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BioLamina LN521全长层粘连蛋白包被基质指南：iPSC稳定扩增、单细胞传代与临床级培养实践
摘要： 本文围绕诱导多能干细胞（iPSC）培养过程中基质包板这一关键环节展开分析，系统介绍BioLamina全长层粘连蛋白521（LN521）的产品特点、作用机制及标准化包板流程，同时对LN521、MX521 在这一背景下，全长人重组层粘连蛋白521（LN521）逐渐成为iPSC培养领域的重要基质之一。 二、BioLamina LN521的核心特点BioLamina开发的LN521属于全长人重组层粘连蛋白，其结构与人体天然层粘连蛋白521高度一致，能够更真实地模拟胚胎干细胞及iPSC所处的天然细胞外基质环境 当细胞逐渐适应培养体系后，可根据实际情况调整至5 μg/mL，以兼顾培养效果与使用成本。图3 表面涂层浓度与工作液用量计算参考完成工作液配制后，应确保培养器皿表面完全被覆盖。 全长层粘连蛋白521通过模拟天然细胞外基质环境，为iPSC扩增、单细胞培养及长期传代提供了更加稳定的培养条件。
14610编辑于 2026-06-16 - 来自专栏细胞培养
全长Laminin在肝细胞培养与3D肝类器官中的应用：LN521、LN111、LN411促进hPSC来源肝细胞成熟的研究解析
因此，人重组全长层粘连蛋白（laminin）开始受到越来越多关注，并逐渐成为构建高生理相关性培养体系的重要方向。 其中，LN521、LN111与LN411是目前肝细胞培养与肝类器官研究中较受关注的几种全长层粘连蛋白。 从细胞培养逻辑来看，全长层粘连蛋白不仅仅是“贴壁材料”，它们还会影响细胞形态、细胞极性建立、细胞迁移以及细胞分化状态。 这说明全长层粘连蛋白不仅能够改善细胞形态学特征，还可能进一步促进肝细胞功能成熟。图5：LN521和LN111与Matrigel对比培养的hPSC来源肝细胞ALB与CYP3A表达水平。 相比传统3D培养体系，基于全长层粘连蛋白建立的培养模型，还能够降低肝球体之间的差异性，并提高培养一致性。
17410编辑于 2026-05-12 - 来自专栏iPSC诱导多能干细胞培养
LN521层粘连蛋白在人多能干细胞培养中的成本与扩增优势：全长Laminin培养体系解析
随着干细胞研究、再生医学以及细胞治疗方向的发展，人重组全长层粘连蛋白（Laminin）由于具有较高生理相关性、批次稳定性以及标准化优势，逐渐成为hPSC培养体系的重要组成部分。 关键词：LN521、Biolaminin521、全长Laminin、hPSC培养、人多能干细胞、iPSC培养、层粘连蛋白、干细胞培养基质、细胞扩增一、为什么hPSC培养越来越关注培养基质选择？ 近年来，全长层粘连蛋白（Laminin）由于能够提供更接近人体天然环境的培养条件，开始受到越来越多研究关注，其中Biolaminin521（LN521）已逐渐成为较常见的人多能干细胞培养方案之一。 数据图5.不同培养体系下单位细胞培养成本比较进一步分析可以发现，LN521培养体系中的培养基与基质成本分配更加均衡，同时无需通过增加培养基使用量来获得更高细胞产量，因此在长期培养项目中能够降低整体资源消耗 基于全长层粘连蛋白构建的人源培养环境，也有望在基础研究、药物开发以及临床前研究中发挥更大作用。
16610编辑于 2026-05-22 - 来自专栏三代测序-说
全长转录组 | 三代全长转录之circRNA（ONT ）-- CIRI-long
与传统的线性RNA（linear RNA，含5’和3’末端）不同，circRNA分子呈封闭环状结构，不受RNA外切酶影响，表达更稳定，不易降解。 因此，确定其的全长序列，是进行circRNA功能研究的重要基础。 实验结果表明，与传统的circRNA二代测序技术相比，该方法将circRNA检测灵敏度提升了20倍，并可实现对不同长度（<100bp - 5kb）的circRNA全长序列的无偏识别，大幅提升了环形转录本的重构能力 ，先前的测序方法无法实现对全长circRNA的高通量检测。 back-spliced junction site ---- 5'端反向剪切位点 5 end 结束 3' back-spliced junction site ---- 3'端反向剪切位点 6
1K20编辑于 2024-04-07 - 来自专栏三代测序-说
全长转录组 | 三代全长转录组分析流程（PacBio & ONT ）-- Flair
今天我们介绍一款使用三代全长转录本数据进行转录本校正，聚类，可变剪切分析，定量和差异分析为一体的工具 - FLAIR。 剪接体由 5 个小的核糖核蛋白颗粒（snRNPs，包括 U1、U2、U4、U5 和 U6）和非 snRNP因子组装而成。 在这 5 个 snRNP中，U2 snRNP在内含子的识别和前体折叠的组装过程中起着重要作用。SF3B1是人体U2 snRNP的核心成分。 #支持序列必须都是全长（80%的覆盖率，第一个和最后一个外显子至少有25个碱基）。 5. flair diffExp输入文件：转录本定量表达矩阵: counts_matrix.tsv。
5.1K22编辑于 2024-04-12 - 来自专栏三代测序-说
全长转录组 | 三代全长转录组分析流程（PacBio & ONT ）-- Bambu
今天我们继续介绍一款使用三代全长转录本数据进行转录本注释和定量的工具 - Bambu。 Bambu 保留了全长和独特的转录本序列，使其在存在非活跃转录本（isoforms) 的情况下能够进行准确的定量。与现有的转录本鉴定方法相比，Bambu 在不损失灵敏性的情况下实现了更高的精度。 ", "SGNex_A549_directRNA_replicate5_run1_chr9_1_1000000.bam", package = "bambu") #读入测序数据 fa.file <- annotations, ”/path/to/annotations.rds” ) #下次读取注释文件 annotations <- readRDS("/path/to/annotations.rds") 5. /bambu/") 五、可视化 通过plotBambu可以对基因/转录本进行可视化（图5）。
2.6K22编辑于 2024-03-13 - 来自专栏三代测序-说
全长转录组 | 三代全长转录组分析流程（PacBio & ONT ）-- IsoQuant
对于新的转录本发现，IsoQuant 使Oxford Nanopore（ONT）数据在有参或无参模式下的假阳性率分别降低了5倍和2.5倍。 一、软件介绍 IsoQuant 是一款基于基因组的长RNA序列（全长RNA）分析软件，适用于长度长三代测序平台，比如PacBio和Oxford Nanopores. ，PacBio可通过isoseq软件获得，具体参考全长转录组 | Iso-Seq 三代测序数据分析流程 (PacBio) ；ONT可通过pychopper软件获得，具体参考全长转录组 | Oxford Nanopore (ONT) 三代全长转录组分析流程 -- 数据质控和预处理。 5.
3K10编辑于 2024-02-22 - 来自专栏三代测序-说
全长转录组 | Oxford Nanopore (ONT) 三代全长转录组分析流程 -- 数据质控和预处理
利用三代测序平台长度长 （long-read）的特性，无需对转录本进行片段化，直接获取某一物种mRNA（或者有polyA尾的lncRNA）5'端到3'端的高质量全长转录组序列信息（图1），可准确识别可变剪接 无需DNA聚合酶、连接酶和dNTPs，测序价格低；3）可不进行PCR扩增，避免二代测序中PCR扩增可能引入的错误或丰度变化；4）RNA/DNA-direct方式建库，可直接读取碱基修饰信息，如甲基化修饰5mC 、6mA等，无须像二代测序需要经过重硫酸盐转化或者免疫沉淀富集实验；5）无GC含量和碱基偏好性，转录本表达定量准确。 原始下机数据fast5 -- Dorado如果是原始的fast5数据，需要通过使用Dorado（或GUPPY）软件将电信号转化为碱基序列。 参考文献：Nanopore三代全长转录组ONT全长转录组测序系列一：初识篇基因结构预测新利器-ONT全长转录组Park, Eddie et al.
9.7K23编辑于 2024-02-05 - 来自专栏三代测序-说
全长转录组 | PacBio 全长转录组测序的时代是否已经来了？ Kinnex full-length RNA Kit测评
但是像细菌16S项目，全长的16S也只有1.5kb，或者转录本长度（单个转录本的平均长度为100bp-5kb）短于文库大小，使用标准Full-length 16S rRNA 或 Iso-Seq方案对单个环化互补 在每个文库中两端添加不同的KINNEX接头，例如cDNA1文库的5'和3'分别添加AB接头，cDNA2文库的DNA分子5'和3'分别添加B'C接头，cDNA3添加C'D接头，cDNA4添加D'E接头。 （图5），这一通量的提升，不仅让丰富的转录组数据更加触手可及，同时也大幅减轻了科研预算的压力(2)。 安诺优达 安诺优达提供的实测数据，混样实测数据中，针对5种不同物种的植物样品，分别进行了一张 Revio SMRT 芯片的Kinnex 不同比例全长RNA混样建库测序（Kinnex-Revio）和5个独立的 六、总结 总体来说，如果有对PacBio Kinnex全长转录组有兴趣的老师同学，可以参照以下来选择测序深度： 现在5M reads大约6000左右/样，10M reads的建库测序9000左右/样。
3K31编辑于 2024-04-02 - 来自专栏生信技能树
全长转录组分析之牛津纳米孔测序介绍
此次专题主要学习和记录一些在分析ONT测序产品如ONT全长转录组，ONT甲基化以及ONT重测序中的所思所想所得。 library prep High yields for large genomes 总结就是： 1.单分子测序：纳米孔每次只通过一个碱基 2.测序读长长：相比于二代测序最常见的150bp，三代ONT全长转录组平均读长为 Flongle MinION和GridION X5测序仪的适配器（adapter，flow cell dongle），仅供一次性使用。 GridlON GridION X5系统的测序部分包含五个 flow cells，这些flow cells可单独使用或协同使用，并通过USB连接到计算机。 GridION X5的出现填补了MinION和PromethION之间的空白。 2.测序基本原理 简单概括：基于纳米孔的单分子实时电信号测序技术。
4K30发布于 2020-02-20 - 来自专栏新智元
全长仅0.3毫米！世界最小计算机问世！
---- 新智元编译 来源：密歇根大学新闻 编辑：克雷格 【新智元导读】最近，密歇根大学制造出了全长只有0.3毫米，超越了IBM公司今年3月展示1x1毫米大小的计算机，成为世界上最小的计算机。 最近，美国密歇根大学制造出了世界上最小的计算机，全长只有0.3毫米，超越了IBM公司今年3月展示1x1毫米大小的计算机。
77800发布于 2018-07-31 - 来自专栏三代测序-说
微生物全长16S | Full-length 16S Analysis -- PacBio Hifi Reads
一、PacBio全长16S rRNA基因测序 PacBio全长16S rRNA基因测序采用27F、1492R引物扩增全长片段（覆盖V1-V9区），采用PacBio SMRT测序平台CCS（Circular 对于长度约为 1542bp 的16S rRNA基因，二代测序只能对部分区域如V4、V3V4、V4V5区进行测序，而PacBio测序可轻松跨越16S rRNA基因的全长序列。 当测序酶读长达到 8Kb时，即可满足一条1.5Kb的16S rRNA基因序列循环矫正5次 （图4），最终获得高质量的16S全长序列。 此流程基于QIIME2，因此其能做的分析，如alpha多样性及beta多样性，物种注释和可视化，HiFi Full-length 16S分析流程均能够实现 （图5）。 demultiplex.barcode组合.hifi_reads.fastq.gz newname2.fastq.gz $ cat rename.txt | while read i j >do >mv $i $j >done 5.
6.3K20编辑于 2024-02-09 - 来自专栏三代测序-说
全长转录组 | Iso-Seq 三代测序数据分析流程 (PacBio) （1）
5’UTR、3’UTR、polyA尾的mRNA全长序列及完整结构信息，从而准确分析有参考基因组物种的可变剪接及融合基因等结构信息，克服无参考基因组物种转录本拼接组装较短、信息不完整的难题 （图1）。 2023年10月初推出的Kinnex全长RNA建库试剂盒，能将5个转录本串联成一条测序read，充分利用其读长长的优势，提高测序通量，配合Revio系统一起使用，使得对全长转录本进行定量变得更为实际。 （5）对全长cDNA进行损伤修复、末端修复、末端加A尾。（6）连接SMRT哑铃型测序接头，最后结合测序引物，绑定DNA聚合酶，形成完整的SMRT-bell测序文库。 clean reads 就已经是转录本的序列了，我们首先看一下clean reads 当中，哪些是全长转录本；哪些不是全长转录本。 全长转录本的示意图，如图8：对于全长转录本而言，其ROI reads 中包含5‘ primer 和 3‘ primer; 而且会出现polyA 为结构；（polyA 针对mRNA和部分lncRNA）。
18.4K21编辑于 2024-01-23 - 来自专栏三代测序-说
全长转录组 | ONT Direct RNA测序 (DRS) 技术原理、数据分析和应用
，富集mRNA后无需打断拼接，直接获得包含5’UTR、3’UTR、polyA尾的mRNA全长序列及完整结构信息，从而准确分析有参考基因组物种可变剪接及融合基因等结构信息，克服无参考基因组物种转录本拼接较短 ONT cDNA-PCR，基于ONT三代测序平台的cDNA-PCR建库测序流程也可以检测全长转录本，而且适用于单细胞全长转录组测序。同样使用模板置换反转录，PCR扩增来制备全长转录本文库（图5）。 Switching Oligos ，TSO)，加入5'端PCR扩增引物，最后通过PCR对全长转录组进行扩增，然后建库测序 (图8，图9）。 当前已知的RNA修饰之中，研究较多的RNA修饰如下（图21）： ① N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine, m6A) ② 5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine, m5C) ③ LKBH5是另一种重要的去甲基化酶，对细胞核中的mRNA进行去甲基化修饰。在细胞系中敲低ALKBH5后，mRNA上m6A修饰水平显著上升。
5.6K22编辑于 2025-07-17 - 来自专栏天意生信俱乐部
三代测序100问（8）| 三代全长转录本该如何鉴定？
全长转录本的分子标记：引物与Poly(A)尾 李老师首先回顾了全长转录组测序的建库基础：“无论是PacBio的Iso-Seq，还是ONT的cDNA-PCR建库流程，其核心都是利用真核生物成熟mRNA特有的 正是这些独特的分子标记——两端的引物序列和末端的poly(A)尾——成为了我们鉴定全长转录本的关键“身份证”。通过识别并利用这些特征，我们才能有效地筛选出完整的、高质量的全长转录本序列。 工具，通过识别序列双端引物以及poly(A)尾序列来鉴定和提取全长转录本。” 李老师着重指出，“在对ONT原始数据进行质控时，务必保留其双端引物序列，否则pychopper将无法识别全长转录本。有些同学在质控阶段就把引物过滤掉了，导致后续无法进行全长鉴定。” 这一点在实际操作中极易被忽视，却直接影响到全长信息的获取。 全长鉴定的意义：为后续分析奠基 “在我们获得真正意义上的全长序列后，就可以放心地进行下一步的转录本参考基因组比对和表达定量了。”
51000编辑于 2025-07-04 - 来自专栏镁客网
西湖大学成功解析新冠病毒受体ACE2的全长结构
解析ACE2全长结构将有助于理解冠状病毒进入靶细胞的结构基础和功能特征，对发现和优化阻断进入细胞的抑制剂有重要作用。 策划&撰写：温暖 日前，西湖大学周强实验室利用冷冻电镜技术成功解析新冠病毒的受体——ACE2（血管紧张素转化酶2）的全长结构，这也是世界上首次解析出ACE2的全长结构，并且相关研究内容已经于今日凌晨在预印版平台 具体来说，西湖大学这次成功解析新冠病毒的受体ACE2的全场结构整个过程如下： 首先研究人员先要获取ACE2蛋白全长蛋白，但问题在于作为膜蛋白的ACE2难以在体外稳定获得。 清华大学全球健康与传染病研究中心主任张琳琦表示：“解析ACE2全长结构，将有助于理解冠状病毒进入靶细胞的结构基础和功能特征，对发现和优化阻断进入细胞的抑制剂有重要作用。”
79120发布于 2020-02-24 - 来自专栏三代测序-说
全长转录组 | Iso-Seq 三代测序数据分析流程 (PacBio) （2） -- pigeon
一、Iso-Seq Collapse 在isoseq cluster完成以后，我们首先需要将高质量全长isoforms回贴到参考基因组上，然后进行isoseq collapse。 加上--do-not-allow-extra-5exons和默认条件下Isoforms合并原则 （图2）。 （图3）： --max-fuzzy-junction INT Ignore mismatches or indels shorter than or equal to N. 5 --max-5p-diff INT Maximum allowed 5' difference if on same exon. 50 --max-3p-diff UHRR.mapped.bam UHRR.flnc.bam UHRR.collapsed.gff 二、Pigeon使用方法 Pigeon是一个PacBio转录工具包，包含了用于将全长转录本isoforms
3.6K11编辑于 2024-01-26 - 来自专栏生信喵实验柴
RNAseq不同测序平台比较
全长转录组（Iso-Seq）是指利用三代单分子实时测序技术（SMRT），无需对RNA 进行打断和拼接，即可直接获得完整的全长转录本。 今天我们就来探讨全长转录组在分析可变 polyA 方面的优势。 并且可以得到从 5’到 3’的完整全长转录本，因此可以直接准确检测到 APA，在分析可变多聚腺苷酸化位点方面具有非常大的优势。 APA 的四种类型 2、可变剪切分析 基于单分子实时测序技术（SMRT）的三代全长转录组，具有读长超长的优势，可以直接获取 mRNA 全长，因此可轻松判断 TSS 和 TTS 的位置、剪接位点的位置 可变剪切类型 注：ES：外显子跳跃、A3SS：3’端可变剪切、A5SS：5’端可变剪切、MEX：外显子选择性跳跃，IR：内含子保留 3、融合基因检测 三代全长转录组技术无需对
4.1K20编辑于 2022-10-25 - 来自专栏量子位
欧洲批准最强粒子对撞机计划，造价210亿欧元，全长100公里，耗资巨大引争议
今天，欧洲核子研究中心（CERN）批准一份新文件：计划在瑞士日内瓦地下隧道中建造一个长达100公里的圆形超级对撞机，以推动高能物理学的前沿研究。
1K30发布于 2020-06-24 - 来自专栏脑机接口
10-20国际标准导联系统
额极中点至鼻根的距离和枕点至枕外粗隆的距离各占此连线全长的10％，其余各点均以此连线全长的20％相隔，如下图所示。因此命名为10-20系统。 注奇数表示大脑左侧，偶数表示大脑右侧。 10-20系统电极位置描述如下： 前后矢状线：从鼻根至枕外粗隆取一连线，在此线上，由前至后标出5个点，依次命名为：额极中点（Fpz）、额中点（Fz）、中央点（Cz）、顶点（Pz）、枕点（Oz）。 额极中点至鼻根的距离和枕点至枕外粗隆的距离各占此连线全长的10％，其余各点均以此连线全长的20％相隔。 T3、T4点与耳前点的距离各占此线全长的10％，其余各点（包括Cz点）均以此连线全长的20％相隔。 侧位：从Fpz点向后通过T3、T4点至枕点分别取左右侧连线，在左右侧连线上由前至后对称地标出左额极（Fp1 ）、右额极（Fp2 ）、左前颞（F7）、右前颞（F8）、左后颞（T5）、右后颞（T6）、左枕（
8.1K01发布于 2019-11-25
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