- 综合排序
- 最热优先
- 最新优先
AbMole细胞实验必备：G-418--构建稳定转染细胞株的关键分子
G-418（遗传霉素，AbMole，M2719）一种在分子生物学和细胞生物研究中常用且重要的工具分子，多用于细胞转染后的筛选、转基因动植物研究等实验。 在真核细胞转染或者原核转化中，实验人员可以选择Neo基因（编码氨基糖苷磷酸转移酶，APH）作为筛选标记，与目的基因串联一起进行转染/转化。 成功转染的细胞即可获得对 G-418 的抗性。 G418结构式二、G-418用于稳定转染细胞筛选在细胞生物学研究中，稳定转染细胞系的建立是深入研究基因功能、信号通路等的重要手段。 G-418（遗传霉素，AbMole，M2719）通过其抗性筛选作用，可以帮助筛选出稳定表达外源基因的阳性细胞株，这些细胞株在后续的细胞扩增和制备过程中能够保持其遗传稳定性。
21910编辑于 2025-12-01- 来自专栏生命科学
细胞转染小秘籍 | MedChemExpress
先前小 M 已经介绍过各种转染方法的优缺点了 (见 “六合心法” 有三式~)，在传统的转染方法 (如磷酸钙法、电穿孔法、病毒法等) 转染效率低、细胞毒性大、重复性差的情况下，以 Lipo3000 为主的阳离子脂质体转染试剂脱颖而出 但对于一些难转染细胞，建议刚开始转染前使用无血清培养基，至少转染一小时后再换成有血清培养基。小白: 那培养基中含有抗生素会对细胞转染有影响吗？小M: 可添加抗生素。 如有必要，可在 1:1-1:5 的范围内调整以优化转染效果。最佳转染条件因不同的细胞类型和培养条件而有所区别，转染前，可做预实验摸索最佳转染比例。 小M: 此外，除了转染质粒 DNA，我们的转染试剂也适用于 RNA 转染~小白: 那可以同时转染两个质粒吗？小M: 当然也可以啦！ 宿主范围广MCE PolyFast Transfection Reagent 对多种常见细胞具有高水平转染效率，也可转染一些原代细胞和难转染细胞。
49210编辑于 2023-02-15 - 来自专栏生命科学
MCE | 抗生素抗性筛选
转染与抗生素筛选 转染 (Transfection) 是真核细胞主动或被动导入外源核酸片段而获得新表型的过程，引入的遗传物质 (DNA 和 RNA) 稳定或暂时存在于细胞中，据此，转染可分为稳定转染和瞬时转染 稳定转染：引入的遗传物质常带选择性标记基因，它们被整合到宿主的基因组中，即使在宿主细胞分裂传代后也能维持转基因的表达。即稳转的细胞系通过一些选择性标记反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。 关于抗生素抗性筛选：携带抗生素抗性标记的载体进入细胞，转染成功的细胞在含有抗生素的选择培养基中生长，而不带有抗性基因的细胞会被抗生素杀死，最后获得稳定的带抗性细胞株。 因此，抗生素抗性标记是区分稳定转染和瞬时转染的有效方法。 在原核/真核生物转染实验中常用的抗生素有很多，例如嘌呤霉素、G418、卡那霉素、四环素和博来霉素等等。 FEBS Lett. 1997 Jun 16;409(3):333-8. 11. R L Yenofsky, et al.
67820编辑于 2023-03-10 基因过表达细胞系构建与应用全攻略 | 稳定转染技术 | 功能验证方法 | 细胞模型构建 | 蛋白表达优化
相较于瞬时转染，稳定过表达细胞系具有表达稳定性高、细胞群体均质性好、实验结果可重复性强等技术优势，已成为基因功能研究、信号通路解析和药物靶点验证等领域的标准化研究工具。 技术原理基因过表达系统的核心原理是将外源基因整合至宿主细胞基因组中，使其在细胞分裂过程中稳定遗传。 第二阶段：细胞转染与筛选选取适宜宿主细胞（如HEK293、CHO或特定细胞系），采用脂质体转染、电穿孔或慢病毒转导等方法导入表达载体。转染48-72小时后，添加相应抗生素进行筛选。 第五阶段：稳定性评估将候选细胞系在不含筛选压力的培养基中连续传代15-30代，定期检测目标基因表达水平。表达下降不超过30%的细胞系可视为稳定表达株。 提高翻译效率表达框架优化：5'-UTR和3'-UTR序列影响表达稳定性常见问题处理：表达沉默：更换载体骨架或添加绝缘子元件细胞毒性：采用诱导型表达系统表达不稳定：优化筛选压力维持策略应用领域基础研究应用
36410编辑于 2026-01-13- 来自专栏Rust语言学习交流
2020-11-19 Rust1.48稳定版发布！
Rust1.48稳定版发布！ Rust 1.48.0 版本在11月19日发布了。 pending和ready两个future稳定了 新版本rustdoc可以直接使用内部文件链接语法了 E.g. /// Uses [std::future]将自动生成一个链接到std::future的文档 从这里可以了解相关更多信息 Read More: https://blog.rust-lang.org/2020/11/19/Rust-1.48.html Github: (https://github.com /rust-lang/rust/blob/stable/RELEASES.md#version-1480-2020-11-19) 轻松编写rust事件 这是之前日报提到过的rust自定义事件(https
58520发布于 2020-11-23 - 来自专栏新智元
Windows 11 Beta版上线：更加稳定 但bug也不少
---- 新智元报道 来源：Microsoft 编辑：Su Emil 【新智元导读】微软提供了Windows 11的Beta版给大家尝鲜：通常而言，beta版与正式版已经十分接近，并且更加稳定可靠 再过两个月，Windows 11正式亮相！ 虽然没有官宣，但是近日微软官方披露的一份新文件表示，Windows 11 将会在今年 10-11 月期间某个时间点发布，而OEM厂商需要在9月的第3周前提交它们的驱动程序。 通常而言，正式版本会在驱动程序更新之后1个月左右发布，所以Windows 11大概率会在10月下旬正式亮相。 相比Windows 10，Windows 11在UI设计上的变化可谓惊艳。 而Beta版通常与公开版就非常接近了，相比Dev版，它提供了更可靠也更稳定的系统表现。
1.9K50发布于 2021-08-25 - 来自专栏老张的求知思考世界
全链路压测(11)：聊聊稳定性预案
前言 全链路压测出现的初衷是阿里为了解决双十一线上系统在峰值流量冲击下的稳定性和可用性问题，在后续落地及不断的演进过程中，出现了很多技术领域的最佳实践。 放在全链路压测领域，其实稳定性预案并非全链路压测体系中的一部分，而是可以看做一个独立的细小领域，但又和全链路压测有重要的联动关系。 线上服务负载过高的监控告警通知方案； 用户无感知的灰度发布、无损发布等方案； 限流、降级、熔断等服务治理领域的技术方案； 线上服务防止黑客攻击的各种高防和安全应对方案； 大促活动预案 一般大促活动都是指类似618、双11 而系统的稳定性，无论从用户体验还是业务目标达成的角度来看，都是不可忽视的一环。 因此预案的作用就呼之欲出：从技术的角度出发，为业务目标的达成提供多维度的稳定性保障。 如何制定预案？ 上面列举了很多常见的稳定性预案，在我看来制定预案是一个经验+评估的问题。
71220编辑于 2022-05-17 - 来自专栏Rust语言学习交流
【Rust日报】2022-11-09 稳定复现的 HashMap 陷阱
稳定复现的 HashMap 陷阱 当我们看了很多哈希函数的介绍并切换到一个你认为更快的哈希函数上面时，大部分代码都获得了预期的速度提升，但有些部分却莫名其妙地变慢了很多，尤其是在处理大型 hashMap 如果这听起来很熟悉，那么您可能遇到了稳定复现的 HashMap 陷阱。Google SwissTable 是 2017 年 CppCon 上被发表的一个高性能的 hashTable 。
73630编辑于 2022-11-28 - 来自专栏JAVA
JDK 11: “JDK 11：稳定、可靠、兼容性优秀的Java开发工具包
JDK 11: “JDK 11：稳定、可靠、兼容性优秀的Java开发工具包” 摘要 作为Java开发者，我们经常需要依赖于稳定可靠的开发工具包来支持我们的项目。 JDK 11作为Java生态系统中的一个重要版本，为我们带来了许多令人振奋的新特性和改进。 引言 随着软件开发的不断演进，Java作为一种稳定、可靠的编程语言，一直在不断地发展和完善。 JDK 11作为Java平台的一个重要版本，不仅保留了之前版本的稳定性和可靠性，还引入了许多新特性和改进，进一步提升了开发者的编程体验。 在本文中，我们将探讨JDK 11的各种特性，并探讨其对Java开发的影响。
81810编辑于 2024-11-20 - 来自专栏PostgreSQL研究与原理解析
Percona PostgreSQL 11分支即将发布release稳定版
2019年8月15日，percona公司宣布即将发布PostgreSQL11的beta release分支。 https://www.percona.com/doc/postgresql/11/release-notes-v11.html
65620发布于 2020-10-28 - 来自专栏信息技术智库
10 年稳定支撑双 11 ，国产数据库之光 OceanBase
简单来说，就是牛，非常牛，双 11 知道吧？ OceanBase 已连续 10 年稳定支撑双 11，创新推出“三地五中心”城市级容灾新标准，在被誉为“数据库世界杯”的 TPC-C 和 TPC-H 测试上都刷新了世界纪录。
5K50编辑于 2023-03-27 【辰辉创聚生物】CHO/HEK293抗体表达平台｜高效哺乳动物细胞表达｜快速重组抗体生产
CHO表达系统已经被大量应用于抗体生产，主要因为它表达稳定，适合规模化制造。HEK293表达系统则更灵活，转染效率高，适合做抗体快速表达和初期筛选。 瞬时转染技术的优势瞬时转染是快速表达重组抗体的常用方法。通过把抗体基因片段导入细胞，不用建立稳定株，就能在几天内获得大量蛋白。这对于抗体快速表达和功能验证很有帮助。 尽管表达时间短，但如果优化转染条件，依然可以获得不错的产量。稳定细胞株构建相比瞬时转染，稳定细胞株构建更适合长期抗体生产。过程包括载体整合、筛选单克隆细胞、表达验证等。 抗体表达平台依托CHO和HEK293等哺乳动物细胞表达系统，结合瞬时转染和稳定细胞株构建技术，可以满足从抗体快速表达到大规模生产的不同需求。 A: CHO表达系统适合大规模、稳定的抗体生产，蛋白质修饰更符合工业化标准；HEK293细胞则转染效率高、表达速度快，常用于抗体快速表达和初步功能验证。选择时需根据项目阶段和需求确定。
40600编辑于 2025-08-06NK+HEK293细胞双杀！AD600150玩转Trim28-Eomes互作实验
本文章主要研究方向研究方向：本文主要研究了热休克蛋白gp96（也被称为Hsp90B1或Grp94）在调节自然杀伤（NK）细胞发育、成熟和功能中的作用，特别是通过稳定转录因子Eomesodermin（ • HEK293细胞： ◦ 转染Flag-gp96和His-Eomes（验证gp96对Eomes稳定性的调控）。 转染实验数据及贡献分析实验数据定位1. 原代NK细胞转染Eomes（Fig.5E）： ◦ 实验内容：通过转染Eomes过表达质粒，恢复gp96缺陷型NK细胞中DX5的表达。 HEK293细胞转染gp96与Eomes（Fig.6G）： ◦ 实验内容：过表达gp96增强Eomes的蛋白稳定性。 5.转染试剂的核心贡献• 高效递送能力：成功转染难转染的原代NK细胞（转染效率>60%），为功能挽救实验提供技术保障。
22110编辑于 2025-05-27【辰辉创聚生物】稳定细胞系构建｜蛋白表达细胞株｜高表达细胞株
在构建过程中，选择合适的宿主细胞、表达载体设计、转染方法、筛选单克隆细胞株及表达优化，是保证蛋白表达细胞系质量的关键步骤。 2. 宿主细胞与表达系统 使用最多的宿主细胞包括CHO细胞系构建和HEK293稳定表达系统，两者均为哺乳动物细胞，具备良好的蛋白折叠和人源化糖基化能力，广泛应用于定制细胞系和转染稳定细胞株开发。 表达载体通常设计为双基因表达系统，确保轻链与重链同步表达，搭配强启动子和筛选标记，提高转染效率及筛选成功率。 4. 转染与筛选技术 转染技术主要分为瞬时转染和稳定转染两类。 稳定转染通过抗性药物筛选，获得持续表达的细胞株。筛选阶段重点在于利用药物筛选结合单克隆挑选，确保获得单克隆细胞株。 现代技术结合自动化筛选平台，加速高效筛选高表达细胞株，显著提升筛选效率与表达水平。 A:基因整合细胞系表达稳定，适合长期培养和生产；瞬时表达周期短，但表达不稳定。 Q5：转染稳定细胞株有哪些常用方法？ A:常见方法包括脂质体转染、电穿孔及病毒介导转染等。
40610编辑于 2025-09-18哺乳动物重组蛋白表达｜HEK293/CHO细胞蛋白表达服务｜哺乳表达
细胞转染细胞转染即将构建好的载体导入细胞。常用的转染方法有：①脂质体转染操作简便，适合小规模实验；②PEI转染性价比高，适合中等规模；③电转染适合难转染的细胞。4. 蛋白表达一般情况下，细胞转染后48-72小时即可收获蛋白。对于难表达的蛋白，可以尝试低温培养，例如30-33℃。5. 蛋白收获分泌表达的蛋白可直接收集培养上清，通过离心去除细胞碎片即可。 HEK293细胞转染效率高，适合快速小规模表达；CHO细胞则更适合需要长期稳定表达和大规模生产。Q3：影响哺乳动物蛋白表达量的关键因素有哪些？ A：主要影响因素包括：载体启动子强度、基因序列优化程度、转染效率、细胞培养条件和诱导表达参数等。需要系统优化各个环节才能获得理想表达量。Q4：瞬时表达和稳定表达各有什么优缺点？ A：瞬时表达周期短（1-2周），适合快速获取蛋白质；稳定表达需要较长时间建立（4-8周），但表达更稳定持久。Q5：如何提高表达蛋白的可溶性和生物活性？
46010编辑于 2025-07-16- 来自专栏老张的求知思考世界
双11在即，分享一些稳定性保障技术干货
每年一次的双十一大促临近，因此上周末公司组织了一次技术交流闭门会，邀请了电商、物流、文娱内容、生活服务等知名一线互联网公司的技术大牛，一起探讨了一些大促稳定性保障相关的技术话题。 大促典型场景及优化方案 1、云资源稳定性保障 单云模式存在一定稳定性风险，混合云架构在容灾方面效果更好； 核心链路梳理，可以将历史大促或者峰值的访问URL存储起来，经过处理后作为核心链路参考； 验证线上的性能容量搭建单独的仿真环境 等工具探测链路在哪个方法/代码块耗时大，不断压测优化验证； 2）业务优化(深库存场景) 为了应对秒杀场景高并发，可以通过缓存+数据库方式来解决； 90%库存放缓存应对高并发； 10%库存放数据库应对超卖； 3、数据库稳定性保障的 SOP 数据库的可用性底线：99.99%； 故障需要有严格的定义规则； 数据库稳定性三板斧： 1）扩容：DB是有状态服务，计算层便于扩容，将DB节点放到容器中，有需要扩容； 2）灾备：对于大流量读场景可通过流量切换方式 身份识别和业务隔离： 1）RPC group分组：假设有100个节点，40个给核心业务(交易)，60个给其他业务； 2）业务身份：中台架构可通过业务身份把订单秒杀等应用打上标记，便于隔离区分； 业务稳定性保障
3.3K20发布于 2021-11-16 【辰辉创聚生物】一文读懂基因过表达细胞系基因 | 过表达细胞系构建全流程解析 | 稳定转染技术 | 载体设计优化
整合后的外源基因随细胞分裂传递至子代细胞，形成稳定的遗传特性。 细胞培养质量控制在转染前需对细胞状态进行严格评估，包括细胞形态观察、生长曲线测定和支原体检测。细胞传代次数应控制在适当范围内（通常不超过20代），以保证细胞状态的稳定性。 转染前24小时将细胞以适宜密度接种，确保转染时细胞处于对数生长期，达到最佳转染效率。基因导入与筛选流程转染技术选择与优化根据细胞类型和研究需求，可选择脂质体转染、电穿孔或病毒转导等方法。 表达验证与稳定性评估蛋白表达验证采用Western blot技术检测目标蛋白表达，需设立未转染细胞和空载体转染细胞作为阴性对照。对于分泌型蛋白，可使用ELISA法检测培养上清中的蛋白浓度。 稳定性测试方法将候选细胞系在常规培养基中连续传代培养，每5代取样检测目标基因表达水平。稳定性测试通常持续20-30代，期间需监测细胞生长状态和形态变化。
22910编辑于 2026-01-16稳定细胞系构建原理与流程解析
一、稳定细胞系的基本原理稳定细胞系的核心是基因的基因组整合：基因组整合目标基因通过各种方法插入宿主细胞的染色体中，而不是停留在细胞质内（如瞬时转染）。 通过筛选和单克隆分离，可以获得稳定、高表达的克隆，保证蛋白产量和一致性。长期表达与遗传稳定性成功整合的基因在多代传代中仍能持续表达。避免了瞬时转染中蛋白表达随时间衰减的问题。 二、稳定细胞系构建的流程稳定细胞系的开发一般包括以下几个核心环节：1. 设计与载体构建目标基因优化：提高翻译效率，添加信号肽和标签。 基因递送与整合转染/转导方法：化学转染：适用于多数易转染细胞电穿孔：适合难转染或悬浮细胞病毒载体（慢病毒、腺病毒等）：高效率，适合非分裂细胞整合方式：随机整合：快速，但表达水平受染色体位置影响位点特异性整合 通过标准化的流程和严谨的技术控制，稳定细胞系能够为研究和产业化提供可靠、可重复、长期稳定的蛋白生产平台。
13610编辑于 2026-01-14- 来自专栏Android 开发者
Android 11 新工具 | 提升应用私密性和稳定性
Android 11 中的数据访问审核 API 有助于追溯您代码中私有数据的使用情况 第二个 API 针对多功能的复杂应用。 关于这些 API 的实际使用情况，请查阅 代码示例: 除了帮助您识别私有数据访问之外，Android 11 还包含了另一个新的 API，用来辅助排查无法捕捉现场的崩溃。 为了诊断应用终止原因，一些开发者正在加入自定义代码，以构建自己的分析程序来改善应用的稳定性。 基于此想法，我们为您提供了一种简化诊断部分的方法。 Android 11 引入了一个新的 ActivityManager API 来上报应用进程终止相关的历史信息。 相关资源 我们希望您通过这些额外的工具可以提升应用的隐私意识和稳定性。
89730编辑于 2022-09-23 【辰辉创聚生物】哺乳动物瞬时蛋白表达|CHO细胞蛋白表达|HEK293细胞蛋白表达
相比于稳定表达系统，TGE省略克隆筛选等冗长步骤，具备快速、高效的优点，尤其适用于早期药物研发、抗体表达、新型抗原生产等应用场景。 转染方法与试剂在 TGE 中，非病毒转染方法被广泛采用，其中聚乙烯亚胺（PEI）因价格低廉和操作简便而成为首选。脂质体试剂也能提供较高的转染效率，但成本相对较高。 对于难以转染的细胞，电穿孔和其他物理方法可以作为补充。在一些特定情况下，病毒载体（如腺病毒、杆状病毒）也被用于辅助转染，以提高转染效率和基因导入量。4. 加入增强子和转录后调控元件（如 WPRE）可进一步提高 mRNA 的稳定性和翻译效率，使目标蛋白的表达量增加数倍甚至数十倍。2. 此外，添加融合标签（如 Fc 片段、His 标签）不仅能增强蛋白稳定性，还能简化纯化过程，从而缩短生产周期。3.
46110编辑于 2025-09-10
腾讯云开发者
Copyright © 2013 - 2026 Tencent Cloud. All Rights Reserved. 腾讯云 版权所有
深圳市腾讯计算机系统有限公司 ICP备案/许可证号：粤B2-20090059 
粤公网安备44030502008569号
腾讯云计算（北京）有限责任公司 京ICP证150476号 | 京ICP备11018762号