- 综合排序
- 最热优先
- 最新优先
【辰辉创聚生物】杂交瘤细胞构建｜单克隆抗体筛选｜高效抗体制备
杂交瘤技术自 Köhler 与 Milstein 于 1975 年首次提出以来，已成为获取单克隆抗体的经典平台技术之一。 该方法通过融合免疫活化的 B 细胞与骨髓瘤细胞，获得能够稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株，是目前最为成熟的抗体开发策略之一。 本文从技术流程角度出发，系统介绍杂交瘤构建、克隆筛选及抗体表达纯化的关键环节。一、杂交瘤构建：融合细胞的形成与筛选杂交瘤构建的起始环节为抗原免疫，常选用 BALB/c 小鼠作为实验模型。 免疫结束后采集脾细胞，与不分泌抗体但具永生性的骨髓瘤细胞（如 SP2/0 或 NS0）进行细胞融合，通常采用聚乙二醇（PEG）法或电融合法。 三、杂交瘤细胞扩增与抗体表达系统筛选出的稳定杂交瘤细胞可用于体外小规模或中等规模抗体表达，适用于科研级抗体制备。
53510编辑于 2025-08-04- 来自专栏DrugAI
Nat. Rev. Immunol. | 单抗五十年：抗体治疗的过去、现在与未来
DRUGONE 1975年，Köhler 和 Milstein 发明了杂交瘤技术，用于制备具有特定抗原结合能力的鼠源单克隆抗体。 本文以HER2阳性癌症与B细胞靶向疗法为例，展示了抗体药物在过去数十年的迭代与发展，并探讨了人工智能驱动的新方向以及抗体治疗未来的机遇。 1975年，研究人员首次提出了杂交瘤技术：通过将免疫小鼠的B细胞与骨髓瘤细胞融合，获得了能够无限增殖并持续分泌特定抗体的“杂交瘤细胞”。 从1975年杂交瘤诞生，到1986年首个单抗药物Muromonab-CD3获批，经历了长达11年的等待。 HER2靶向治疗 HER2过表达约占20%的乳腺癌病例，是推动抗体精准治疗的典范。
25120编辑于 2026-01-06 【辰辉创聚生物】如何通过单B细胞筛选技术获取精准单克隆抗体？
与传统的杂交瘤技术不同，单B细胞筛选技术避免了杂交瘤细胞培养的繁琐过程，且能够在短时间内获取更为多样的抗体库。 1、杂交瘤技术杂交瘤技术是最早应用的单克隆抗体生产技术，它通过将免疫动物的B细胞与肿瘤细胞融合，生成既能无限增殖又能产生抗体的细胞系。 因此，杂交瘤技术的应用逐渐受到一些限制。2、噬菌体展示技术噬菌体展示技术是将抗体的DNA序列插入到噬菌体的外壳蛋白基因中，使抗体在噬菌体表面展示。 2. 单细胞分离：通过流式细胞术或微流控技术，从免疫动物的外周血或脾脏中分离出单个B细胞。流式细胞仪可以通过特定的荧光标记筛选出结合目标抗原的B细胞。3. 2. 避免杂交瘤过程传统的单克隆抗体筛选依赖于杂交瘤技术，即通过将免疫B细胞与肿瘤细胞融合来获得能够无限增殖的B细胞系。这一过程费时费力，并且容易导致筛选出的抗体在亲和力和特异性方面的欠缺。
50210编辑于 2025-08-21【免疫学实验】单克隆抗体技术
2. 单克隆抗体的诞生 为了解决上述问题，需要一种能无限供应、结构均一的特异性抗体。早期生化学家研究多发性骨髓瘤患者的骨髓瘤蛋白，证实了永生化浆细胞能产生单一抗体，但其抗原特异性大多不明。 杂交瘤技术的突破：Georges Köhler 和 César Milstein 发明了细胞融合技术： 融合： 将小鼠脾脏细胞（提供特异性抗体产生能力）与骨髓瘤细胞（提供无限增殖能力）融合。 筛选： 利用特定药物筛选出杂交瘤细胞（亲本骨髓瘤细胞被杀死，脾细胞自然死亡）。 克隆： 通过单细胞培养，筛选出能分泌特定抗体的杂交瘤克隆。 以这种方式分离的每个噬菌体都可以产生类似于单克隆抗体的单克隆抗原结合颗粒（图 2）。 当这些重组抗体基因被导入合适的宿主细胞系，例如导入非抗体产生的杂交瘤骨髓瘤细胞时，被导入的细胞就可以分泌针对特定抗原的单克隆抗体。
19610编辑于 2025-12-29【辰辉创聚生物】单克隆抗体开发服务｜抗原设计定制｜抗体筛选验证
杂交瘤抗体开发与单B细胞抗体筛选传统的杂交瘤抗体开发技术通过细胞融合和限稀克隆，稳定获得高特异性抗体。现代技术如单B细胞抗体筛选则利用流式细胞分选技术，快速锁定靶向抗体序列，提升筛选效率与多样性。 图1 小鼠杂交瘤抗体开发图2 兔单B细胞抗体筛选快速抗体制备与高效筛选针对科研的紧迫需求，快速抗体制备技术能够显著缩短抗体研发周期，快速获得初筛抗体。 Q2：单克隆抗体制备中常用的免疫动物有哪些？A：常见免疫宿主包括小鼠、大鼠、兔及仓鼠、山羊等，具体选择依据抗原特性及实验需求，兼顾免疫响应强度和抗体质量。 Q3：杂交瘤技术制备单克隆抗体的关键步骤包括哪些？A：主要步骤涵盖抗原免疫、脾细胞与骨髓瘤细胞融合、融合细胞筛选与限稀克隆、抗体表达与功能鉴定等环节。
21810编辑于 2025-07-22【辰辉创聚生物】重组抗体开发流程｜CHO表达系统应用｜抗体工程优化指南
杂交瘤技术：适用于小鼠等模式动物的免疫抗体开发，具备成熟的筛选与亚克隆平台。单B细胞筛选技术：通过流式细胞分选和单细胞测序技术，可直接获得天然重链-轻链配对的人源或动物源抗体。 常见问题 FAQQ1：重组抗体与传统杂交瘤抗体有何区别？A：重组抗体通过体外表达系统获得，纯度更高、批间一致性更好，适合工业化生产；杂交瘤抗体则来源于细胞株分泌，可能存在轻重链错配及污染风险。 Q2：为什么大多数重组抗体采用CHO细胞表达？A：CHO细胞表达系统具备良好的蛋白折叠和人源化糖基化能力，表达水平高，适合长期稳定生产，并且已被多个已上市抗体药物验证其安全性与可行性。
41510编辑于 2025-07-24【辰辉创聚生物】单B细胞筛选技术：制备兔单抗
杂交瘤技术在兔体内效率低且细胞株不稳定，难以规模化应用；噬菌体展示和其他体外筛选方法虽灵活，但常出现重轻链错配，影响抗体功能。 与杂交瘤相比，该方法避免了细胞融合效率低下及不稳定性问题；与噬菌体展示相比，它能够保持重链和轻链的天然配对，更真实地反映免疫系统的应答。因此，单B细胞筛选技术在速度、效率和准确性上均具有优势。 2. B 细胞分离采集免疫后兔的外周血单个核细胞（PBMC），或取脾脏、淋巴结细胞。利用密度梯度离心分离细胞群体，再通过免疫磁珠富集 B 细胞。3. 2. B 细胞亚群选择：记忆 B 细胞和浆母细胞常包含高亲和力克隆。3. PCR 引物设计：兔抗体基因多样性高，需要覆盖全面的引物库。4. 该技术不仅克服了传统杂交瘤与展示库方法的不足，还能在保持天然 VH/VL 配对的同时，大幅提升抗体筛选效率。
35010编辑于 2025-09-15【辰辉创聚生物】抗体定制服务｜单克隆抗体｜多克隆抗体｜重组抗体开发解决方案
2. 免疫动物选择与免疫策略常用动物包括小鼠、大鼠、山羊、兔、鸡、鸭、绵羊、驴、豚鼠、羊驼、骆驼、马、狗、牛、猪等。根据项目需求可选择不同物种及免疫程序（短程/强化免疫）。 单克隆抗体（mAb）：通过杂交瘤技术或单B细胞克隆，从单一B细胞获取抗体，具有高度一致性与特异性。重组抗体（rAb）：通过抗体基因克隆表达，获得来源清晰、易于工程化的抗体，适合工业级需求。 二、抗体定制服务类型简述类型特点适用领域多克隆抗体快速、成本低、识别多个表位信号增强实验、早期探索性实验杂交瘤单抗高特异性、一致性好、稳定表达机制研究、诊断抗体开发重组抗体基因工程表达、来源明确、易于修饰药物筛选 Q2：没有蛋白，能开发抗体吗？A：当没有蛋白时，可以考虑使用多肽抗原或通过结构预测设计免疫原性区域合成肽段，并结合KLH/BSA偶联增强免疫效果。Q3：抗体表达后如何验证其有效性？
19610编辑于 2025-07-21【辰辉创聚生物】单B细胞技术如何实现兔单抗高通量高特异制备
传统的杂交瘤技术虽然成熟，但周期长、效率低，而且抗体多样性有限。近年来，单B细胞技术的出现，正在彻底改变兔单抗的研发模式。 2. 利用单细胞RT-PCR扩增B细胞的重链和轻链可变区。3. 将抗体基因克隆入表达载体，在哺乳动物细胞中表达并进行功能鉴定。 相比传统杂交瘤技术，单B细胞技术具有显著优势：每个B细胞只产生一种抗体，避免混杂；可以筛选出亲和力最强的抗体；结合流式细胞和微流控技术，实现高通量分析；快速响应新兴病原体和疫苗研发需求。 2. 高效B细胞分离与单细胞分选从外周血、脾脏或淋巴结中获取样本，通过流式细胞术结合磁珠技术进行分选，利用抗兔IgG或CD19等标记物精确获取目标B细胞。
27210编辑于 2025-09-26【辰辉创聚生物】抗体筛选服务｜高通量抗体检测｜单克隆抗体开发
在药物研发中的应用抗体高通量筛选技术在药物研发中发挥着关键作用，包括：治疗性抗体发现：如PD-1/PD-L1抗体、HER2靶向抗体等。 传染病抗体开发：快速筛选中和抗体，用于抗病毒（如SARS-CoV-2、HIV）研究。生物标志物筛选：发现与疾病相关的抗体标志物，用于诊断或预后评估。 Q2: ELISA筛选在高通量抗体筛选中有什么优势和局限性？ ：新冠中和抗体的筛选就广泛采用了表达ACE2的细胞模型。 Q7: 噬菌体展示与杂交瘤技术筛选抗体各有什么优劣？A:趋势：目前大型药企更倾向结合两者优势，如先通过噬菌体展示初筛，再用杂交瘤技术生产全长抗体。Q8: 如何选择适合的高通量抗体筛选平台？
32200编辑于 2025-08-07【辰辉创聚生物】一站式抗体定制：从抗原设计到抗体纯化
2. 肽段抗原设计肽段抗原通常由20\~30个氨基酸组成，并连接载体蛋白以增强免疫原性。文献显示，选择疏水性较低、位于蛋白表面且保守性较差的区域，可以获得高特异性的抗体。 2. 免疫途径常见免疫途径包括皮下注射、腹腔注射和肌肉注射。研究显示，皮下注射结合佐剂可显著提高抗体滴度和特异性。佐剂如弗氏完全佐剂（CFA）和弗氏不完全佐剂（IFA）能够刺激免疫系统，增强抗原呈递。 2. 单克隆抗体筛选单克隆抗体由单个B细胞克隆产生，技术上常采用杂交瘤技术。通过将B细胞与骨髓瘤细胞融合，形成能够持续分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。随后通过ELISA或流式细胞术筛选高亲和力克隆。 2. 质量控制纯化后的抗体需要进行质量检测，包括SDS-PAGE分析纯度、ELISA检测活性以及内毒素检测。高质量的抗体应具有单一条带、无降解产物，并在目标应用中表现稳定的特异性。 Antibodies to watch in 2017. mAbs, 9(2), 167-181.10. Saha, S., et al. (2005).
38111编辑于 2025-08-22【辰辉创聚生物】单抗制备周期太长？5种方法帮您提速一半！
2. 使用基因工程小鼠和转基因技术基因工程小鼠（如人源化小鼠）和转基因技术是单抗制备中的革命性技术。通过这些技术，可以直接获得高质量的单克隆抗体，省去了传统杂交瘤细胞的制备过程。 基因工程小鼠：基因工程小鼠的免疫系统能够直接生成与人类免疫系统相似的抗体，避免了传统杂交瘤技术中使用的动物免疫原和骨髓瘤细胞融合步骤。 Chem.2. Wang, F., & Zhang, S. (2020).
19210编辑于 2025-08-18【辰辉创聚生物】单细胞抗体筛选服务｜单B细胞克隆技术｜高效重组抗体表达
与传统的噬菌体展示技术或杂交瘤技术相比，单细胞抗体筛选避免了抗体库构建中重链与轻链配对错误的问题，天然保留抗体的基因配对信息，显著提升筛选出的抗体的功能和特异性。 相比传统的噬菌体展示和杂交瘤技术，它避免了抗体重链和轻链配对错误，筛选效率更高，能够更快发现高亲和力抗体，适合抗体药物开发和科研实验。Q2: 单B细胞克隆技术如何保证抗体基因的完整性和准确性？ A2: 单B细胞克隆技术通过多重RT-PCR从单个B细胞同步扩增重链和轻链抗体基因，保持天然抗体基因配对，确保克隆的抗体序列完整且功能稳定。
35110编辑于 2025-08-05- 来自专栏DrugOne
Nat. Biomed. Eng.| 深度学习优化治疗抗体
为了产生训练数据，作者测序了治疗抗体曲妥珠单抗（trastuzumab，一种抗肿瘤药物，~10000突变体)的深度序列库，并筛选了这些库对人类表皮生长因子受体2（HER2）的特异性。 然后，使用训练过的神经网络来筛选曲妥珠变异体的文库（~1亿突变体），并预测HER2特异性子集（~100万突变体），过滤其粘度、间隙、溶解度和免疫原性后，以产生数千个高度优化的优化前体。 对未筛选文库中随机选择的30个变异的重组表达和实验测试表明，所有30个变异都对HER2保持了特异性。 主要流程 使用表达不能结合HER2抗原的变异体（CDRH3基因突变序列）的杂交瘤细胞系，由CRISPR-Cas9介导的同源定向突变(HDM)生成文库，并通过DMS检测筛选抗体的CDRH3的氨基酸序列和指导抗体文库的生成 训练基于序列的机器和深度学习模型，能够预测对目标抗原HER2的抗体特异性。
1K20发布于 2021-05-24 【免疫学实验】揭秘蛋白互作：免疫沉淀与免疫共沉淀
随后通过杂交瘤技术，生产出能识别这些细胞表面抗原的单克隆抗体。 2.
30810编辑于 2025-12-29- 来自专栏随笔记录
K2MnO4+MnO2+O2↑。化学方程式 百如:2H2+O2=2H2O，2H2O= 2H2+O2。
反应物在左，生成物在右，中间用横线连接，如: H2+O2——H2O，H2O——H2+O2。 配平后，化学式前的化学计量数之比应是最简整数比，如:2H2+O2=2H2O，2H2O= 2H2+O2。 如:2H2+O22H2O，2H2O2H2↑+O2↑。 化学计量数: 化学计量数指配平化学方程式后,化学式前面的数字。 ②如果一个反应在酒精灯加热的条件下能发生，书写化学方程式时就用“△”，如:2KMnO4 K2MnO4+MnO2+O2↑。 如Fe+ 2HClFeCl2+H2↑。
1.1K00发布于 2020-05-20 - 来自专栏随笔记录
K2MnO4+MnO2+O2↑。化学方程式 百如:2H2+O2=2H2O，2H2O= 2H2+O2。
反应物在左，生成物在右，中间用横线连接，如: H2+O2——H2O，H2O——H2+O2。 配平后，化学式前的化学计量数之比应是最简整数比，如:2H2+O2=2H2O，2H2O= 2H2+O2。 如:2H2+O22H2O，2H2O2H2↑+O2↑。 化学计量数: 化学计量数指配平化学方程式后,化学式前面的数字。 ②如果一个反应在酒精灯加热的条件下能发生，书写化学方程式时就用“△”，如:2KMnO4 K2MnO4+MnO2+O2↑。 如Fe+ 2HClFeCl2+H2↑。
1.2K40发布于 2020-06-01 【辰辉创聚生物】高亲和力尼帕病毒抗体技术解析及在科研中的关键应用指南
针对这些靶点开发的抗体在科研中主要作为抗体捕获试剂或免疫检测的核心工具：G糖蛋白特异性抗体：用于解析病毒与宿主受体（如 ephrin-B2/B3）的结合机制，可用于表征病毒进入途径。 2. 免疫印迹（Western Blot）Western Blot技术将重组蛋白电泳分离后，通过尼帕病毒抗体识别特定条带，评估病毒蛋白表达水平。高特异性抗体可以减少背景噪音，提高目标蛋白条带的清晰度。 重组抗体一致性：相较于传统杂交瘤抗体，重组单克隆抗体具有批次间一致性，有利于科研数据标准化。
11010编辑于 2026-02-04- 来自专栏大数据那些事
Hbase（2）——基础语句（2）
（2）插入数据： put 'hbase_test:basketball1','Texas','team:spur','1' put 'hbase_test:basketball1','Texas','team :Mavericks','2' put 'hbase_test:basketball1','Texas','team:rockets','3' put 'hbase_test:basketball1', 'California','team:Lakers','1' put 'hbase_test:basketball1','California','team:KINGS','2' put 'hbase_test
47810发布于 2020-11-11 - 来自专栏js笔记
vite2 特性2
jsx 没好用 安装插件@vitejs/plugin-vue-jsx npm install @vitejs/plugin-vue-jsx -D 配置在vite.config.js import vueJsx from '@vitejs/plugin-vue-jsx' ... /** * https://vitejs.dev/config/ * @type {import('vite').UserConfig} */ export default defineConfig({ ... //这里
48720编辑于 2022-10-25
腾讯云开发者
Copyright © 2013 - 2026 Tencent Cloud. All Rights Reserved. 腾讯云 版权所有
深圳市腾讯计算机系统有限公司 ICP备案/许可证号：粤B2-20090059 
粤公网安备44030502008569号
腾讯云计算（北京）有限责任公司 京ICP证150476号 | 京ICP备11018762号