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- <script> //ctrl,shift,alt,meta 系统修饰键,补充 exact来自专栏软件工程师Michael
Vue3--系统修饰键
tips：可以使用ctrl,alt,shift,meta四种系统修饰键meta在不同操作系统中代表的是不同的按键，Windows中是win键，Apple系统中是command键.exact是用来修饰系统修饰键 ，表示精准控制系统修饰键可以与其他修饰键一起使用example：<! =device-width, initial-scale=1.0"> <title>Document</title> <script src="https://unpkg.com/vue@<em>3</em>" --按下ctrl,shift,alt,meta都是同样的效果-->
29150编辑于 2022-09-15
css3 UI 修饰——回顾
.shadow{width: 300px; height: 150px; margin: 0 auto;} .shadow img{ box-shadow: 3px 3px 4px #000;} </style>
python高级编程-Part3 修饰器
修饰器用来包装函数，增加额外的功能，而且应能够修饰一批函数，减少代码重用。 简单的修饰器 一个函数接收函数对象作为参数，并且返回函数对象，这样的函数可以成为一个修饰器，形如下面的定义： def deco(func): def _deco(*args): print "do something" func(*args) return _deco 上面的修饰器中，func称为被修饰的函数，在执行func前做一些额外的初始化工作 修饰器定义完成后，使用@去修饰函数，如下面所示： @deco #实际相当于执行了f = deco(f) def f(x): print x 经过上述处理后 接着，当我们调用f("hello")时，将会得到下面的输出： do something hello 带参数的修饰器 修饰器是一个函数形式，当然可以传入参数，此时，必须多加一层嵌套用来接收参数
【辰辉创聚生物】如何选择合适的重组蛋白表达系统？
3. 选择哪种真核系统：酵母 (yeast)、昆虫细胞 (insect cells)、哺乳动物细胞 (mammalian cells)？ 无或很有限的翻译后修饰（尤其是复杂糖基化）；难以正确折叠含多个二硫键、多域蛋白或膜蛋白；易形成包涵体；一些蛋白可能对 E. coli 毒性较大。 哺乳动物细胞 (Mammalian cells)提供最接近天然的折叠环境和 PTMs（如复杂 N‐糖基化、O‐糖基化、磷酸化、以及蛋白修饰/剪切/定位等）；适合复杂蛋白、抗体、疫苗蛋白、膜蛋白等；表达蛋白功能性高 3. * 是否对蛋白活性 /折叠 /糖基化有严格要求？ * 所需蛋白纯度、数量、时间节点。3.
【辰辉创聚生物】重组蛋白表达系统技术详解：从原核到真核的系统比较与选择指南
大肠杆菌系统非常适合表达非糖基化的、分子量较小的蛋白。然而，该系统在表达复杂折叠结构或需要后转译修饰的蛋白时常常面临可溶性低、包涵体形成等技术难题。 酵母系统兼具原核表达系统的易操作性和真核系统的部分修饰能力：能进行有限的糖基化和折叠辅助。表达速度较快，且培养条件简单。可在发酵罐中实现高密度培养，提高重组蛋白产量。 该系统能够：支持复杂蛋白质的折叠与多种后转译修饰。表达大分子量蛋白或多亚基复合体。昆虫细胞系统在科研试剂领域常用于结构生物学、功能分析需要接近天然构象的蛋白表达。3. 四、各表达系统技术比较表达系统优势限制典型应用大肠杆菌低成本、快速表达、高产量无真核修饰，易形成包涵体小分子蛋白、无修饰蛋白酵母表达真核修饰、易培养糖基化模式与哺乳动物不同中等复杂度蛋白昆虫细胞良好折叠 • 后转译修饰（PTM）真核系统特有的修饰方式，如糖基化、磷酸化等，在药物靶标验证、结构分析中常见。
【辰辉创聚生物】如何选择重组蛋白表达系统：原核 vs. 真核，融合 vs. 分泌
它是重组蛋白高效表达的首选平台，尤其适合对产量有大规模需求的非修饰蛋白生产。技术考量：大肠杆菌缺乏真核细胞的翻译后修饰机制，如复杂的糖基化、特定的磷酸化等。 主要挑战：复杂真核蛋白易形成包涵体（不溶性聚集体）；缺乏糖基化等修饰可能影响蛋白功能与稳定性。 兼具生长快速、易于高密度发酵和部分真核修饰能力（如二硫键形成、基础糖基化）。其强大的分泌表达能力，使得分泌表达和下游纯化极为方便，是许多细胞因子和酶类的理想选择。昆虫细胞-杆状病毒系统：功能强大。 哺乳动物细胞系统（如HEK293, CHO）：能提供最接近人类天然蛋白的修饰环境，尤其是复杂的N-连接糖基化。 对于最终应用要求严格无标签的蛋白（如结晶、某些体内实验），需要通过位点特异性蛋白酶（如TEV、3C蛋白酶）将标签切除。
做科研，蛋白磷酸化修饰是研究的重点之一
特点：涵盖蛋白修饰和基因修饰的综合性数据库PhosphoSitePlus®类型：磷酸化、泛素化和乙酰化等修饰位点数据库。特点：提供实验验证的蛋白质修饰位点，包括激酶和磷酸酶底物，以及相关的生物学数据。 dbPTM类型：全面的蛋白质修饰数据库。特点：收录了多种蛋白质修饰类型，包括磷酸化、糖基化、泛素化等，并提供修饰位点的详细信息。UniProt类型：蛋白质序列和功能数据库。 GlyConnect类型：蛋白质糖基化修饰数据库。特点：提供糖基化位点的详细信息，以及糖蛋白的生物学功能。PepBank类型：蛋白质磷酸化肽段数据库。 特点：专注于人类蛋白质的甲基化修饰，提供位点信息和生物学功能。O-GlycBase类型：蛋白质O-连接糖基化数据库。特点：提供O-连接糖基化位点的详细信息，以及相关的蛋白质序列和结构。 特点：提供蛋白质的三维结构信息，包括修饰位点的具体位置。PTMfunc类型：蛋白质修饰功能分析数据库。特点：分析蛋白质修饰的功能性后果，帮助理解修饰对蛋白质功能的影响。
【辰辉创聚生物】CHO/HEK293细胞重组蛋白表达｜哺乳动物蛋白表达系统｜蛋白表达技术指南
这两类宿主细胞在生物化学、结构生物学、免疫学及药物发现等研究中占据核心地位，其技术基础在于利用哺乳动物细胞的翻译后修饰能力，使目标蛋白获得正确的三维折叠、二硫键形成与复杂糖基化修饰，从而更贴近天然蛋白结构和性质 哺乳动物细胞表达系统的核心技术特征哺乳动物细胞相比于原核或酵母表达系统，最显著的技术优势来源于其能够进行完整的糖基化修饰及其他复杂的翻译后修饰。 此外，CHO细胞表达的蛋白也常被用于抗体片段、融合蛋白等需要复杂折叠且带有糖基化的试剂生产。 HEK293系统特别适合表达需要更接近人源翻译后修饰的蛋白，因其来自人细胞而具有天然的糖基化及其他修饰能力，可以减少因非人源修饰对实验结果的潜在影响。 科研级重组蛋白通常需评估其糖基化状态、聚合状态及活性，这不仅决定蛋白作为研究试剂的可靠性，也关系到实验结果的科学性。
【辰辉创聚生物】酵母蛋白表达|酵母表达系统|异源蛋白表达|真核蛋白表达
它不仅具备微生物生长迅速、培养成本低廉和遗传操作简便等优点，同时还能进行真核细胞所特有的翻译后修饰，如糖基化、二硫键形成和蛋白折叠修复等，在重组蛋白的基础研究与工业化生产中被广泛采用。 然而，酿酒酵母的糖基化模式与高等真核细胞差异较大，往往导致表达的重组蛋白出现高度甘露糖化修饰，从而影响其在医学和工业应用中的性能。 相比酿酒酵母，毕赤酵母的糖基化修饰更接近哺乳动物细胞，表达的蛋白结构与活性更易保持接近天然状态。 翻译后修饰与分泌机制与原核表达系统相比，酵母表达系统的突出优势在于其翻译后加工能力：糖基化：酵母能够进行 N-和 O-糖基化，但其糖基化结构与哺乳动物存在差异，需通过工程改造以获得更接近人源的修饰模式。 5' UTR 调控：最新研究显示调整 P. pastoris 5'UTR 中“G”核苷酸频率可显著提高表达强度；通过设计 KZ3 变体组合表达强度提升明显。
Vue3中的事件修饰符
tips:. prevent：阻止默认事件的发生 默认事件指对DOM的操作会引起自动执行的动作，比如点击超链接的时候会进行页面的跳转，点击表单提交按钮时会重新加载页面等，使用".prevent"修饰符可以阻止这些事件的发生 =device-width, initial-scale=1.0"> <title>Document</title> <script src="https://unpkg.com/vue@<em>3</em>" --Vue3中的事件修饰符-->
【辰辉创聚生物】一文读懂蛋白表达
大肠杆菌系统适合表达简单、无复杂修饰的小分子蛋白，且速度快、成本低，但对复杂折叠和糖基化蛋白效果有限。酵母系统则提供一定程度的翻译后修饰，适合中等复杂度蛋白。 昆虫细胞和哺乳动物细胞表达系统适合复杂蛋白和需要完整翻译后修饰的蛋白，虽然成本和时间较高，但产物质量更贴近天然状态。3. 蛋白表达优化科研中，蛋白表达量的提升是反复优化的过程。 劣势：无法进行复杂翻译后修饰，易形成包涵体。应用建议：适合结构域表达、酶活性蛋白、疫苗抗原的初步筛选。酵母表达系统（如毕赤酵母）优势：可进行简单糖基化，表达环境相对简单。 劣势：糖基化模式与哺乳动物有所不同，可能影响蛋白活性。应用建议：适合中小分子蛋白、酶类和疫苗蛋白的表达。 昆虫细胞表达系统（Baculovirus）优势：能表达复杂蛋白、进行较为完整的糖基化和其他翻译后修饰。劣势：成本高，表达周期较长。应用建议：适合结构复杂、需要功能性折叠的哺乳动物蛋白。
Python修饰符 （一）—— 函数修饰
今天被问到Python函数修饰符，顺手写写。 Python函数修饰符，“@”，与其说是修饰函数倒不如说是引用、调用它修饰的函数。 但是，Python解释器读到函数修饰符“@”的时候，后面步骤会是这样了： 1. 去调用 test函数，test函数的入口参数就是那个叫“func”的函数； 2. test函数被执行，入口参数的（也就是func函数）会被调用（执行）； 换言之，修饰符带的那个函数的入口参数，就是下面的那个整个的函数 函数先定义，再修饰它；反之会编译器不认识； 2. 修饰符“@”后面必须是之前定义的某一个函数； 3. 每个函数可以有多个修饰符。
【辰辉创聚生物】哺乳动物细胞蛋白表达|HEK293蛋白表达|CHO细胞蛋白表达|哺乳蛋白瞬时表达
其优点包括：1、生长稳定，可在无血清、悬浮条件下大规模培养；2、能够进行复杂的 N-和 O-糖基化修饰，产物符合人体药用标准；3、已建立完整的细胞株筛选、基因扩增和工艺优化流程。 NS0 与 SP2/0 骨髓瘤细胞这些小鼠来源细胞常用于抗体表达与筛选，但近年由于糖基化型式与人体存在差异，应用有所减少。 3. QMCF 系统一种介于瞬时与稳定表达之间的快速平台。基于外源质粒的外源保留与复制，可持续表达2–3周，产量可达 1 g/L，且一周内可建立生产细胞库。哺乳动物细胞蛋白表达载体构建与优化策略1. 3. 蛋白表达培养悬浮培养配合优化培养基（如 Expi293 系统），可在一周内获得毫克至克级蛋白产量。4. 翻译后修饰与正确折叠机制哺乳动物细胞能够进行复杂的 PTMs，包括：1、N-糖基化与 O-糖基化：对蛋白稳定性、分泌效率和生物活性至关重要；2、二硫键形成：维持正确的三维结构，特别是抗体和受体蛋白；3、
探索ImmGen: 3-查询小鼠基因表观遗传修饰
在ImmGen 的Chromatin模块，不同组织不同免疫细胞发育阶段或刺激后的开放染色质区域ATAC-seq数据、组蛋白修饰CUT&RUN以及转录因子分析。 2.分析组蛋白修饰：在这个界面我们可以选择不同细胞谱系、细胞亚群、染色质标记(主要是组蛋白修饰与CTCF）、组织来源、质检或者实验室来源来筛选样本。如下所示，我们依然选择胸腺来源的T细胞亚群。 输入目的基因位点，就可以查看这个基因位点在胸腺细胞不同发育阶段（不同细胞亚群中）中的H3K27ac修饰区域的差异。 3.转录因子分析：通过开放染色质区域（ATAC-seq)数据进行TF motif分析后，可以反过来查询转录因子在所有样本中染色质开放区域的富集情况。是一个总结性的结果。 如基因是否在发育阶段发挥作用，基因是否具有组织特异性、基因位点是否特定表观修饰特征等，都是要结合具体的研究目的。因此就像一本字典，提供参考资料。但如何写出好文章还需要中心思想明确、结构逻辑要合理。
杆状病毒表达系统为何成为蛋白表达首选
昆虫细胞源于鳞翅目或双翅目等昆虫类群，它们的细胞培养比哺乳动物细胞条件简单、成本较低，但仍能进行真核生物所需的复杂后翻译修饰，如部分糖基化、蛋白折叠、分泌、磷酸化等。 真核蛋白的正确折叠与后翻译修饰与微生物表达系统相比（如大肠杆菌），昆虫细胞具有复杂的内质网／高尔基体系统，能进行真核蛋白折叠、二硫键的形成、某些类型的糖基化、磷酸化等。 部分蛋白在没有这些修饰时活性或稳定性会大幅下降。 文献中也报告了通过基因工程改造昆虫细胞，使其近似哺乳动物糖基化类型（humanized glycosylation），进一步提升重组蛋白（尤其是糖蛋白）在功能和免疫原性方面的质量。3. 糖基化人性化（Glycoengineering）：工程昆虫细胞或工程病毒载体，以接近哺乳动物类型的 N-糖型结构，减少致免疫性的不良糖基化，增强蛋白药物或疫苗的质量与功效。
【辰辉创聚生物】昆虫系统表达-大分子蛋白/跨膜蛋白表达
大肠杆菌表达速度快、成本低，但缺乏复杂的翻译后修饰 (post-translational modifications, PTMs)；酵母能完成部分修饰，但糖基化模式与人类差异较大；哺乳动物细胞系统修饰最接近天然环境 其优点是：①．启动子强，表达量高；②．可表达多亚基复合体与病毒样颗粒 (VLP)；③．能进行真核特有的 PTMs，如糖基化、磷酸化。 不足之处在于：构建重组病毒流程较复杂，感染后细胞寿命有限，且部分糖基化模式与人类差异明显。 翻译后修饰能力昆虫细胞具备诸如磷酸化、N-糖基化、泛素化、乙酰化等 PTMs 能力，虽与哺乳动物系统稍有差异，但通过基因工程改造可接近人类 glycosylation 模式。 3. 提升表达效率的方法-- 抗凋亡基因（如 P35、vankyrin）用于延长感染后细胞寿命，提高蛋白产量。-- RNA 干扰沉默促凋亡基因，如 TSC1 或 caspase，可推动表达效率。
读《糖生物学基础》第四版
我接触糖生物学的时间不长，大约2022年，当时一个项目是做单细胞水平的糖基化测序。 那是人生初见，就从教科书学起，当时买了糖生物学方面的两本书： 糖生物学基础 糖基化修饰与糖复合物功能 它们让我了解到一个新的组学及其特点，不至于和别人介绍单细胞糖基化测序的时，有什么大的差池。 这里的生物学价值包括但不限于： 细胞膜表面的糖基化事件是细胞识别关键信息，被誉为细胞的面膜 免疫细胞表面的糖基化信息，可以表征其状态的变化，糖基化信息可以与单细胞拟时序轨迹相结合 细胞类型的糖基化是有异质性的 除了方法学的开发，应用层面也有文章陆续见刊，远的不说，2025年3月就有学者发表文章SUGAR-seq reveals the transcriptome and N-linked glycosylation ADO2 中单核细胞的异质性，各细胞亚型中观察到的异常糖基化修饰可能在骨质疏松症的发病机制中发挥关键作用。
【辰辉创聚生物】天然蛋白vs重组蛋白：核心差异、应用选择与质量控制全解析
三、关键分子特性差异翻译后修饰（PTMs）：天然蛋白：携带其原始生物宿主所产生的完整、天然的PTMs谱系，如糖基化、磷酸化、乙酰化、硫酸化等。 这些修饰的类型、位点和异构体复杂度高，是介导其精确生物学功能的关键。例如，天然促红细胞生成素（EPO）的糖基化对其体内半衰期和活性至关重要。重组蛋白：其PTMs谱完全取决于所选用的表达宿主系统。 大肠杆菌：无法进行真核特有的复杂糖基化，可能形成包涵体。酵母：能进行糖基化，但糖链类型为高甘露糖型，与哺乳动物差异较大。昆虫细胞（杆状病毒系统）：糖基化简单，多为寡甘露糖型。 哺乳动物细胞（如CHO、HEK293）：能产生最接近人类蛋白质的复杂型N-糖基化和其他修饰，但糖型仍可能具有宿主细胞系特异性，与天然蛋白的微观异质性存在差异。 Nature 422, 198–207 (2003).3.Liu, C. et al.
【辰辉创聚生物】重组蛋白表达完全指南：融合、分泌与包涵体表达解析
不同体系在翻译后修饰能力、折叠环境、成本和周期上差异显著，需根据目标蛋白的内在性质（如分子大小、二硫键数量、糖基化需求、毒性等）进行综合考量。 它适用于无翻译后修饰（如复杂糖基化）要求的蛋白，尤其是原核来源或结构简单的真核蛋白。对于易形成包涵体的蛋白，可尝试融合促溶标签、使用特殊菌株或优化培养条件来获得可溶性表达。 酵母表达系统（如毕赤酵母、酿酒酵母）：兼具原核系统的生长快速、操作简便以及真核系统的部分翻译后修饰能力（如二硫键形成、基础糖基化）。它是分泌表达的理想选择之一，能向培养基中分泌大量蛋白，便于纯化。 适用于需要正确折叠和中低复杂度修饰的真核蛋白生产。昆虫细胞-杆状病毒表达系统：该系统能完成大多数真核蛋白的复杂翻译后修饰，如糖基化、磷酸化等，蛋白折叠正确率与活性高。 哺乳动物细胞表达系统（如HEK293、CHO细胞）：能够提供最接近天然人类蛋白的翻译后修饰环境，特别是复杂的N-连接糖基化。
AbMole小课堂丨Tunicamycin ：经典N-糖基化抑制剂的科研应用
Tunicamycin（衣霉素）是一种从链霉菌（Streptomyces）中衍生的天然产物，主要作为N-连接糖基化抑制剂，通过靶向GlcNAc-1-P-transferase (GPT)抑制N-糖基化的初始步骤 可导致细胞间黏附强度降低和桥粒形成受损[6]，Tunicamycin在Ca3.1-T型钙通道研究中处理小时，导致激活曲线向去极化电位偏移[6]，衣霉素在Ibaraki病毒（IBAV）感染模型中，抑制了NS3糖基化和病毒传播 重庆医科大学的科研团队在上述文章中使用了AbMole的Tunicamycin（衣霉素，AbMole，M4798），研究发现：RPN1在TNBC（三阴性乳腺癌）细胞中异常高表达，与肿瘤增殖增加和不良预后相关；RPN1科介导PD-L1的翻译后修饰 Tunicamycin是一种蛋白质N-糖基化抑制剂，在本文中的主要作用是：抑制蛋白质的N-糖基化过程、验证RPN1对PD-L1糖基化的调控作用、证明糖基化对PD-L1稳定性的影响。 Nature structural & molecular biology 2018, 25 (3), 217-224.[3] Kataoka, H.; Akiyoshi, T.; Uchida, Y.
