外泌体提取与纯化总之,外泌体研究正如火如荼,想要研究好外泌体,首要任务就是获得高纯度的外泌体,小 M 带大家一起看下常见的提取方法及各自优缺点吧~■ 外泌体提取试剂盒,让高纯度外泌体获得更 Easy! 国际细胞外囊泡学会 (ISEV) 在 2014 年提议,对于分离获得的外泌体需要从三个层面进行鉴定:■ WB 检测外泌体标志蛋白表达情况外泌体膜上富含参与外泌体运输的跨膜蛋白家族 (CD63/CD81/ CD9)、热休克蛋白家族 (HSP60/HSP70/HSPA5/CCT2/HSP90) 和一些细胞特异性蛋白。 ■ NTA 检测外泌体粒径及浓度TEM 可以观察外泌体的形态学特征,但无法体现样本中所有外泌体的粒径分布情况及整体浓度。 体外示踪:如下图 5,Exos 和 ATV-Exos 外泌体用 PKH26 红色荧光标记,细胞骨架和细胞核分别用鬼笔环肽和 DAPI 标记,激光共聚焦显微镜扫描结果表明:PKH26 标记的外泌体 (红)
直到后来,科学家们才发现外泌体在细胞之间充当重要的沟通介质,进而影响细胞而至组织的生理活动。 外泌体研究成为国际研究热点,相关研究驶入快车道。 目前,越来越多的人将目光聚集在了外泌体相关的生信分析上,但依然有很多人对外泌体生信分析的套路和方法一知半解。不清楚外泌体和肿瘤的相关性研究有应该从什么方向去入手? 以及到底有哪些生信分析可以用在外泌体研究上的?为了帮助大家更快的了解外泌体的研究动态,我们总结近两年跟外泌体相关的生信分析研究文献,希望能给大家带来一些外泌体研究的灵感。 结果 tsRNA(tRNA-GlyGCC-5)和以前未记录的小RNA在ESCC患者、ESCC组织和ESCC细胞的唾液外泌体中特异性富集。 思路四:外泌体中包含的lncRNA介导的ceRNA调控网络对肿瘤诊断和预后的作用 Front Oncol. 2021 Mar 5;11:553594.
体液外泌体的来源混杂,可以是任何组织和细胞分泌的外泌体然后经体液循环进入。 其中,尿外泌体可以反映病理生理学,并为肾相关功能障碍提供生物学理解,是泌尿系统癌症很有前途的生物标志物来源。 尿外泌体和泌尿/非泌尿器官或细胞之间的遗传网络仍不清楚,本文旨在对尿外泌体bulk RNA-Seq数据进行组织和细胞类型溯源,为外泌体应用于疾病诊断和治疗提供重要理论依据。 在这里,我们通过RNA测序对尿外泌体进行了跟踪分析,发现尿外泌体主要表达膀胱的组织特异性基因,并与内皮细胞、基底细胞、单核细胞和树突状细胞有密切的细胞遗传关系。 主要结果 结果1—尿液外泌体溯源分析:组织类型溯源 数据情况: 116个尿液外泌体样本:lncRNA文库测序 Dataset S1 image-20220306002911335 11个组织特异marker ,发现膀胱、内皮细胞、基底细胞、单核细胞和树突状细胞可能密切参与了尿外泌体的形成 通过在细胞水平上跟踪泌尿系统癌症的DEG,并分析其富集通路,报道了泌尿系统外泌体在癌症发展过程中密切参与免疫活动。
文献主要结论 对5种生物液体中的10种分离exRNA的方法进行系统比较,将有助于研究人员为个别研究选择最佳的方法,其总体目标是提高一个快速增长的领域的可靠性和可重复性。 来定量分离exRNA image-20220411001932917 qRT-PCR鉴定exRNA分离和定量的变异来源 采用三个miRNA,这三个miRNA都曾经在多篇文献中被报道存在于细胞分泌的外泌体中 :let-7a-5p,miR-16-5p,miR-223-3p。 第二种:添加了性别和样本(个体与合并样本)作为额外的协变量:生物流体类型、性别和样本的贡献可以忽略不计 这些结果表明: 1.当检测少量miRNAs的qRT-PCR数据时,exRNA分离方法是除CCCM外的所有生物液体变异的重要来源 20220411060107138 使用这些指标,血浆和血清的检测结果相似,与其他方法相比,ME、Millipore、miRCURY、miRNeasy和Ultra与其他方法相比显示出明显较低的复杂性 除血浆中的miRCURY试剂盒外,
外泌体(Exosomes)是细胞分泌到胞外的一种纳米级内吞囊泡(40-160nm),含有丰富的内含物(包括核酸、蛋白和脂质等),可以调节受体细胞的行为,并可用作疾病的循环生物标记物。 今天小编给大家介绍一个在线外泌体数据库:exoRBase(http://www.exorbase.org)。 它是一个环状RNA(circRNA),长非编码RNA(lncRNA)和信使RNA(mRNA)的存储库,这些RNA来源于人类血液外泌体的RNA-seq数据分析,还包括已发表文献的实验验证。 旨在收集和表征人血液外泌体中所有长的RNA。目前包含58330个circRNA、15501个lncRNA和18333个mRNA,并提供了注释、表达水平和可能的来源组织。 通过这些图,我们可以快速概览所有外泌体样本组中TRAF3,GAB2,SNX1的表达水平。 Home 通过搜索框,输入基因名称可以实现快速搜索。具体操作及结果解释同“2”。
., 10 March 2022 作者:Qun Cheng,上海老年医学研究所老年代谢性骨病研究室,复旦大学附属华东医院骨质疏松与骨病科 血液的组成: 2我的关注 血清外泌体中miRNA的有效数据量是多少 3Serum Exosome Characterization 通过透射电镜、蛋白印迹和NTA结合从参与者中分离的外泌体进行鉴定:Size=100nm;exosomal markers:TSG101 and scale_fill_nejm() ggsave(filename = "miRNA_Stat.png",width = 16,height = 7) image-20220426002814209 再结合前面的五种外泌体中
外泌体 (Exosome) 是什么? 胞外囊泡可广泛的分为两类,核外颗粒体(Ectosome)和外泌体。核外颗粒体是从质膜脱离的外出芽小泡,包括直径在 ~50 nm-1 μm 的微泡、微粒和大囊泡。 外泌体的起源和形成方式导致其内容物、形状、大小均有差异,从而会影响受体细胞的不同功能,这种特性被称为外泌体的异质性。 YKT6 SNARE 被证明是分泌含 Wnt 的外泌体所必需的,而 Syx-5 (线虫同源物 Syntaxin-5),通过 Ral-1 小 GTPase 使 MVBs 靶向质膜。 外泌体的摄取 目前还不清楚外泌体是否必须被免疫细胞和非免疫细胞内化以引起细胞反应。
当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时,外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。外泌体在免疫中抗原呈递、肿瘤的生长与迁移、组织损伤的修复等生理病理上起着重要的作用。 血浆来源的外泌体miR-15a-5p作为早期检测子宫内膜癌的有前途的诊断生物标志物 Plasma-derived exosomal miR-15a-5p as a promising diagnostic 与健康受试者相比,从EC患者血浆样品中分离出的外泌体组中miR-15a-5p、miR-106b-5p和miR107显著上调。 综上所述,血浆来源的外泌体miR-15a-5p是早期检测子宫内膜癌的有前景和有效的诊断生物标志物。 通过外泌体促癌的分泌蛋白质组的传递和运输对于转移前微环境的形成和迁移至关重要。这项研究旨在探讨PDAC衍生的外泌体(Pex)如何调节肝脏微环境并促进转移的潜在机制。
exosome翻译为外泌体,是由细胞分泌的一种直径在30-150nm之间的囊泡,属于细胞外囊泡的一种,含有不同种类的RNA,可以调节受体细胞的行为,并且可以作为疾病的循环生物标记物,在血液,唾液,尿液等多种体液中都广泛存在 exoRBase是一个人类血液外泌体中RNA的数据库,网址如下 http://www.exorbase.org/ 从GEO数据库中收集血液外泌体的转录组测序数据,共收集了来自6个实验共87个样本的数据, 在以上分析结果的基础上,又通过在pubmed数据库中检索外泌体RNA相关文献,新增了部分RNA数据,所有来源的RNA数量汇总如下 ? 通过导航栏的Browse菜单,可以查看外泌体中的各种RNA信息,示意如下 ? 通过导航栏的Search菜单,可以方便的检索该数据库,示意如下 ? 该数据库针对外泌体中的RNA进行研究,其构建的思路值得借鉴。 ·end· —如果喜欢,快分享给你的朋友们吧— 扫描关注微信号,更多精彩内容等着你!
小站VIP群里有中标标书的摘要,不过大家使用的并不全面站长挑选几个研究热点的摘要,本期的主题是外泌体。 外泌体 外泌体-1* 肿瘤化疗耐药不仅与肿瘤细胞自身有关,还受细胞间相互作用调控。 本项目拟在此基础上,阐明RxxxxA调控外泌体分泌的机理,并进一步揭示分泌增加的外泌体通过miRNA调控CRC耐药的机制,从外泌体角度阐明CRC如何通过细胞间交流促进自身耐药,为CRC耐药防治提供新思路 外泌体是细胞分泌的微小囊泡,介导细胞间信号传递。 据此我们假设:胃癌外泌体环状RNA可促进白色脂肪褐色化,加剧恶病质。 在预实验中,CAFs外泌体促进舌鳞癌化疗抵抗,筛选外泌体异常表达长非编码RNA(lncRNA),其中RP13-463N16.6介导耐药细胞自噬激活与化疗耐受。
文章:https://academic.oup.com/nargab/article/3/1/lqab011/6148840 文章中所有数据和代码:https://figshare.com/s/3b5cfb597a0b3bc2801c 文章中主要使用scMappR构建了一个cell-type signature matrix,然后使用CIBERSORT:(https://cibersortx.stanford.edu/) 进行尿液外泌体的细胞类型溯源 lname <- load("scMappR_Data-master/mouse_cell_markers.rda") lname str(gmt_list,max.level = 1) List of 5 579 $ gmt_gobp :List of 19394 $ gmt_panglao :List of 142 $ gmt_subtype :List of 19 总共有5个来源的常见细胞类型 "Psg26" "Ceacam14" "Psg21" "Ceacam12" "Psg29" "Ceacam3" "Psg20" "Psg25" [14] "Ceacam5"
导语 肿瘤衍生的外泌体(TEXs)参与肿瘤进展和免疫调节过程,并介导肿瘤微环境中的细胞间通讯。 结果解析 01 肿瘤衍生外泌体相关评分的构建 为了表征肿瘤源性外泌体,本研究总共选取了33个肿瘤源性外泌体相关基因,并将其分为三个模块。 ),这些基因在多项研究中被认定为经典的外泌体标记基因。 图 1 因此,本研究认为上述筛选的基因与外泌体的形成和分泌特征以及肿瘤进展特征相关。 总之,这篇文章向大家展示了外泌体相关的分析思路,希望能对大家有所启发!
细胞向胞外环境中释放多种来源于细胞内体或细胞膜的囊泡结构,包括外泌体、微泡等,统称为细胞外囊泡。细胞外囊泡是细胞间信号沟通的一种重要模式,介导了蛋白质,脂质,RNA等活性大分子在细胞间的传递。 10.1038/s41580-022-00460-3 发表时间:Published: 08 March 2022 作者:Guillaume van Niel 和Pieter Vader 我的问题 细胞分泌外泌体是否随机 分泌出去的外泌体的靶向受体细胞是否随机? 外泌体介导的细胞通讯与其他方式的细胞通讯有何不同? 外泌体运输途径有哪些? 通过与质膜结合的信号分子影响其他细胞(图E) 动物相邻细胞间形成间隙链接,植物细胞间通过胞间连丝是细胞间相互沟通 其中,自分泌方式一般是病理性质的,多见于肿瘤细胞自己分泌刺激因子促进自身分裂增殖 外泌体的交流方式 在 Necker 研究所(法国巴黎)攻读博士学位期间,他报告并研究了肠上皮细胞分泌的外泌体的分泌和功能。
五、ICC肿瘤细胞分泌的外泌体miR-9-5p被vCAF内化摄取,引起IL-6的高表达,从而促进肿瘤进展 因为肿瘤细胞分泌的外泌体可以指导基质促进肿瘤进展,使用由ICC细胞分泌的外泌体处理vCAFs时, 由于外泌体中的miRNA最为丰富,并且最近有研究发现miRNA可以参与肿瘤细胞与基质细胞之间的通话crosstalk。 因此我们假设:ICC细胞来源的外泌体可能包裹着mirna介导vCAFs中IL-6表达上调。 为了验证这个假设,作者对ICC细胞分泌的外泌体进行提纯,对其中的miRNA进行了qPCR分析。 我们发现外泌体中的miR-9-5p可以显著的增强vCALs中IL6的表达,而IL6可以引起EZH2的表达,从而促进ICC细胞的恶性程度。 总的来说,就是作者发现了一群细胞vCAFs与肿瘤细胞有频繁的配体-受体关联,然后通过外泌体的分析发现其中的具体机制:肿瘤细胞分泌的外泌体中包裹的丰富的miRNA运输到vCAF中调控其高表达IL-6有利于自己干坏事
初次接触外泌体的小伙伴们是不是很难捋清外泌体与各种囊泡的关系?是否被各种五花八门的囊泡缩写搞得头疼? 为方便各位更好进食本文,小 M 整理出一份外泌体相关囊泡的区分清单 (表 1),请保存使用哦~表 1. 外泌体相关囊泡区分表[2][3][4][5]。 ,成为外泌体 (图 2)。 并且,MVBs 也可与其他 ILVs 和细胞器融合,从而导致外泌体成分的多样性。此外,根据来源细胞的不同,外泌体的内含物也会产生差异。简单来说,外泌体具有异质性。 5);4) (液体活检相较于组织活检) 创伤小、成本低、可实时了解肿瘤状态;5) 相较于组织活检,可减少患者取样痛苦;6) 易储存:冷冻、冷冻干燥或喷雾干燥。
继 2018 年 EVLncRNAs-V1.0 和 2021 年 EVLncRNAs-V2.0 的版本之后,这次更新标志着从 2020 年5月15日至2023年5月15日对近 25 000 份出版物的重大扩展
三、CD63+ CAF分泌的miR-22促进他莫昔芬耐药 外泌体是一个纳米级别的囊泡结构,在细胞间通讯起到一个非常重要的作用,因此,我们想知道CD63+CAFs分泌的外泌体是否能够引起癌细胞中ERa的低表达 首先,分离和提纯来自CAF分泌的外泌体,外泌体的电镜结构: WB鉴定外泌体中包含的蛋白: 使用 CAF-derived exosomes治疗ER-positive乳腺癌,观察到 CD63+ CAF-derived 由于外泌体中miRNA含量非常丰富,并且外泌体介导的miRNA传递被广泛认为有助于许多癌症的耐药。 因此,我们想知道是否CD63+ CAFs来源的外泌体mirna可诱导BCs ER下调。 2.使用上面处理过的CAFs处理ER-positive BCs 结果表明ER-positive BCs中的ERa表达并没降低 结果说明 CD63+ CAFs主要通过外泌体中的miRNA诱导ERa的下调 接下来定位外泌体中具体的miRNA,实验设计如下: miRNA-seq:CD63+ CAFs 外泌体 vs CD63+-depleted CAFs 差异分析:top miRNAs (fold change
最新的研究发现,肿瘤细胞释放的外泌体也携带有PDL1,从而对远端免疫细胞产生抑制效果,同时可以抵抗抗免疫治疗。 澳门大学代云路教授团队创造性的提出了通过阻断肿瘤细胞来源外泌体释放来逆转肿瘤免疫抑制微环境的策略。他们通过两亲性透明质酸组装外泌体抑制剂(GW4869)和铁死亡诱导物(Fe3+)构建了HGF纳米单元。 HGFNPs抑制外泌体PD-L1并引发强大的免疫刺激。 图3.评价HGF相关外泌体PD-L1抑制引起的增强的铁死亡。 图4. HGF对B16F10肿瘤有明显的治疗作用。 图5.
二、核心发现:外泌体"模拟"病毒的完整入侵通路该研究系统揭示了巨噬细胞来源的外泌体传递抗病毒效应的完整路径,发现其巧妙地"借用"了病毒入侵宿主细胞的多个关键步骤。 研究证实,抑制肝细胞TIM-1的表达,会显著阻碍外泌体的内吞及其抗病毒效应的传递。 2.网格蛋白与大胞饮介导的内吞:结合后,外泌体主要通过两种病毒常用的内吞途径进入肝细胞:-网格蛋白介导的内吞:使用特异性抑制剂或敲低网格蛋白重链,可有效抑制外泌体的摄取。 阻断上述任一内吞途径,均会削弱外泌体传递的抗病毒效应。3.内体膜融合与内容物释放(内体逃逸):内吞后,外泌体并未被导向溶酶体降解,而是通过与晚期内体/多囊泡体的膜发生融合,将其内容物释放至细胞质中。 2.内容物成分研究的参照:外泌体中传递的关键抗病毒效应分子可能为IFN刺激基因产物或非编码RNA。
沈阳药科大学孙进教授团队开发了一种外泌体样的序贯生物激活前药纳米平台来克服这一障碍。 具体而言,将活性氧响应的单硫醚键连接的紫杉醇-亚油酸前药(PTX-S-LA)和葫芦素B(CuB)共包载到聚合物胶束中,并用外泌体膜进一步修饰纳米颗粒表面。 通过癌细胞和同型外泌体膜之间的高亲和力相互作用,所得制剂可以在血液循环过程中特异性捕获并清除循环肿瘤细胞。 因此,外泌体样序贯诱导生物激活前药纳米粒,整合了抗肿瘤转移和促前药生物激活,是有临床转化前景的二合一纳米治疗平台。