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【辰辉创聚生物】单抗免疫原选型指南|抗体制备方案设计——常用抗原类型及制备方法
根据抗原的类型、制备难度及应用目的，常见的抗原制备方法包括天然提纯、重组蛋白表达、多肽合成、小分子偶联等。一、天然提纯抗原天然蛋白质通常保留了其原有的生物学结构与功能，是一种极为理想的抗原。 天然抗原的制备过程通常需要从生物体中提取并进行纯化。此类抗原的优势在于其自然的修饰与正确的空间构象，可以更好地触发免疫反应。 二、重组蛋白抗原随着基因工程技术的发展，重组蛋白抗原的制备成为主流。通过重组DNA技术，将目标基因导入合适的宿主细胞中进行表达。 三、多肽抗原对于一些难以通过天然提取或重组表达获得的抗原，多肽抗原的制备成为一种有效的选择。多肽抗原通常通过化学合成实现，这一技术相对成熟且广泛应用。 不同类型的抗原有不同的制备技术和难点，科研人员需根据实验需求选择合适的制备方法。
37910编辑于 2025-08-20- 来自专栏生信菜鸟团
如何制备pbmc
先从制备pbmc开始吧。 我们的原理是利用梯度密度离心法制备。 血浆、pbmc和红细胞等的密度不同，加上淋巴细胞分离液，离心后全血分层，拿到上清液。 +90%胎牛血清），后置于冻存管中 各取10ul液体，计数，看细胞活度，一般来讲细胞数量能达到106，细胞活度能90%以上 将冻存管置于梯度冻存盒中，放到-80℃冰箱 注意事项： 抽取的外周血，应尽快制备
2.5K20发布于 2021-01-18 - 来自专栏生信修炼手册
肿瘤新抗原简介
肿瘤免疫治疗是一个近年来研究得非常火热的领域，取得了多项突破性的进展，免疫检查点抑制剂PD-1/PD-L1抗体在晚期实体瘤患者的治疗中取得了明显收益，嵌合抗原受体T细胞疗法CAR-T在血液肿瘤的治疗上也疗效显著 肿瘤疫苗是通过机体识别肿瘤特异性抗原（tumor specific antigen,TAS)或者肿瘤相关抗原（tumor associated TAA）来激活抗原呈递细胞，引起特异免疫应答反应来杀伤肿瘤细胞 TSA也称之为肿瘤新抗原neoantigen, 是由肿瘤细胞的体细胞变异产生的一种异常蛋白。 新抗原通过MHC分子结合，从而被T细胞受体T-cell receptor(TCR)识别，引发免疫应答反应。 结合NGS和生信分析，可以快速预测肿瘤新抗原。 在进一步结合体外实验验证，筛选阳性的新抗原。 随着肿瘤新抗原检测和预测技术的不断发展，基于新抗原的免疫治疗也取得了突破性进展，在后续文章中会详细介绍相关软件的使用。
1.3K20发布于 2019-12-19 - 来自专栏芯片工艺技术
ＣＶＤ制备钻石
这种技术又是如何能制备出强度那么大的钻石呢。 前天开会提到一个ＣＶＤ diamond package 的概念，就是利用金刚石的导热率高的特性做芯片封装，采用CVD的工艺沉积出钻石。 制备金刚石的CVD是一种叫MPCVD的设备： 20世纪90年代，CVD合成单晶体钻石的研发取得显著进展。
76310编辑于 2022-06-08 【辰辉创聚生物】多克隆抗体定制｜高效抗体制备｜定制抗体服务
抗原设计与合成策略成功的抗体制备始于高质量的抗原。抗原设计是整个多克隆抗体定制流程的技术核心，主要包括抗原选择、表位预测、结构稳定性评估和免疫原性分析。 抗原纯度通常需要大于90%，并确保正确构象以保证免疫应答特异性。2. 动物模型选择与免疫程序优化多克隆抗体制备涉及多个实验动物模型的选择与优化。 质量控制与交付规范多克隆抗体制备的质量控制标准化直接影响下游实验可靠性。 A：由于其制备周期短、成本较低且识别多个表位，适用于高通量筛查与信号放大实验，特别适合科研初期探索性阶段。Q2：如何选择免疫动物物种？A：应结合抗原种属、抗体应用平台及预期产量综合判断。 Q4：多克隆抗体与单克隆抗体制备在技术上有何本质区别？A：多克隆抗体来源于多个B细胞群体，识别多表位，信号强；而单抗来源于单个细胞克隆，特异性高，但制备周期长、成本高。
32400编辑于 2025-07-23【辰辉创聚生物】单克隆抗体开发服务｜抗原设计定制｜抗体筛选验证
抗原设计精准的抗原设计是单克隆抗体制备的关键。通过选择和合成抗原肽段或重组蛋白，确保抗体靶向的特异性和结合效率。抗原质量直接影响抗体的亲和力和特异性，是后续筛选与应用的基础。 图1 小鼠杂交瘤抗体开发图2 兔单B细胞抗体筛选快速抗体制备与高效筛选针对科研的紧迫需求，快速抗体制备技术能够显著缩短抗体研发周期，快速获得初筛抗体。 重组抗体开发与抗体片段制备现代分子生物技术推动了重组抗体开发，包括Fab、scFv及单域抗体等多种抗体片段的制备。这些结构多样的抗体片段拓展了抗体的应用场景，提高了实验的灵活性和效率。 Q2：单克隆抗体制备中常用的免疫动物有哪些？A：常见免疫宿主包括小鼠、大鼠、兔及仓鼠、山羊等，具体选择依据抗原特性及实验需求，兼顾免疫响应强度和抗体质量。 Q3：杂交瘤技术制备单克隆抗体的关键步骤包括哪些？A：主要步骤涵盖抗原免疫、脾细胞与骨髓瘤细胞融合、融合细胞筛选与限稀克隆、抗体表达与功能鉴定等环节。
21910编辑于 2025-07-22动物免疫抗体制备｜多克隆抗体开发服务｜免疫原设计与检测平台
一、动物免疫与抗体制备的核心流程传统的抗体制备依赖动物体内对目标抗原的免疫应答，产生特异性抗体分子。 该过程可大致分为以下几个阶段：免疫原设计：通过生物信息学和结构预测，设计高免疫原性的肽段或表达蛋白，用于后续免疫；蛋白表达：利用大肠杆菌、昆虫或哺乳动物细胞表达重组抗原，并进行纯化；动物免疫实验：将抗原注射入动物体内 该平台通常包括：抗原制备模块：支持多种蛋白表达系统（E. coli、CHO、HEK293等）；免疫实施模块：标准化动物免疫流程，自动化记录与监测；免疫检测模块：从血清滴度检测到亚类分析，全面评估抗体水平 研究者通常采用以下技术手段进行抗体效应评估：ELISA：定量检测抗体效价；Western Blot：验证抗原识别能力；免疫组化（IHC）：分析组织水平表达；流式细胞术：分析细胞表面抗原结合；抗体亚类分析 比如兔子适合制备高亲和力多克隆抗体，小鼠适合单克隆抗体开发。Q2: 什么是免疫原设计？它为什么对抗体制备至关重要？A: 免疫原设计是指选取或合成能激发免疫系统产生特异性抗体的抗原分子。
26410编辑于 2025-07-31【辰辉创聚生物】单B细胞筛选技术：制备兔单抗
然而，传统制备兔单抗的方式存在诸多限制。杂交瘤技术在兔体内效率低且细胞株不稳定，难以规模化应用；噬菌体展示和其他体外筛选方法虽灵活，但常出现重轻链错配，影响抗体功能。 为克服这些问题，近年来发展起来的单B细胞筛选（single B cell screening）技术，已成为制备兔单抗的重要手段。 抗原特异性筛选将目标抗原进行荧光标记，通过流式细胞术检测并筛选结合抗原的 IgG B 细胞。常采用“双荧光标记”策略，即同一抗原用两种不同荧光染料标记，以降低假阳性风险。 应用实例兔单抗制备研究团队利用双荧光标记结合流式分选，从免疫兔 PBMC 中成功分离抗原特异性 IgG B 细胞。 单B细胞筛选技术为制备兔源单克隆抗体提供了一种快速、高效且精确的方法。该技术不仅克服了传统杂交瘤与展示库方法的不足，还能在保持天然 VH/VL 配对的同时，大幅提升抗体筛选效率。
35010编辑于 2025-09-15【免疫学实验】单克隆抗体技术
原因： 即使是针对单一抗原决定簇（如半抗原）产生的抗体，其结构也存在差异（异质性）。这可以通过等电聚焦实验验证：识别相同抗原的抗体在电泳后会显示出不同的等电点，证明其分子结构的不均一性。 人源单克隆抗体的现代制备 虽然杂交瘤技术主要应用于小鼠，但目前治疗性的人源单克隆抗体主要通过以下基因工程技术制备： 噬菌体展示技术 重组 DNA 技术（克隆人浆细胞抗体基因） 携带人类抗体基因的转基因小鼠 每一个噬菌体都在表面表达不同的抗原结合域，一系列这样的噬菌体总和起来被称为噬菌体展示库。可以用亲和层析法）分离在噬菌体展示库中与特定抗原结合的噬菌体，所分离的噬菌体颗粒可用于感染新鲜细菌。 以这种方式分离的每个噬菌体都可以产生类似于单克隆抗体的单克隆抗原结合颗粒（图 2）。 从接种过疫苗的个体中产生人单克隆抗体：由于接种过疫苗的个体所产生的抗体已经重排重链和轻链基因序列，所以在某些情况下，可以从这些个体中分离浆细胞来制备人单克隆抗体。
19810编辑于 2025-12-29抗原设计与合成服务｜定制抗原技术｜高效多肽合成
本篇详细介绍抗原设计与合成的技术要点、服务内容及质量控制措施，旨在为科研人员提供清晰的技术路线参考。一、抗原设计技术抗原设计是抗原合成的前提，科学合理的设计能够显著提高免疫应答的特异性和效率。 二、抗原合成技术抗原合成分为多肽合成和重组蛋白表达两大技术路径，分别适用于不同类型的抗原需求。1. 多肽合成多肽合成采用固相肽合成（SPPS）技术，是定制抗原合成中快速、精准的手段。 三、抗原合成定制服务内容抗原合成定制服务涵盖从抗原设计咨询到合成、纯化、质控及交付的完整流程，支持个性化需求的灵活定制：设计优化服务基于客户提供的蛋白序列或研究目标，结合生物信息学分析，提出针对性的抗原设计方案 Q2: 抗原合成定制服务包含哪些技术内容？A: 抗原合成定制服务涵盖多肽合成、重组蛋白表达、纯化及质量检测。多肽合成适合短肽抗原，速度快纯度高；重组蛋白表达适用于复杂蛋白抗原。 选择时需根据抗原结构复杂度和后续应用确定。Q4: 抗原设计与抗体筛选之间的关系是什么？A: 抗原设计决定了抗体筛选的起点。
18100编辑于 2025-07-29- 来自专栏点点滴滴
Western Blot一抗的选择
Western Blot中，一抗是一种非常关键的试剂， 因为仅仅是抗体制备和质检都是一项非常复杂的工作，所以对于Western blot实验人员来说如何选择一抗是一件很有挑战的工作，尤其是不完全了解抗体制备过程的朋友更是头疼 苏州百奇生物科技有限公司（Abgent) 公司有10000多种多抗，几乎所有抗体都用多肽为抗原制备，品牌也还不错。 对于常用的一抗，通常都优先考虑兔子作为host，这是因为: 用兔子制备的抗体亲和力比较高（因为兔子与通常研究的特种在遗传上相差比较大，当然如果本来的目的就是研究兔源抗原那就是另当别论了），另外，相对于其它物种 Immunogen 免疫原，即用来制备抗体选用的抗原，偶联载体的多肽和重组蛋白是用得最多的免疫原，通常情况下，重组蛋白作为抗原得到的亲和力比多肽作为抗原得到的抗体的亲和力高，识别的表位多，即使抗原上大部份表位被掩盖或被破坏它们都能很好地识别 其实免疫原是蛋白还是偶联的多肽更好，这个问题和前面提到的选择多抗还是单抗原则是一回事，这里就不再废话了。另外，关于抗原的更多基础知识可以参考本站的“抗原制备”一部份。
7K53发布于 2018-06-26 - 来自专栏芯片工艺技术
GaN HEMT 器件制备工艺
主要工艺有：有源区隔离、源漏极欧姆接触制备，栅极肖特基接触 器件表面钝化、电极互连工艺。
2.4K20编辑于 2022-06-06 - 来自专栏Chris生命科学小站五年归档
【CAR-T】国自然热点研究摘要参考
绕过体外制备及回输的瓶颈，精确调控CAR-T细胞的数量及其作用时间是CAR-T治疗的关键所在。 CAR-T（H2003）-5* 基于CML新型特异性肿瘤抗原及抗体制备CAR-T细胞靶向治疗CML的实验研究 TKI用于CML治疗取得了显著疗效，但TKI只能抑制Bcr-Abl激酶活性，不能根除CML CAR-T疗法最重要的是鉴定特异的肿瘤细胞表面分子靶标及制备相应抗体。我们将CML患者的白血病细胞免疫小鼠，制备了一个CML特异抗体Cam1。 本项目继续开展以下四方面研究：（1）确定Cam1抗体特性；（2）鉴定Cam1抗体靶向的抗原；（3）基于Cam1抗体制备CAR-T细胞靶向治疗CML；（4）阐明抗原在CML中的作用及与Bcr-Abl的关系 ；（3）明确Cam1抗原在CML中发挥的作用，阐明其特异性表达于CML细胞中的机制。
48220编辑于 2023-02-28 - 来自专栏镁客网
格源致善苏小平：AI助力新抗原预测，解决个性化肿瘤疫苗难题丨镁客请讲
这就是格源致善正在做的个性化肿瘤疫苗，通过基因测序来分析肿瘤的突变，然后预测、设计、制备针对突变基因的新生抗原疫苗，疫苗回输患者体内进而激发患者自身免疫以杀伤肿瘤细胞。 肿瘤个性化疫苗方案最关键的核心便是对新生抗原（独特存在于癌细胞中并且具有免疫原性）的预测，因为并不是所有的突变都能成为新抗原或者能够制作疫苗，因为影响基因突变成为新生抗原的因素很多：包括它是不是非同义突变 据了解，整个个性化肿瘤疫苗的制造过程包括患者肿瘤组织取样、基因测序、突变分析、新生抗原的预测分析和选择、疫苗设计制备以及评估，最后是临床回输，当疫苗进入到病人体内，肿瘤疫苗被抗原递逞细胞进行吞噬，诱导T 据了解，围绕肿瘤的个性化疫苗治疗，格源致善开发了两个系统：TumorNeo™新生抗原AI预测优选系统和TumorVac™新生抗原体外高效评测系统，分别用于新抗原预测和个性化肿瘤疫苗的体外评估。 对患者进行取样进行基因检测后，他们发现了有500多个基因突变，用TumorNeo™新生抗原AI预测优选系统进行新生抗原预测最后从中挑选出了13个新生抗原进行相关疫苗的制备，疫苗回输治疗七个月后，检测发现该患者的肿瘤有缩小的趋势
1.2K40发布于 2019-05-22 【辰辉创聚生物】单抗制备周期太长？5种方法帮您提速一半！
然而，单抗的制备周期较长，这不仅给科研和生产带来巨大挑战，还可能影响产品的市场竞争力。如何在保证单抗质量的前提下，提高单抗制备效率，缩短研发周期，成为了许多生物制药企业和科研机构亟需解决的问题。 流式细胞术（FACS）筛选：流式细胞术通过与荧光标记的抗原反应，能够快速识别和筛选出与目标抗原结合的B细胞。它的高效性能够使得筛选过程在数小时内完成，大大缩短了筛选周期。 使用基因工程小鼠和转基因技术基因工程小鼠（如人源化小鼠）和转基因技术是单抗制备中的革命性技术。通过这些技术，可以直接获得高质量的单克隆抗体，省去了传统杂交瘤细胞的制备过程。 这种技术避免了传统的免疫小鼠过程，不仅能大幅缩短抗体筛选周期，还能快速定制针对特定抗原的抗体。3. 优化抗体表达系统抗体的表达系统直接影响单抗制备的效率。 此类细胞系具有极强的增殖能力和稳定的生产特性，使得抗体制备过程更加快速和稳定。单克隆抗体的制备过程通常复杂且周期较长，但随着科技的进步，许多方法可以帮助加速这一过程。
19210编辑于 2025-08-18MCE干货分享：一抗二抗选择小技巧，不同实验对抗体的要求
抗体 (Antibodies)，又称为免疫球蛋白 (Immunoglobulin, Ig): 由 B 细胞增殖分化而来的浆细胞合成并分泌，能够特异性识别与结合抗原。 为了提高抗体的特异性，通常使用针对高特异性序列的合成多肽作为抗原进行制备。IP/ChIPIP 实验需要抗体能够识别抗原的天然构象，以便结合并沉淀抗原。 因此，制备 IP 抗体时，最佳选择是使用纯化的天然蛋白或重组蛋白作为抗原来源。 这些抗体能够识别活细胞表面或细胞内的抗原，为活细胞提供准确和可靠的信息。对于经过固定处理的流式分析，要求和 IF/IHC 实验中所用的抗体一致。 同理适用于 IP 的抗体不一定适用于 WB；适用于 IHC-P (抗原修复) 的不一定适用于IHC-F (不修复)。Q: 抗体说明书上面没有写该抗体能够用于某项实验怎么办？
63110编辑于 2025-08-29- 来自专栏用户7627119的专栏
肿瘤新抗原突变负荷分析
肿瘤新抗原（Neoantigen）是由肿瘤细胞突变基因编码的新生抗原，主要由基因点突变、删除突变、基因融合等产生的与正常细胞表达的蛋白不一样的新的异常蛋白。一般来说，高TMB患者有更多的新抗原。 2.分析方法 （1）新抗原负荷评估 使用突变数据对肿瘤特异新抗原样本过滤，保留个812 Pan-Gyn样本。使用R包maftools对 MAF文件计算 Pan-Gyn NAL。 根据不同的免疫状态选取60%和80%的新抗原负荷区间，获得163个样本的新抗原负荷高（NAL-H）组，161个样本的新抗原负荷中（NAL-M）组，488个样本的新抗原负荷低（NAL-L）组。 新抗原负荷亚组的体细胞突变特征 三、新抗原负荷亚组与临床结果的关系 相比于NAL-M 和 NAL-L，NAL-H的生存最好（图3A）。比较了亚组之间的临床协变量的差异（表1）。 最近一篇论文报道了肿瘤抗原的特异性活性CD8C和CD4C T细胞在免疫治疗中可诱导抗肿瘤反应。辅助T细胞的免疫反应是CD4C T细胞能够识别MHC II抗原，在抗肿瘤活性中发挥重要作用。
3.5K41发布于 2020-08-05 - 来自专栏单细胞天地
培养细胞单细胞悬液制备
活体体内细胞当离体置于体外培养时大多数以贴壁方式生长，主要包括正常细胞（例如：成纤维细胞、巨噬细胞、神经胶质细胞、心肌细胞以及肝、肺、肾、乳腺、皮肤细胞等）和肿瘤细胞，一般用胰酶消化；临床上常见的脱落细胞经过简单离心过筛处理就能制备成单细胞悬液
1K30编辑于 2022-03-14 Cathepsin F His Tag 蛋白：结构与功能研究的关键工具
CathepsinF在细胞内主要参与抗原提呈、细胞凋亡调控、细胞外基质重塑等生理过程，其表达异常与多种疾病状态相关，包括神经退行性疾病、肿瘤转移和自身免疫性疾病等。 二、CathepsinFHisTag蛋白的技术优势CathepsinFHisTag蛋白是通过基因工程技术制备的重组蛋白，在设计和功能上具有显著优势：1.高效纯化特性：C端或N端融合的6×His标签可与镍离子亲和层析柱高效结合 4.多功能应用：既可用于酶学性质研究，也可作为抗原用于抗体开发，或作为标准品用于活性测定。 -免疫调节功能：研究其在抗原提呈细胞中对抗原处理的影响及其在自身免疫反应中的作用。3.药物开发应用-药物靶点验证：作为治疗靶点用于新型抑制剂的设计和优化。 四、实验方法与优化策略1.蛋白制备流程-表达系统选择：哺乳动物表达系统可获得最接近天然的糖基化修饰，大肠杆菌系统则适用于大规模制备。
10310编辑于 2026-02-06细胞免疫疗法TCR-T和空间VDJ测序
TCR-T疗法TCR-T (T-cell receptor-engineered T cells) 通过基因导入方法，将抗原特异性TCR导入患者T细胞，制备人工TIL。 由于TIL数量较少，不是任何肿瘤组织中都存在，于是科学家们想到了制备工程化TIL，也即是当前TCR-T的前身。与CAR-T相比，TCR-T不仅能够靶向细胞表面蛋白质，还可以靶向胞内蛋白质。 TCR-T制备过程 与CAR-T细胞疗法相似，TCR-T技术在发展过程中也经历了四次迭代： 第一代TCR-T是从患者T细胞中分离出肿瘤抗原特异性识别的T细胞亚群，经体外扩增后回输治疗。 目标抗原的选择人类肿瘤抗原主要可分为两类——肿瘤特异性抗原（例如，新抗原和病毒抗原）和肿瘤相关抗原（例如，癌症/睾丸（CT）抗原、过表达抗原和分化抗原）。 TCR基因治疗中考虑的其他肿瘤特异性抗原包括突变抗原和新抗原，其中大多数是安全的靶标，因为它们在肿瘤细胞中特异性表达。突变抗原在许多肿瘤类型中广泛表达，并且由于其个体化特征，可以通过测序获得新抗原。
43221编辑于 2024-02-18
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