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【辰辉创聚生物】原核蛋白表达纯化|大肠杆菌蛋白表达|枯草芽孢杆菌表达|蛋白分泌表达
而枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）因其安全性高、可直接分泌蛋白，逐渐受到重视，尤其适合下游对纯度和安全性要求较高的应用场景。大肠杆菌表达系统大肠杆菌在蛋白表达领域有着不可替代的地位。 其次，它不产生内毒素，这使得表达蛋白的下游纯化过程更加简便。更重要的是，枯草芽孢杆菌天然具有分泌能力，能够将目标蛋白直接分泌到培养液中，从而避免了复杂的细胞裂解和初步纯化步骤，大幅度提高了效率。 此外，通过在目标基因前端融合合适的信号肽，还可以实现高效的分泌表达，使目标蛋白直接进入培养液中。但枯草芽孢杆菌系统仍有不足，例如遗传操作工具相对较少，表达的蛋白容易受到宿主自身分泌蛋白酶的降解。 枯草芽孢杆菌若选择分泌表达，则可直接从培养上清液中收集目标蛋白，省去了细胞裂解步骤，大大简化了流程。在这种情况下，利用亲和层析即可获得较高纯度的蛋白。 随着分子生物学与合成生物学工具的不断进步，原核表达平台在蛋白折叠调控、分泌效率提升及功能保持等方面将持续突破，为高效、安全、可控的蛋白制备提供更加完善的解决方案。
46910编辑于 2025-08-29【辰辉创聚生物】重组蛋白表达完全指南：融合、分泌与包涵体表达解析
融合表达特别适用于小分子量、易降解或表达量低的蛋白。2. 非融合表达非融合表达则直接表达目的蛋白自身，不附加任何标签序列。 分泌表达分泌表达通过将目标蛋白引导至宿主细胞的周质空间（如大肠杆菌）或培养基上清（如酵母、哺乳动物细胞）中。这一过程依赖于在目的蛋白N端添加特定的信号肽。 分泌表达的优点在于：蛋白在相对简单的细胞外环境中折叠，更易形成正确构象和二硫键，可溶性好，活性高；同时，培养基成分简单，杂质蛋白少，大大简化了下游纯化。 但分泌表达产量可能低于胞内表达，且对信号肽和宿主系统的匹配性要求较高。5. 可溶性表达可溶性表达是指目标蛋白在宿主细胞内以可溶的、正确折叠的形式存在。这是获得高活性蛋白的理想状态。 酵母表达系统（如毕赤酵母、酿酒酵母）：兼具原核系统的生长快速、操作简便以及真核系统的部分翻译后修饰能力（如二硫键形成、基础糖基化）。它是分泌表达的理想选择之一，能向培养基中分泌大量蛋白，便于纯化。
10810编辑于 2026-02-06- 来自专栏Y大宽
Burkholderia pseudomallei中的VI型分泌系统
---- 题目： 通过体内表达技术鉴定了在巨噬细胞入侵伯克霍尔德氏菌（Burkholderia pseudomallei）时诱导的VI型分泌系统 Introduction 类鼻疽（Melioidosis 对于很多细菌病原体，进入或在真核细胞内生存依赖于其功能性的III型或IV型分泌系统（T3SS或T4SS）。bp基因组具有编码从T3SS1-T3SS3三种T3SS的潜力。 IVET使用基因表达策略研究细菌对宿主环境的反应，分析细菌在宿主体内（包括细胞内）的基因表达，也就是说可以选择在感染期转录诱导的基因。 这种方法也证明可以用于鉴定培养的巨噬细胞中表达的细菌基因，而这依赖于氯霉素可以穿透哺乳动物细胞的事实。 我们的结果表明，至少一种VI型分泌系统（T6SS）基因簇以及至少两种不同金属离子获取系统的基因在巨噬细胞摄取后被诱导。
74040发布于 2019-06-11 - 来自专栏生信技能树
B细胞可分泌GABA需要单细胞数据证明
看到了朋友圈转发一个最新的（November 2021）发表在nature杂志的研究成果，日本RIKEN的科研团队首次发现，B细胞竟会分泌一种神经递质——γ-氨基丁酸（GABA），进而抑制细胞毒性T细胞功能 可以看到B细胞并没有特殊之处哦： 当然了，需要跟降维聚类分群结果对应，如下所示： 从全局表达量来说，B细胞其实是非常特殊了，可惜，它的 GABA相关基因 并没有特殊之处 在AML疾病单细胞数据集查询该基因列表 单细胞转录组数据的降维聚类分群 07.单细胞转录组数据处理之细胞亚群注释 08.把拿到的亚群进行更细致的分群 09.单细胞转录组数据处理之细胞亚群比例比较 我们直接看效果： b细胞各个亚群都或多或少表达 GABA相关基因 可以看到， b细胞各个亚群都或多或少表达GABA相关基因，那么这样的结论值得发表在 nature杂志 吗？ 张泽民团队的单细胞研究把T细胞分的如此清楚 细胞通讯分析的背景知识 构建单细胞亚群网络（类似于细胞通讯分析） 细胞通讯分析结果的解读 SCENIC转录因子分析结果的解读 人人都能学会的单细胞聚类分群注释 对单细胞表达矩阵做
56040发布于 2021-11-23 【辰辉创聚生物】如何选择重组蛋白表达系统：原核 vs. 真核，融合 vs. 分泌
而这一切的起点，在于为您的目标蛋白选择一个最匹配的表达系统。面对原核与真核、融合与非融合、胞内与分泌等多种选择，如何进行决策？ 真核表达系统选择表达宿主是整个表达策略的顶层设计，主要取决于目标蛋白的复杂性及其对翻译后修饰的需求。 其强大的分泌表达能力，使得分泌表达和下游纯化极为方便，是许多细胞因子和酶类的理想选择。昆虫细胞-杆状病毒系统：功能强大。能完成大多数真核修饰，蛋白折叠正确率高，表达水平通常优于哺乳动物细胞。 确定宿主系统：若为简单、小分子、无需修饰的蛋白 → 优先考虑原核蛋白表达（大肠杆菌）。若需要正确折叠和二硫键、且需分泌 → 可考虑真核蛋白表达中的酵母系统。 在真核系统中，若希望简化纯化，同样可采用N端或C端分泌信号肽+His标签的融合设计，实现培养基上清中的分泌表达与一步纯化。
13210编辑于 2026-02-05- 来自专栏音乐与健康
音乐触发基因开关，激活胰岛素分泌
糖尿病是全世界范围内非常常见的代谢性疾病，由于胰岛素分泌缺陷和/或其生物作用受损，导致高血糖，进而导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。 关键词：音乐；基因；胰岛素；分泌；体感；声波；情绪；心理；健康；糖尿病；细胞；多模态而最近，苏黎世联邦理工学院的研究人员开发出了一种新方法——通过播放音乐刺激细胞在几分钟内释放胰岛素，例如皇后乐队的热门歌曲 特定音乐促进胰岛素分泌研究团队首先确定了激活离子通道效果最强烈的音乐的音量和频率，他们发现，60分贝左右的音量水平和50赫兹的低音频率是触发离子通道打开的最有效条件。
22910编辑于 2025-10-10 - 来自专栏单细胞天地
内分泌器官胰岛的细分单细胞亚群
让我们从内分泌器官胰岛的细分单细胞亚群开始吧，首先我们让chatGPT帮我们回忆一下内分泌器官的概念啦，它是指能够产生和分泌激素（内分泌物质）的器官，这些激素通过血液传递到体内其他部位，对生理活动产生调节和控制作用 内分泌器官广泛分布在人体各个系统中。以下是一些主要的内分泌器官： 甲状腺： 产生甲状腺激素，对新陈代谢和生长发育有重要影响。 心脏： 分泌心钠肽，对调节体液平衡和血压有影响。 脾脏： 产生多种激素，包括胰高血糖素和免疫相关激素。 再让chatGPT告诉我们 胰岛（胰腺的内分泌器官）中的两种主要类型的内分泌细胞： 胰岛α细胞： 主要激素： 胰高血糖素（glucagon） 功能： 胰高血糖素的主要作用是升高血糖水平，通过促使肝脏释放葡萄糖来实现 这些内分泌细胞在胰岛中的分布并非均匀的，而是形成了特定的结构，使得它们能够协调地调节血糖水平和其他代谢过程。研究人员通过单细胞技术等先进技术，能够更深入地了解每一种内分泌细胞的亚群和功能特性。
33610编辑于 2024-02-01 - 来自专栏音乐与健康
揭示动作电位发放模式调控多巴胺分泌新机制
该研究发现在生理情况下存在一条GPCR-D2R调控多巴胺分泌的新通路，动作电位频率/电压通过直接作用于GPCR-D2R来调节下游电压门控型钙通道（VGCCs）的功能，进而调控多巴胺分泌，其中D131是D2R 这条新通路对多巴胺分泌的调控贡献可高达50%，提示其具有重要的生理意义，为神经元电活动调控突触传递功能和相关疾病治疗提供新理论和新思路。研究发现，D2R神经兴奋依赖性调控多巴胺在体分泌。 研究人员在中脑多巴胺脑区向前投射的前脑内侧束（MFB）给予不同频率的电刺激，通过碳纤维电极CFE实时记录纹状体的多巴胺分泌，发现D2R的拮抗剂HP和激动剂QP均在低频刺激下（20 Hz）显著调控多巴胺分泌 以上结果表明，D2R对多巴胺分泌的调控作用受到神经兴奋模式的精准调控。图1 GPCR-D2R对在体纹状体多巴胺分泌的调节具有频率依赖性 研究还发现，D2R神经兴奋依赖性调控离体脑片多巴胺分泌。 ，即生理状态下D131介导GPCR-D2R对多巴胺分泌的频率依赖性调控。
16000编辑于 2026-02-22 - 来自专栏人称T客
【饼哥开扒】CRM荷尔蒙分泌过剩，节操的下限在哪里？
CRM荷尔蒙分泌过剩的结果就是，再次刷新节操下限的“急死你”世界纪录，人家阿基米德也只是吹个牛B翘起地球，您这已经成功通过节操这个平台将地球击穿。
75850发布于 2018-03-16 科研必读｜提升酿酒酵母表达蛋白产量的关键技术
但实践中常遇到表达水平低、错误折叠、分泌效率差、细胞应激反应强等问题。一、基因设计与表达元件优化1. 文献中，通过构建一个蛋白分泌模型（pcSecYeast），识别并调控如 Sec16 等分泌通路中限速节点，可以中等表达 Sec16 提升分泌量。 Lin 等人的研究中，这些调控使蛋白分泌量提升显著。操作方式包括：稳定表达或诱导表达折叠伴侣 (e.g. 表达温度及培养时间如前所述，低温表达 (e.g. 20 °C vs 30 °C) 常用于复杂或易错折叠蛋白，有助于提高正确折叠和分泌比率。 过表达导致的细胞毒性与资源竞争翻译机器、折叠与分泌通路都有有限容量；当蛋白表达过度时，可能导致总体细胞生长变慢，分泌积累错误折叠蛋白，甚至引发细胞死亡或自我调控降低表达。3.
56610编辑于 2025-09-22- 来自专栏生信宝典
Cell子刊 | 肠内分泌细胞单细胞测序分析（附资源库传送门）
发现它们一共可以表达14种不同类型的神经内分泌肽，并完成了各EE细胞亚型的神经内分泌肽表达谱的绘制。 研究人员进一步对神经内分泌肽受体在EE细胞中的表达模式进行了分析，发现EE细胞表达的绝大多数神经内分泌肽，其受体并不在EE细胞中表达；而EE细胞表达的绝大多数受体，其相应的配体也表达于其他组织中，提示EE 有趣的是，某些EE细胞表达的神经内分泌肽，其受体也表达在临近的或远距离的EE细胞亚型中，提示EE细胞之间可能存在旁分泌或远距离交流机制。 接下来，研究人员进一步探索了EE细胞不同亚型的分化机制。 在前段肠道区域中存在一类AstC和Tk均不表达的EE细胞，且这些EE细胞表达另一种神经内分泌肽sNPF，这类EE被命名为Class III EE。 最后，研究人员进一步探索了与神经内分泌肽的表达模式高相似性或互斥性的转录因子，并从中发现了hbn, NK7.1，nlp等转录因子对EE多个细胞亚型的分化作用，最终构建了调控EE亚类分化的转录因子代码（图
1.3K30发布于 2019-12-21 - 来自专栏单细胞天地
垂体神经内分泌肿瘤的单细胞转录组和基因组分析
login=false 摘要 垂体神经内分泌肿瘤（PitNETs，也称为垂体腺瘤）是第二常见的颅内肿瘤，大约每 1000 人中有 1 人发生。 PIT-1 谱系和促肾上腺皮质激素肿瘤通常会分泌过量的激素，这会导致高催乳素血症（分泌催乳素的促泌乳素肿瘤）、肢端肥大症（分泌生长激素的促甲状腺激素肿瘤）、甲状腺功能亢进（分泌促甲状腺激素的促甲状腺激素肿瘤 最后确定了 3 种正常内分泌细胞类型：生长激素细胞、泌乳素细胞和促性腺激素细胞。肿瘤和配对的正常细胞的比较表明，下调基因是促性腺激素肿瘤相关，而上调基因是关于生长激素和泌乳素肿瘤的。 第一组是 10 个 PIT-1 阳性肿瘤的 PIT-1 谱系 第二组是 4 个 T-PIT 阳性肿瘤的促肾上腺皮质激素谱系 第三组是 8 个促性腺激素肿瘤和 1 个 T-PIT 和 SF-1 异常共表达的肿瘤 图F能够看到，干细胞特异性SOX2和SOX9在一些肿瘤的一小部分细胞中表达。表达 T-PIT 和 SF-1 (P11) 的肿瘤中也会显著表达SOX9，反映了肿瘤的转录失调。
92621编辑于 2022-03-14 - 来自专栏生信技能树
细胞通讯分析的背景知识
人们可以从基因表达中推断出CCI和CCC，尤其是在单细胞转录组测序之后，以RNA为代表的细胞信息之间的相互作用更能够对其进行解析。 主要是流程就是根据数据库记录的参与细胞间通讯的相互作用蛋白列表，筛选表达矩阵后，看配体和受体表达量根据某个评分函数的交流得分，多个配体和受体聚合成为细胞与细胞之间的总体交互状态，最后通过网络可视化展现出来 自分泌，旁分泌，近分泌和内分泌 自分泌信号转导是指细胞内通讯，细胞分泌配体，这些配体用于通过同源受体诱导同一细胞上表达的那些分子的细胞应答。 旁分泌细胞间的通讯不需要细胞间的接触，而是取决于信号分子在分泌后从一个细胞扩散到另一个细胞。 内分泌细胞间的通讯代表细胞间的通讯，信号分子被分泌并通过诸如血浆的细胞外液传播很长一段距离。
1.3K32发布于 2020-12-17 【辰辉创聚生物】酵母蛋白表达|酵母表达系统|异源蛋白表达|真核蛋白表达
分泌信号肽通过在外源基因前端融合分泌信号肽（如 α-因子前导肽），可以将目标蛋白导入分泌途径，从而将蛋白分泌到培养基中，极大简化下游提取与纯化流程。4. 翻译后修饰与分泌机制与原核表达系统相比，酵母表达系统的突出优势在于其翻译后加工能力：糖基化：酵母能够进行 N-和 O-糖基化，但其糖基化结构与哺乳动物存在差异，需通过工程改造以获得更接近人源的修饰模式。 分泌途径：通过高尔基体与囊泡运输，目标蛋白最终被分泌到胞外环境，这为大规模生产提供了便利。折叠效率与伴侣蛋白共表达在高水平表达过程中，外源蛋白容易在内质网中错误折叠或聚集，引发内质网应激反应。 例如 pcSecYeast——一个涵盖蛋白翻译、分泌、折叠、降解全过程的基因组尺度模型，可模拟分泌通路负担与内源蛋白表达抑制效应，并预测工程优化目标。 分泌信号选择：在 P. pastoris 中不同分泌信号序列效果差异明显，需筛选最优信号肽（如 lysozyme 序列提升 lipase 表达）。
37610编辑于 2025-08-28IFN-β调控TLR4通路下游IL-12p70分泌的机制研究
既往研究已证实IL-12p70的表达受多种信号通路调控，但其上游决定性因素及其在人群中的变异机制仍未完全阐明。 二、IL-12p70分泌的个体差异现象（一）多种刺激条件下细胞因子分泌谱分析研究首先收集健康受试者全血样本，采用27种不同刺激物进行体外激活，系统检测32种分泌蛋白的表达水平。 然而，免疫表型分析揭示，低应答组CD14+单核细胞表面HLA-DR及CD86的表达水平显著降低。 四、IFN-β作为上游调控因子的鉴定（一）转录组差异分析为进一步解析IL-12p70分泌差异的分子基础，研究对对照组与LPS刺激组进行了全基因组表达谱分析。 差异表达最显著的基因集中于HLA家族，与流式细胞表型结果高度一致。此外，IFN-γ信号通路相关基因如CIITA、MX1、IDO1亦呈现显著差异表达。
6910编辑于 2026-02-24- 来自专栏用户7627119的专栏
细胞相互作用在单细胞转录组中的应用（一）
特别是，配体-受体对可用于从其同源基因的协调表达中推断细胞间的通讯。 细胞相互作用类型 细胞互作的类型主要包含四类，分别是自分泌、旁分泌、近分泌和内分泌。 自分泌信号转导是指细胞内通讯，细胞分泌配体，这些配体用于通过同源受体诱导同一细胞上表达的那些分子的细胞应答；旁分泌细胞间的通讯不需要细胞间的接触，而是取决于信号分子在分泌后从一个细胞扩散到另一个细胞；近分泌依赖于接触的细胞间通讯依赖于间隙连接或膜纳米管等其他结构 ，使信号分子直接在细胞之间传递，而不会分泌到细胞外；内分泌细胞间的通讯代表细胞间的通讯，信号分子被分泌并通过诸如血浆的细胞外液传播很长一段距离。 随机打乱细胞类型标签，计算相互作用平均表达量；重复1000次，得到平均表达量的分布；如果用鉴定细胞类型计算的平均表达量较高，大于分布的top50，那么我们可以认为这一对相互作用的P值小于50/1000= 如果有一个亚基的表达量等于0，那么配体Li 的表达量等于0，这跟cellphoneDB的思想类似；Li 的表达量跟LA正相关，LI负相关；Rj的计算方法跟L一样。
2.5K10编辑于 2022-09-21 - 来自专栏生信技能树
构建单细胞亚群网络（类似于细胞通讯分析）
主要是流程就是根据数据库记录的参与细胞间通讯的相互作用蛋白列表，筛选表达矩阵后，看配体和受体表达量根据某个评分函数的交流得分，多个配体和受体聚合成为细胞与细胞之间的总体交互状态，最后通过网络可视化展现出来 自分泌，旁分泌，近分泌和内分泌 自分泌信号转导是指细胞内通讯，细胞分泌配体，这些配体用于通过同源受体诱导同一细胞上表达的那些分子的细胞应答。 旁分泌细胞间的通讯不需要细胞间的接触，而是取决于信号分子在分泌后从一个细胞扩散到另一个细胞。 近分泌，即依赖于接触的细胞间通讯依赖于间隙连接或膜纳米管等其他结构，使信号分子直接在细胞之间传递，而不会分泌到细胞外。 内分泌细胞间的通讯代表细胞间的通讯，信号分子被分泌并通过诸如血浆的细胞外液传播很长一段距离。
1.5K40发布于 2020-12-17 - 来自专栏作图丫
影响因子9分+的TCGA泛癌分析思路
结果解析 01 分泌基因在多种癌症中的表达分析 研究人员对于被Human Protein Atlas预测具有至少一种分泌蛋白质的基因，筛选差异表达的基因，与正常样本相比，2933 个secretome 作者研究了12种癌症类型中基于癌症转录组的分泌体的多样性和复杂性。与正常组织相比，肿瘤的分泌组异常基因数量差异很大。 Fig.1 02 分泌基因揭示了人类癌症内外恶病质的潜在介质 鉴于许多分泌可溶性因子与不同类型肿瘤中的恶病质有关，这些肿瘤之间共享的分泌蛋白基因编码有可能揭示该综合征发病机制的关键因素。 重要的是，分泌蛋白的共同上调基因揭示了肿瘤微环境中恶病质的潜在介质，特别是在与该综合征高度相关的肿瘤中。 在单一癌症类型中检测到的上调分泌体基因，特别是与恶病质高度相关的基因，是肿瘤特异性候选基因。 而CIFs的表达水平与肿瘤分级之间没有相关性（Fig.4）。 Fig.4 06 恶病质诱导因子的表达预测了癌症的结果 作者使用生存分析平台比较了CIFs在肿瘤中的表达水平和患者的预后。
1.5K20编辑于 2022-03-29 【辰辉创聚生物】重组蛋白表达纯化:毕赤酵母蛋白表达系统全解析
其强启动子（如 AOX1）可实现高水平表达，而高密度发酵使其可达到每升克级产量。此外，该系统宿主分泌内源蛋白少，便于纯化。2. 纯化简便毕赤酵母表达的目标蛋白可通过分泌表达释放到培养上清，减少破碎细胞所导致的杂质，降低对 His-tag 等亲和标签的依赖。同时，宿主分泌蛋白含量低，有利于下游纯化流程。 影响蛋白表达水平的关键因素1. 外源基因拷贝数提高外源基因拷贝数通常可增强蛋白表达，但极高拷贝可能引发宿主代谢负担，甚至抑制增长与表达，因此需要优化筛选。2. 信号肽与分泌路径选择适配的信号肽（如 α-factor）可有效引导重组蛋白分泌，提升纯化便利与表达水平。5. 分泌上清收集：离心、过滤并进行缓冲交换。5. 初步纯化：采用离子交换或疏水层析。6. 亲和层析：His-tag/Ni-NTA 常用，必要时可去除标签。7.
57610编辑于 2025-09-03【辰辉创聚生物】原核蛋白表达与真核蛋白表达的差异选择
；随后在细胞质核糖体上翻译合成蛋白，并在内质网和高尔基体中经历 折叠、伴侣辅助、二硫键形成、糖基化及其他修饰，最终定位到细胞内合适区域或分泌至胞外。 正确折叠和高功能性：内质网和高尔基体提供分子伴侣和折叠环境，适合表达结构复杂的蛋白（如抗体、受体、膜蛋白）。分泌效率较高：能有效将目标蛋白分泌到培养基中，简化纯化过程。 1.7 是否需要分泌 / 分泌表达一些蛋白/酶希望在培养液中分泌表达以便纯化，这时需要考虑宿主的分泌能力（原核分泌能力较弱，真核分泌能力较强）。2. * 在转移前还可尝试折叠辅助策略（如共表达伴侣、调整诱导条件、低温诱导、融合溶解标签、分泌表达等）以挽救原核表达系统。 分泌表达：在原核中可以尝试信号肽诱导分泌表达（如 Sec、Tat 通路），以将蛋白导入胞外空间，但成功率较低；在真核中分泌表达通常更为可靠。
39910编辑于 2025-09-30
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