距细胞焦亡、铁死亡与坏死性凋亡

    大多数肿瘤对细胞凋亡具有先天抵抗力,所以诱导细胞死亡机制而非细胞凋亡已逐渐成为一种新的癌症治疗策略。最近,一些研究揭示了不同的细胞死亡机制和抗肿瘤免疫之间的相互影响。 诱导细胞焦亡、铁死亡和坏死性凋亡与免疫检查点抑制剂(ICIs)联合显示出协同增强的抗肿瘤活性,即使在 ICI 抗性肿瘤中也是如此。细胞焦亡、铁死亡和坏死性凋亡有何不同?其相应的ICI分别有哪些? 死亡细胞通过以下两种主要方法激活细胞焦亡:由 caspase 1/4/5/11 调节的 GSDMD(gasdermin D)依赖性激活和由 caspase 3 调节的 GSDME 依赖性激活。 坏死性凋亡和抗肿瘤免疫坏死性凋亡是一种发生在PRK3和RIPK1下游的程序性细胞死亡形式,它们组装成一个称为坏死体的低聚复合体。 尽管肿瘤细胞坏死性凋亡似乎是肿瘤清除的有利因素,但一些经历坏死性凋亡细胞无法解释坏死性凋亡诱导剂的整个抗肿瘤作用,表明坏死性凋亡与抗肿瘤免疫之间存在潜在联系。

    24210编辑于 2025-12-24
  • 来自专栏生命科学

    细胞凋亡的流式检测?实验步骤+结果解读,速戳! | MCE

    最后,调控细胞生死命运的蛋白家族成员,如 Bax、Bid、Bcl-2 等,它们的表达量也会有所调整,以促进或抑制细胞凋亡的过程[1][2][3]。Section.02如何检测凋亡呢? 案例二为了评估不同浓度的 1,25(OH)2D3 对头肾巨噬细胞 (HKMs) 细胞活力的影响,作者利用 Annexin V-iFluor 488/PI (HY-K1080) 检测细胞凋亡[5]。 图 3. 流式细胞术检测 1,25-(OH)2D3 对 HKMs 细胞凋亡的影响[5]。a. 1,25(OH)2D3 未处理组活细胞百分比为 24.8%。 注意:进行凋亡诱导时的细胞密度建议不超过 1×106/mL,也可根据自己的细胞类型培养至合适的密度。2. 取 0.5 mL 细胞悬液至无菌的离心管内。3. 400 g 离心 3-5 min;弃上清。 Nat Rev Mol Cell Biol. 2008 Mar;9(3):231-41.[3] Anna Chmurska, et al.

    1.4K11编辑于 2025-04-16
  • 流式细胞凋亡检测指南 | 实验原理、步骤与结果分析详解

    关键参数与报告:总凋亡率:Q3%(早期凋亡)+Q2%(晚期凋亡)早期凋亡率:Q3%(早期凋亡)晚期凋亡/坏死率:Q2%(晚期凋亡)坏死/损伤率:Q1%(坏死)存活率:Q4%(活细胞)解读示例:对照组:Q4 (活细胞)占绝大多数,Q3(早期凋亡)和Q2(晚期凋亡)比例很低(通常<5-10%),Q1(坏死)非常低。 凋亡诱导组:-如果药物/处理主要诱导早期凋亡:Q3(早期凋亡)比例显著升高,Q2(晚期凋亡)可能略有升高,Q4(活细胞)降低。 -如果处理时间较长或作用较强:Q2(晚期凋亡)比例显著升高,Q3(早期凋亡)可能仍然较高或开始下降(细胞进入晚期),Q4(活细胞)显著降低。 关键定量分析:-活细胞率(%,Q4-AnnexinV⁻/PI⁻)-早期凋亡率(%,Q3-AnnexinV⁺/PI⁻)-晚期凋亡/坏死率(%,Q2-AnnexinV⁺/PI⁺)-总凋亡率(%,Q3+Q2,

    80610编辑于 2025-11-13
  • Elabscience一步法TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒:抗淬灭强,长效观察凋亡信号不发愁

    产品介绍一步法 TUNEL 原位细胞凋亡检测试剂盒(红色,Elab Fluor® 594/绿色,Elab Fluor® 488)是 Elabscience 推出的高效凋亡检测工具,专为晚期凋亡细胞的 DNA DNA 片段化作为晚期凋亡的标志性特征 —— 凋亡细胞内激活的特异性 DNA 内切酶会将基因组 DNA 切割为 180~200bp 的阶梯状片段,成为判断细胞凋亡状态的核心依据。 检测原理凋亡信号触发:细胞发生凋亡时,特异性 DNA 内切酶被激活,切断核小体间的基因组 DNA,产生带有 3'-OH 末端的 180~200bp 片段。 信号检测:标记后的凋亡细胞会发出红色荧光,通过荧光显微镜观察红色荧光信号,即可实现对晚期凋亡细胞的原位定位与检测,常搭配 DAPI(蓝色荧光)进行细胞核复染以辅助判断。 应用领域一步法TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒适配多种样本类型,广泛应用于基础科研与病理研究场景:基础细胞生物学:体外培养细胞(如 Hela 细胞凋亡诱导效率检测、基因敲除 / 过表达对细胞凋亡的影响研究

    28310编辑于 2025-09-17
  • Annexin V-FITC7-AAD细胞凋亡检测试剂盒原理及应用

    一、细胞凋亡检测的生物学意义细胞凋亡是生物体内一种高度保守的程序性细胞死亡方式,在胚胎发育、组织稳态维持、免疫系统功能调节以及疾病发生发展等众多生理病理过程中发挥关键作用。 二、AnnexinV-FITC/7-AAD检测法的核心原理该检测方法基于细胞凋亡过程中发生的早期关键事件------磷脂酰丝氨酸外翻和细胞膜完整性丧失,实现了对活细胞、早期凋亡细胞及晚期凋亡/坏死细胞的精确区分 3.操作简便快捷:该试剂盒通常提供即用型结合缓冲液和优化的工作液配方,染色步骤简单,孵育时间短(通常15-20分钟),兼容流式细胞术和荧光显微镜平台,便于快速获得结果。 3.免疫学研究:检测T细胞、B细胞等免疫细胞的活化诱导凋亡,研究免疫耐受与自身免疫病的机制。4.毒理学与安全性评价:评估环境毒素、化学药物或纳米材料对细胞的潜在毒性及其诱导凋亡的能力。 3.上机检测:孵育结束后,可立即(建议在1小时内)用流式细胞仪进行分析。设置合适的荧光通道(FITC:FL1;7-AAD:FL3或等效通道),并使用未经染色的细胞和单染管进行荧光补偿调节。

    18010编辑于 2026-02-04
  • 来自专栏纳米药物前沿

    徐兵Angew:酶促自组装的促凋亡多肽选择性杀伤肿瘤细胞

    考虑到凋亡蛋白抑制因子的上调导致了肿瘤对硼替佐米的耐药性,作者在磷酸肽中引入了与凋亡蛋白抑制因子结合的基序(AVPI),能够在细胞内自组装并与凋亡蛋白抑制因子作用。 这些碱性磷酸酶响应性肽组装体不仅阻断了肿瘤细胞中的凋亡蛋白抑制因子以增强硼替佐米的疗效,而且还将硼替佐米重新定位到溶酶体中以降低对正常细胞的毒性。 胶束通过小窝蛋白依赖性的内吞作用进入肿瘤细胞,主要定位于内质网,形成组装体,阻断凋亡蛋白抑制因子,从而显著增强硼替佐米诱导的肿瘤细胞凋亡。 相比之下促凋亡肽和硼替佐米的胶束通过巨胞饮作用进入HS-5细胞,定位于HS-5的溶酶体中,从而阻断了硼替佐米对其靶点(蛋白酶体)的作用,降低了硼替佐米的毒性。 本工作中报道的磷酸肽不仅组装成纳米纤维使癌细胞中的凋亡蛋白抑制因子失活,而且还将正常细胞从抗肿瘤药的副作用中解救出来。

    2.2K10发布于 2021-02-04
  • 来自专栏数据科学(冷冻工厂)

    细胞Seurat - 细胞聚类(3)

    本系列持续更新Seurat单细胞分析教程,欢迎关注! 我们在这里选择了 10 个,但鼓励用户考虑以下事项: 树突状细胞和 NK 与 PC 12 和 13 密切相关的基因定义了罕见的免疫子集(即 MZB1 是浆细胞样 DC 的标记)。 我们发现,将此参数设置在 0.4-1.2 之间通常会为大约 3K 细胞的单细胞数据集带来良好的结果。对于较大的数据集,最佳分辨率通常会增加。可以使用 Idents() 函数找到簇。 AAACATACAACCAC-1 AAACATTGAGCTAC-1 AAACATTGATCAGC-1 AAACCGTGCTTCCG-1 ## 2 3 2 1 ## AAACCGTGTATGCG-1 ## 6 ## Levels: 0 1 2 3 4 5 6 7 8 未完待续,持续更新

    61410编辑于 2024-03-02
  • 来自专栏生命科学

    当坏死性凋亡碰撞肿瘤免疫 | MedChemExpress

    具有代表性的 RCD 是细胞凋亡细胞凋亡 (apoptosis) 是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡 (见推文: 细胞凋亡——如何检测?速戳!) 坏死性凋亡的分子机制不同于凋亡过程,坏死性凋亡的调控过程不依赖于 Caspase 活性,其基本分子机制由两种受体相互作用蛋白激酶 (RIPK1 和 RIPK3) 和混合谱系激酶结构域样假激酶 (MLKL 这些最终导致细胞因子表达升高,然后增强免疫调节过程,例如树突状细胞成熟等。总之,RIPK3 的表达与各种肿瘤类型的肿瘤浸润性免疫细胞群呈显著正相关,从而激活抗肿瘤免疫反应。 但是抑制剂能在某些细胞中诱导细胞凋亡,在区分坏死性凋亡凋亡方面不够特异。因此,需要通过敲除关键蛋白 (如 RIPK3 或 MLKL 阻断坏死性凋亡),补充抑制实验的证据。 ■ 关键蛋白质检测用 Western blot、免疫组化或流式细胞仪来检测坏死性凋亡途径中的关键蛋白质如 RIPK3、RIPK1 和 MLKL 的变化。

    47220编辑于 2023-01-04
  • 来自专栏用户10100972的专栏

    文献分享(1)|S63845:肿瘤研究中的高效MCL抑制剂

    Bcl-2亚家族成员对细胞凋亡起到抑制的作用。2)Bax亚家族Bax亚家族都含有BH3结构域,但是除了BH3结构域之外,也含有其他的BH结构域。 Bax亚家族成员所起到的作用和Bcl-2亚家族成员的功能正好相反,它们起到促进细胞凋亡的作用。3)BH3亚家族这个亚家族内的成员,只含有BH3结构域。它们的作用也是促进细胞凋亡。 它们是细胞凋亡的起始分子。2)凋亡效应亚类Caspase蛋白酶(apoptoticexecution)这一类Caspase包括Caspase-3、6和7。它们是具体执行细胞凋亡的效应分子。 激活后的Caspase-12可进一步剪切Caspase-3,引发细胞凋亡。内质网的功能失调在某种程度上可以影响线粒体通路的凋亡现象。 图片(3)核酸电泳检测细胞凋亡(DNA片段检测法)当细胞发生凋亡时,小分子DNA片段不断增加,高分子DNA片段不断减少。

    84060编辑于 2022-11-23
  • 来自专栏生命科学

    胞葬作用 (Efferocytosis) :程序性死亡细胞临终前最后一站 - MedChemExpress

    凋亡细胞的核苷酸 “Find me” 信号可通过 pannexin 通道 (被凋亡过程中 caspase 3/7的裂解激活) 释放 (图 1)。释放的 ATP 通过嘌呤受体 P2Y 诱导吞噬细胞迁移。 溶酶体内有大量蛋白酶、核酸酶和脂肪酶,可消化吞噬体中凋亡细胞。另外还有 LC3 (微管相关蛋白 1A/1B-轻链 3) 相关吞噬作用 (LAP) 通路(图 3b)。 吞噬细胞吞噬垂死细胞后,LAP PI3K 复合物被募集到含有凋亡细胞的LAP相关吞噬体 (LAPosome),该复合物对 LAPosome 的保持至关重要,并且激活了 LC3 的连接机制。 IL-10 的表达;(3) 吞噬细胞利用凋亡细胞的精氨酸 (Arginine) 驱动肌动蛋白细胞骨架重排,促进之后几轮的凋亡细胞摄取;(4) 糖酵解与葡萄糖输入的增加也促进 ATP 生成和肌动蛋白聚合 这一研究结果于今年 3 月发表在 Science 杂志上。研究者们首先设计了针对细胞凋亡和胞葬作用的传感器。针对细胞凋亡,他们设计了 一种绿色荧光蛋白 (GFP) 探针。

    2.4K30编辑于 2022-12-23
  • 来自专栏单细胞天地

    癌症起源和治疗中的细胞死亡

    这些因子通过抑制E3泛素连接酶X连锁的凋亡蛋白抑制剂(XIAP)来促进凋亡,该抑制剂可以抑制caspase-3凋亡的关键效应因子)。 ? 图1. 相反,一些细胞通过凋亡作为应激反应来响应药物引起的变化。诸如DNA损伤反应和内质网应激反应等应激反应可以触发细胞凋亡。例如,通过增加促凋亡的BH3蛋白的转录和转录后过程(图3)。 图4.促凋亡的BH3蛋白是通过多种抗癌药物杀死肿瘤细胞的关键启动者 许多癌细胞带有缺陷,例如p53中的突变,这些缺陷会损害BH3蛋白的表达,而BH3蛋白对于响应抗癌药启动细胞凋亡至关重要。 失去了应激诱导的凋亡途径上游激活剂的恶性细胞,例如p53或促凋亡的仅BH3蛋白,或过表达的凋亡抑制剂,例如BCL-2,将对较低剂量的化学疗法或放射线产生抵抗力 。 为了克服这种抗药性的机制,模仿促凋亡的BH3蛋白的小分子化合物(BH3模拟物,与抗凋亡的BCL-2家族成员结合)似乎是治疗癌症的理想选择 。

    1.6K30发布于 2021-03-10
  • AbMole丨SN-38:调控DNA损伤、细胞凋亡与免疫应答的多功能分子

    SN-38可通过稳定拓扑异构酶I-DNA断裂复合物,阻止DNA单链断裂的重新连接,进而诱导细胞凋亡[1]。并且,SN-38还可以诱导细胞的氧化应激和线粒体凋亡通路的激活[2]。 SN-38对多种肿瘤细胞系(如HT1080、HCT116、A204等)表现出显著细胞毒性。 例如,在横纹肌肉瘤A204细胞中,SN-38与姜黄素(Curcumin)组成的纳米粒(SN-38/CUR-PNP)显示出亚纳摩尔级细胞毒性[3]。 .:86639-52-3)还具有免疫调节作用,可通过剂量依赖性调控肿瘤细胞内的FoxO3a(上调)和c-Myc、PD-L1(下调)的表达,增强自然杀伤(NK)细胞的功能。 此外,低剂量的SN-38可促进NK细胞分泌干扰素-γ(IFN-γ),并提升其对肿瘤细胞的杀伤活性。

    11410编辑于 2026-01-07
  • Q&A 汇总 | 细胞凋亡手册免费领啦!实验总抓狂?一册在手不迷茫~ | MedChemExpress (MCE)

    血小板的凋亡标志物包括线粒体内膜膜电位 (Δφm) 的去极化、细胞色素 c 的释放、促凋亡和抗凋亡蛋白 Bcl-2 家族的表达含量变化、Caspase-3 的激活、磷脂酰丝氨酸 (PS) 的暴露、血小板收缩 右上象限 Q2:Annexin V+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞和坏死细胞。 右下象限 Q3:Annexin V+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。 Caspase 抑制剂是广泛应用的细胞凋亡抑制剂,例如如 Ac-DEVD-cho, z-VAD-fmk, Z-IETD-fmk, Z-LEHD-fmk, 分别靶向 Caspase 3、泛-Caspase 11 细胞凋亡细胞坏死能够同时存在吗? 细胞凋亡细胞坏死能够同时存在。 细胞死亡是一个复杂的生物学现象,细胞凋亡细胞坏死是两种不同的细胞死亡方式,细胞在不同的刺激下可能会经历不同的死亡途径。 例如,在炎症性疾病中,某些炎症因子或细胞因子可以同时激活凋亡和坏死的相关信号通路 (PMID: 11997180)。 3.

    34310编辑于 2024-10-17
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