化合物库的选择及使用 | MCE 直播回放原创

直播间的朋友们，大家晚上好，我是MC产品部的黄仙玉，那么今天非常开心能够在这边跟大家去进行关于话务库的交流分享，那么咱们今天的一个分享内容主要分为三个板块，那么咱们现在就开始吧。新药开发是一个极其复杂且漫长的过程，通常需要耗费数年甚至十几年的一个时间以及巨额的资金，那么整个新药开发的流程可以清晰的分为五个主要阶段。嗯，首先是药物发现阶段，那么这也是我们源头创新的开始。我们药化科学家们通过各种技术手段去识别验证与疾病相关的这个非常关键的分子靶点，然后通过从海量的化合物中去进行筛选，或者直接基于结构去设计出能够与靶点结合的苗头化合物，那么得到苗头化合物以后，我们就需要对它去进行嗯结构优化，得到先导化物。接下来进入整个临床前研究的一个阶段。那么在临床前研究，我们通常是在动物模型上进行研究，并且还会研究这个开发药物的生产工艺，以及评估它在呃动物中的一个全面的独理学实验，还有药带动力学实验，确保这个药物在进入人体实验前，它是非常相对比较安全的。

再接着是关键的一个临床实验阶段，那么在临床实验阶段，我们一般就是通过呃，在人体中去评估药物的一个安全性，以及探索最佳的一个剂量，根据我们的临床实验的一系列的数据，然后再去向这个药品监管机构提交我们的上市申请。最后呢，药物上市也并非是万事大吉了，我们还需要去进入这个上市后的监测阶段，也就是四期临床，通过监测药物在更广泛人群中的一个长期表现，然后通过去收集这些不良反应的报告，然后根据实际情况，可能会对我们的药物进行再评价，必要的时候可能还会甚至去更新我们的一个说明书，甚至采取一些风险控制的一个措施。

那么在药物开发阶段，有一些常用的一个新药物开发策略，包括我们的高通量药物筛选，那么基于结构的一个药物开发，CDD, 通过虚拟筛选或者以及这个AI筛选去预测药物的活性，然后以及FBDD基于片段的药物筛选，以及呃和近些年比较新兴的一个二筛选技术，那么在其中来说，第二筛选它是一个呃使用的最常用的一个筛选方式之一。这项技术呢，形成于我们的一个20世纪80年代，最开始是需要发现的人员通过将大量的一个化合物去放在96孔板中。那么通过分子水平或者细胞水平的一个实验，嗯，科学家通过对大量的药物同时去进行整个活性测定，从而筛选出活性最好的苗头化合物，那么高质量药物筛选的一个特点就是说我们在非常微量的体系中就可以快速，灵敏且高效的去进行整个实验过程。在整个实验过程中，我们实验。

案前，呃需要准备的这个关键的一个实验，呃东西就是化物库，它也就是说通过化合物的不同的特点去做成了一个结合，那么这些年随着这个高通量药物筛选的技术的不断发展与完善，那么越来越多的高校老师也开始使用我们高通量药物筛选去做进行自己的一个课题研究，那么这一点从这个他们麦上去搜索相应的一个文献的一个呃趋势也能够看到有非常多高通量药物筛选的相关文献。那么目前我们的化物库其实可以被划分成四类，第一类是不是被用的最多的活性化物库，那么这个活性库目前我们这个所有的分子大概是35000多个。

呃，我们所有的分子都是经过会议或者文献以及专利报道过的，对某个靶点或者说在某一个细胞模型中发挥具体的一个活性作用，我们对这些活性信息都有去进行整理，收入可以。如果老师不知道选什么库，刚开始接触高通量腰筛的话，我们都会先推荐老师们先去看一下我们的回线库系列，这个系列目前我们有的旗下还有240多个库，它的一个呃，类别是非常多的，呃，无论您是做这个表情筛选，还是机制研究，蓝牙信用等等，都可以选择我们的火性库系列。那么第二个系列是类药多样性库，这类库的一个特点就是我们所有的分子都是符合类药物原则的，具备类药性，并且呢，它的一个结构非常新颖，基本上是没有任何文献报道过的，那么如果您是想做新药开发，或者说对结构的新颖性有着比较高要求的老师。

就比较适合选择我们的内样多样性库，那么第三类是呃，FBDD的一个基于片段库，那么片段库的话，它。它主要是适用于基于片段的药物开发，它的一个优势就是说针对一些比较新颖的或者难以成药的靶点，它实验成本比较低，并且呢，它分子量小，无效集团少，我们在筛选的过程中，我们就可以通过先筛选出和靶标蛋白有着比较微微弱结合的一些小片段，再去对它去进行相应的一个结构优化，从而得到一个先导化物。第4类的话就是DELL筛选DNA编码库，它也是这些年比较新兴的技术，跟其他的库不太一样。第二筛选的第一个不同点就是他把化合物的一个数量级，从我们前面所提到三万五八万、2万，直接提升到了一个亿的一个级别，它的数量级是有着呃，非常大的一个跳跃的。

那么第二个就是不太一样的，就是它每个分子它都是呃。通过我们的一个分子器块，我们每个分子器块它都会有一段已知的唯一的一个DNA序列去进行标记，那么我们把这些呃分子器块通过这个组合化学的一个模式去进行嗯，不同的一个反应，从而得到我们上亿的一个分子，那么这是数十亿的一个分子，它都是放在一个一个管子里去进行筛选的，所以说相较于其他的库而言，就第二筛选它的通量肯定是最高的。那么我们通过比如说通过金融质谱筛选出来，然后通过解码，就可以快速的得到和这个靶点有着强结合的一个苗条苗苗头化合物的一个具体的一个结构信息。那么接下来再跟大家简单介绍一下我们的活性库系列，因为刚刚也有提到，我们所有的分子，我们都就是都是通过文献会议或者专利收入的，我们的呃收入的速度也非常的快，这是我们的一个优势，因此呢，我们每年都会有呃非常大的一个数量的一个增长，每年新增的一个产品大概是4000多个，那么并且我们在收入的时候，其实像一像有像一篇专利，它通常都会有呃几十个，十多个化合物，我们我们MCE的话都是选了其中活性最好的一个化物去进行开发，因此呢，它的一个细胞活性通常都是在纳摩尔到非摩尔之间，细胞就是它的活性是非常好的。

另外呢，我们在进行收入的时候，我们会清晰的去记录这些分子的靶点啊，信号通路啊，以及具体的一个活性信息，同时呢，我们还会整理很多不同的一个权威数据库，包括会整理一些天然产物的来源，这些化合物的一个临床上市状态信息等等。那么MCE一直都是呃追求，希望给老师们提供覆盖更广的化合物，然后提供更详细的话物信息供老师们使用。目前整个库的一个呃靶点覆盖大概是1500多种靶点基本上覆盖了呃。

所有的热门靶点，以及大部分嗯，比较小众的一些靶点，那么我们基于这些火星信息，靶点信息，我们都可以去进行非常多小库的一个构建。然后这边展示的是我们目前最大的一个生物活性库，可以看到我们这个HHY-1001，然后这个库是一个溶液包装的，然后我们在此基础上我们还整理了一个心意之活性库，然后把这个HY-L01和我们的心义之活性库然后组合到一起，形成了一个max的一个包装，目前涵盖的数量是2万嗯，7000多个溶液的一个产品，那么除了溶液产品以外，我们还有一个plus的版本，也就是说在呃，生物活性总库的基础上，我们又增加了一些。

以粉末形式提供的，包括它可能会存在的一些情况是，比如说像溶解度差，溶液稳定性差，或者说货值非常高的产品，我们都是以粉末形式去提供，那么这一页的总库的一个产品比较适合，呃，大型筛选的一个老师，或者说他要去建一个筛选平台的话，老师们都可以去考虑我们的活性总库，那么此外呢，对于时间、人力还有预算有限的老师，我们建议可以选择一些比较小的库去进行筛选，呃，比如说几百个分子，几千个分子都是可以的，那我们在选择的时候，我们可以先去明确自己的实验思路，然后这目前这一页展示的是我们嗯MCE或新库的一个主要分类，分为六类，那么我们比如说我们如果是可以去使用老药新用的一个概念，选择已经上市或者已经进入临床期的一个产品，进行原适应症以外的研究，那么这一类产品的一个特点就是说。

嗯，因为他已经上市或者进入临床了，所以有很多的一个药物前期研究的一个信息可以供我们参考，我们借助这些信息，我们就可以去明显的缩短我们的研发周期，并且去降低研发成本，另外就是它的一个安全性会比较有保障，那么第二个系列是天然产物系列，像如果是对天然产物或者说。对中药研究比较多的老师就可以选择，因为中天然产物，它的一个结构多样性比较呃复杂，所以说活性也比较好，另外我们还可以通过我们的一个呃研究的一些靶点类型，比如说常见的呃激酶PPCR绿色通道。以及比较热门的一个信号通路，比如说嗯，F卡BF通路等等，那么这些热门的呃通路我们都是有去构建相应的一个化物库，都是文献报道和这个靶点比较，呃对这个靶点有调控作用的。

那么另一种思路就是我们也可以通过，呃，这个疾病类型，就是说比如说我是做肿瘤的，我就去。选择我们的抗肿瘤化物，还有什么抗病毒、抗纤维化、抗衰老等等。呃，那么除了这些以外呢，还有一些老师，他可能会对产品的某些特点比较有需有要求，比如说我们有一些比较特色的，像食品添加剂库，还有可以透过水道屏障的话库，化妆品成分库等等，嗯，以及有一些老师他是根据结构去进行相应的研究，比如说大环类，然后呃，核苷类等等。最后一个系列是呃，代谢相关的呃产品，那么这个系列的产品我们收入的库基本上都是要么就是人类原性代谢物，小鼠代谢物，还有根据一些代谢通过去整理的，比如说像糖代谢啊，脂代谢，那么适用于代谢疾病，或者说代谢相关机制研究的一个老师，还有就是适合就是代谢组学中的一个代谢不鉴定。

那么呃，除了预制库以外，MC还能够提供我们相应的一个定制库，可以通过老师们的一个研究目的，研究需求，去给老师们去进行推荐定制，嗯，老师们可以自己去选择文化入库的一个种类，数量，然后包装以及排版等等。再然后跟大家介绍一下我们目前话务库的一些常规参数，这边可以看到这是我们的一些包装，那么目前我们能提供的呃，比较嗯，常用的包装就是96孔洞层管，还有96孔板，384孔板，那么在这个排布上的话，我们默认是呃，第一列和最后一列是空的，如果是在麦斯的话，我们就是前两列和最后两列是不放任何产品。那么有一些老师他可能对这个排版有什么特殊需求，比如说他会告诉我们中间哪一个孔，或者说哪一列哪一行他要需要放置产品需要空着都可以去告知的，都可以告知我们，然后去进行定制。那么关于产品包装的一个问题，就是我们大部分产品都是提供10mmol的一个包装，如果这个产品它10毫末不容的话，我们就会提供2号木耳，但当然这个清单中也有一些产品，它可能会。

就比如说像一些聚合物，混合物这种情况的话，它的分子量就没有办法去确定，这种情况我们就提供3mg苗生。关于产品这个溶溶液溶剂的问题的话，我们大部分产品都是提供DSO，那么也是同样是DMSO不溶的情况下，我们才会提供水和乙醇制作为用们那个溶剂，那么拿到手建议大家保存的一个时间，就是如果是粉末状产品的话，是敷20°三年，4°两年，溶液部分溶液的产品的话是-80°两年，-20°一年，那么我们都是会，呃，推荐老师们放在一个-80°。

的一个冰箱里面去进行保存。那么除了这些板子以外，我们MC还能够提供E扣，呃，声波一页相应的一个板子，嗯。然后并且我们就如果是不同溶剂或者不同浓度的一个情况下的话，我们就会放在不同的板子上，然后便于老师们去操作，如果老师们有任何就是呃对容积或者说浓度有什么需求的话，我们都是可以定制的。好，接下来我们再跟大家去，呃，介绍完我们画物库的一些相关信息，相信大家对怎么去选择呃文库已经有了一些了解，接下来我们再来分享一下筛选思路，那么目前根据这个筛选思路策略可以分为两类，第一类是基于靶点的一个药物筛选，那么这这个就是要我们课题组前期他已经确认了某个靶点在这个疾病中发挥着非常关键的一个调控作用，那么这类筛选的一个特点就是说我们筛选出的苗头化合物，我们的作用知实是非常明确的，就是通过这个靶点去发挥的，后期呢，我们去做这个构效关系的一个分析，以及结构改造的工作，会相对比较简单一点，那么当我们确认了靶点以后，我们有两个呃思路，一个是直接去进行实地筛选。

如果是直接去进行实体筛选的话，我们会优先推荐大家先去根据这个靶点的活性筛选，像一些经典的靶点，它都有着非常成熟的筛选方法，比如说激酶，我们就可以通过。根据他的ATP的消耗量或者ATP的生成量。去检测，都是有非常成熟的试剂盒，像离子通道检测的话，就会用到我们的这个，呃，自动膜片前啊等等，那么如果你的靶点非常新颖，或者说非常难检测相应的活性的话，我们就可以考虑基于亲和力去进行筛选，那么这个时候就会用到常用的这个呃，氢质谱，或者说借助于一些分子互作手段，包括这个SBR，然后微量热溶动生物膜干涉啊等等这些手段去直接测定我们的分子和靶点之间的一个亲和力，那么我们通过得到具体的一个亲和力指标KT值，我们就可以筛选得到K的分子，然后再去做后续的一个细胞或者动物模型的一个活性的一个验证。

那么如果我们是，呃，基于靶点筛选的话，还有一种思路，就是说如果我们老是觉得直接做虚实地筛选的话，工作量太大了，那么我们就可以在实际筛选前，我们先去做一下虚拟筛选，我们通过计算机软件呢去预测话物靶点的一个集合，像MC也能够提供相应的一个虚拟筛选技术，我们使用的话就是用的是薛定2软件，我们通过三轮不同精度的一个筛选，那么最后会给到老师们200个话，我老师们就可以从这200个里面再继续去选，然后接着去重复去做，呃，不是叫重复，就接着去做事实验的一个验证，比如说我们就直接去做SSPR，然后做完SSPR以后，我们再在细胞中去进行一个功能的实验，那么需要说明的是，这个虚拟筛选，它没有办法直接去筛选抑制剂或者机动剂，同时呢，这种方法也是具备一定的假样性和假应性的。因为这个计算机模拟。

你毕竟只是一个预测的一个手段，那么第二类筛选就是基于表情的筛选，就是这种就是适用于我们靶点未知，或者说我们靶蛋白非常难分离分化，以及就是或者说我们所检测的一个表型只存在于细胞，或者说在小型生物体水平中，比如说我们要检测这个，呃，干细胞分化，我们就没有办法基于分子水平去做。另外呢，我们这个细胞表现，呃，细胞水平实验呢，我们也可以从细胞整体的一个水平去看这个化合物对细胞的一个调控，毒性，以及在细胞中的一个代谢情况。

情况，那么这一种筛选策略可以被分为两个类别，第一个水平是细胞水平，另外一种就是用的相对较少一点的小型生物体水平，主要聚焦在这个线虫、果蝇以及斑马鱼这三种模式动物中。那么这两种相比呢，细胞表型它的一个生理相关性比较好，但是呢，它呃是说错了，生理相关性比较低，但是通量更高，相较而言，小型生物体的话，它直接在呃呃生物体中去进行实验，它的一个生理相关性会更高，那么预测体内疗效的一个准确性肯定是相对更好一点的，并且还可以去初步的评估这个药物在生物体中的一个药代动力学。嗯，基于表型的药物筛选其实有点类似于神农尝百草，就是说我们先基于药效筛选出来，然后我再去研究它到底是通过什么机制去发挥作用的。优点就是说我们呃，筛选出来在生物体中的一个药效是非常明确的。缺点就是。

后续的一个机制研究，它是相对比较复杂的，并且呢，就是因为你不知道它的一个机制，那你做构架关系分析，结构优化那一步的话也比较复杂。接下来我们在一起简单了解一下，就是各种呃，我们筛选方法首先是斑马鱼，像斑马鱼的它的一个特点就是呃，它幼鱼是非透明的，并且它可以去测量这个整个心脏功能，那么基于这些特点，斑马鱼就可以去被用作这个心血管药物的开发，那么。同时呢，我们也可以根据斑马鱼的一个运动行为，还有他的一些电生理，还有他的一个睡眠时间等等，去筛选这个呃，神经相关保护类的一个药物，呃，另外斑马云也是我们的一个呃，检测器官独立学的一个经典模式动物，包括我们可以通过检测这个性功能去看它的一个心脏毒性，然后通过这个病理切片，病理染色去看它的一个肝毒性，还有肾毒性啊等等。

第二个小型生物体是呃果蝇，那么果蝇呢？它因为这个体型小，寿命短，繁殖快，并且它的一个呃基因组和人类是非常高度相似的，有着比较精密的一个神经调控系统，那么果蝇在药物筛选中发挥什么作用呢？第一个就是。嗯，在抗癌药物筛选中，可以直接在博云身上去注射肿瘤细胞，构建它的一个呃肿瘤的一个相关的模型，然后通过直接呃检测这个肿瘤的大小去筛选的，还有它的一个果蝇的一个存活率去筛选。

相关的抗癌药物，然后在神经特定性疾病药物筛选中，我们也是一个非常经典的一个模型，可以直接用转基因。就用基因表达操作去表达这个人类的一个致病蛋白，那么可也是通过他这个存活率，攀爬实验，以及观察这个神经元的一个情况，去筛选神经保护性药物。另外这个果蝇因为就是先天免疫系统，和我们的人类有着非常高的一个相似性，并且呢，没有适应性免疫，所以说可以通过这个，嗯，直接去。检测这个病原体的拷贝数，然后筛选抗菌肽抑制剂，或者用作研究宿主与病原体相互作用。另外就是呃，我们可以去给果蝇去喂食高脂呃高糖的一个食物，去诱导肥胖以及糖尿病的一个模型。然后在这个检测过程中通常会用到的一些方法，包括去检测水淋巴中的葡萄糖，水淋巴其实就是呃，类似于人类的一个呃水液。

直接去检测它的一个葡萄糖，海藻糖，还有甘油三脂的水平，然后从而还呃以及会用到一些染色的病理染色的一个方法，去筛选降糖降脂的一个药物。呃，最后一种小型生物体是线虫，那么线虫它也是首个去完成完整基因组测序的一个多细胞生物，整体的体积是也是非常体型也是非常小的，呃，那么在线虫眼就线虫的使用中的用的最多的话，就是我们的衰老药物的一个筛选，通过直接去观察药物对线虫的一个生长繁殖。还有他的一个运动能力等，去评估整个药物的一个生物活性。那么线虫也是，呃，一个比较经典的这个ad模型的一个模型动物，然后包括分为A贝塔模型和汤模型，通过观察这个线虫的运动能力，还有他的一个整体活性去进行筛选，那么在系统中也是可以直接用荧光标记，然后看到这个神经元的一个情况。

第三个方向就是免疫方向，那么在性能中，我们可以通过给他去喂食这个病原菌的一个方法去让它呃产生感染，然后通过q p star去检测抗菌肽基因，进行抗病，呃进行相应的一个药物筛选，然后在代谢疾病药物筛选中呢，它也是跟前面说的其实是类似的，也是通过一些呃比染色的方法，包括呃尼罗红染色啊等等去分析这个脂脂肪低的一个大小和数量。好，了解完我们的小型生物体里的呃药物筛选以后，我们接下来接下来再看了解一下细胞相关的，那么在细胞水平中去做药物筛选，最常见的就是抗肿瘤药物的一个筛选，嗯，我们可以直接去使用一些方法，包括CCK 8mt ta ATP检测，直接去检测呃化物对这个肿瘤呃细胞细胞活力的一个影响，那么这个也是呃文献中是出现的最多的。

除了细胞活力检测以外呢，我们也可以使用这个流失以及高高内含成像直接去检测药物。它是否能够将细胞组织在G17S4期和G2期研究相关的一个细胞周期的一个机制，另外还有一种用的会比较少，可能会在这个复筛的候用到，就是比如说我们一初筛筛到十个话，我们在复筛的时候，我们可以直接通过划痕实验，春季不要小试实验，然后去评估药物对这个呃肿瘤细胞转移能力的一个抑制效果，从而进一步的筛选这个呃活性的化合物。在免疫领域相关的话啊，目前用的最多的是伊拉A实验，直接去检测细胞液上清中的一个炎症因子，当然也有实验，也有文献会报道，通过荧光素酶报告基因，直接去检测这个呃化物对F卡巴B转录因子的一个影呃影响，然后筛选抗炎药物。第二种就是呃直接去检测化物库对免疫细胞骨化的一个影响，比如T细胞，B细胞，我们又可以通过一些呃标志物，比如T细胞的标志物就是活化标志物，就是CD69 CD20去通过这个标志物的检测，或者直接去观察巨噬细胞的一个极化状态。

另外还有一种就是呃吞噬作用的检测，我们可以直接使用荧光标记的一个细菌或者微球，通过高内涵成像或者流逝的一个方式方式去检测巨噬细胞或者中心粒细胞的一个吞噬能力，这是文献中会出现到的一些呃指标。那么在这边再跟大家分享一下荧光素酶报告基因实验，那么整个实验它的一个原理就是利用着我们的荧光素酶会跟底物去发生化学发光的一个特性，那么基于这个原理，我们可以将目标基因的转路调控元件去克隆在荧光素萤火虫荧光素酶基因的上下游，从而构建相应的一个智力，那么智力构建好我们就成就转染细胞，转染细胞以后呢，我们就使用化合物库中的化合物去加到这个，呃，细胞培养基里面，以及如果是还有一些其他的处理，包括像细胞造膜啊之类的，然后处理以后我们再去。

进行细胞裂解，我们再去加入相应的一个底物检测检，通过检测这个荧光素酶的一个活性，来判断我们的一个药物对这个呃转调控元件的一个影响。那么荧光素酶报告经因实验也是文献中药膳用的非常多的，它使用的一些应用方向，包括我们可以直接在细胞中检测它对某一个信号通过的一个呃影响，还有就是和受体靶向药物的筛选，GPCR靶脸的药物筛选，以及抗病毒药物的一个筛选，都是使用的非常多的。

那么介绍完一一些常见的一个筛选指标，我们再来跟大家分享一下我们的药物筛选是哪一些流程呢？呃，首先的话，我们在筛选前，我们需要去进行大量的一个门线调研，然后去确认我们的一个筛选方法和水筛选方法，我们是通过分子水平的方法还是细胞水平的方法，呃，去进行那么出无论你是使用什么方法，什么模型，其实它的一个呃，整体的筛选流程都是一致的，都是你要先去进行初筛，那么在初筛的时候，我们一般建议老师们都去设置一个浓度，因为化合物浓度越多的话，那你的一个工作量是越复杂的，那么在这边就可以去设置三个副孔，然后取平均值出筛，浓度越高的话，那么你筛选出来的相对活性的化合物数量就越多，但是假阳性的概率也越大。那么如果你出筛，第一次出筛出来化合物数。

这非常多的话，我们也可以适当的再降低一些浓度，把它的范围进一步缩小，那么出差以后呢，我们就需要去进行数据分析，然后这边它的一个阳性化合物的一个。它的一个活性化合物的一个，呃，筛选标准其实是根据大家的一个实验目的，实验方法而定的，我们可以直接选取与活性最好的前10个，前20个，或者说前5%，我们也可以通过跟阳性化合物或者阴性化合物相比，我们的一个对靶点的激动激激动的一个，呃。

记住了。机动作用或者抑制作用去去选取，那么我们出差完以后呢，我们就可以呃把这些活性最好的，比如说我选三个化合物去设置不同的浓度梯度，进行同一模型的筛选，然后得到相应的一个IC50或者1C50值，那么在这一步我们就可以排除掉呃，假阳性的以及没有浓浓度依赖性关系的一个化合物。然后再去进行，就是通过换更换一下实验方法，或者更换其他的一个模型，比如说我们前面用了细胞模型，我在先到化合物确认这一块，我就可以去用小鼠模型去进行进一步的一个确认。那么得到新的化合物，呃，得到这个苗头化合物以后呢，因为它可能还存在一些问题，比如说可能会有毒性，口服适中，利用度比较差等等，那么这个时候我们就需要借助到药物化学的方法，对它去进行一定的结构改造，以此呢得到我们的先导化合物。

再去进行临床前研究，嗯，就像我们最开始说的，去做一些要带动力学啊，以及在动物上去验证它的安全性，独立性啊，这些东这些工作。那么我们在文库收到的时候，呃，有什么使用的注意事项呢？第一步就是收到以后，我们肯定是去清点这个产品数量，然后是否存在漏液，产品缺失啊等等一些问题，需要注意的就是我们收到产品以后，一定要离心以后再开盖，因为我们的产品在运输过程中，它是非常的颠簸的，它可能液体可能就从底部到了我们的这个盖子上，如果你不离心直接开盖的话，就可能造成一定的损耗。那么第二点就是如果老师们购买的体积比较大，比如说我买了50卫生的情况下，我们可以建议老师们去进行适当的分装，那么注意分装以后，分装的时候它的一个体积不宜分装的过小，如果你分装，比如说三微升，五微升。

那么它它的一个胰液损耗，以及他在板子底部会有一个吸附，就是有一个实体机就会导，就会导，导致这个老师们的一个损耗会比较大，我们建议老师们分装的话，至少每一份要大于这个10μl。那么分装以好以好以后，我们就需要去进行产品的储存，我们建议老师们，因为大部分呃文库产品都是一个呃溶液产品，我们建议大家会放到-80°冰箱去进行储存，嗯，我们在这个分装过程中，我们分装的一个。呃，体积其实也要考虑我们冰箱的一个溶剂，如果我们冰箱很挤的话，建议老师们就是分装的话不要分太多。在使用前的话，我们需要提前一晚，或者说当天把我们的一个话库放在4°冰箱，或者说在冰上去进行解冻，那么全部解掉冻以后，我们再去进行离心进行操作，那么需要提醒大家的是，因为前面有说到我们的溶剂主要是。

DMSO, 那么也有一些是水溶的少部分，如果不溶的情况下，那么水溶的这一部分的话，它可能就是大家如果在做细胞实验的话，我们建议大家可以先用这个培养基把这个水溶产品稀释到中浓度，比如说我稀释1000倍，然后稀释成这个10μmol的。你的呃，细胞培养基中，我们再拿这个00222μmol的滤膜去进行过滤，来避免这个细胞染菌的一个问题，切勿高高温高压灭菌，那么像DSSO的话就不需要这样，因为DSO它本身就有一定的一个抑菌作用。好，大概的了解了一下我们的药物筛选过程，接下来我们再跟大家分享一下案例分析。第一个案例，它是关于这个骨关节炎的，嗯，也是就是呃。

骨关节炎它是一种非常常见的呃，退行性关节疾病，它的一个特征呢，包括软骨破坏，骨质生成，软骨下骨重复。呃，以及滑膜炎，那么这篇文章中作者就关注到了有一个受体oscr，这个受体它可以跟胶原蛋白二通结合，然后结合了以后就促进软骨细胞中的一个炎症以及分解代谢反应，那么作者前期花了大片大就是大量的实验去。呃，研究表明这个。呃OA软骨小鼠中的它呃OA软骨就是呃骨关节炎模型小鼠中它这它的这个OCR。啊，蛋白表达显著升高，而把这个oscr基因消除以后，小鼠的一个骨关节炎的一个症状发生了明发生了一个明显的缓解，那么在筛选这一步，老师的一个目的，高端量筛选，目的就是筛选能够竞争性抑制o soscr和胶原蛋白来二去结合的一个化合物，想筛选一个拮抗剂，在这1。

这篇文章中老师选择的是天然产物库，再加我们的一个FDA上市药库，一共是3000多个产品，然后使用了一日拉A实验，提前一天把胶原蛋白2固定在了我们的96孔板中，第二天加入这个o scr蛋白以及我们的呃，不同的化合物，那么在出差过程中，这个老师文章中写到的出浓度是0.1纳摩尔到50μmol，但是因为没有仔细标注，然后我们也不太清楚是每个化合物不一样的浓度，还是说选了几个浓度梯度去进行操作，那么加入了蛋白和这个化合物库以后，富裕了一个小时，就通加入它的相应的二抗显测试剂等等去检测它的一个结合情况，整个初筛每个孔应该是重复了五次，初筛结果显示一共是165个化合物能够去抑制o scr和胶原蛋白2的一个结合。那么在初筛。

结果因为数量比较多，有100多个，所以作者通过查阅了相应的一个文献，发现其中有124个已经有了软骨细胞已或者说骨关节炎相关报道，然后把这个124个排除了以后，那么这个时候它的一个会转分子的数量就变成了41个。在复赛阶段的话，作者是选取了41个中作用最强的前三个分子进行后续的一个深度研究，它复赛过程中就是跟咱们刚刚说的一样啊，就是通过设置不同的浓度梯度，确认了这三个产品都有浓度依赖性关系，并且根据它的一个IC10 ic50 ic90的一个值，选取了药效最好的一个化合物v sa, 那么。

到这一步的话，它的一个化合物的一个呃确认就是已经筛选出了活性最好的化合物，它后续就是做了大量的接触研究，包括呃对这个呃oscr。它的一个小鼠去进行na测序分析，然后通过na测序分析锁定了两个通路，因VCR阿尔法和类十二烷氨酸通路。然后在这个。呃，机制研究中用的到了一些方法，包括像免疫荧光PCRWB，还有一些染色，那么后面也是在这个呃，小鼠模型中去得给药口服AA，然后去验证它的一个呃药效。第2个筛选案例。是美国费城的一个研究所去发表的，他的一个呃分也是有20多分。这篇文章他发表的一个呃方向是肿瘤相关的研究。

P53是一个非常常见的一个抑癌基因，但是非常容易突变，那么在实验过程中呢，作者特别关注了在非洲后裔个体中他的一个P53的一个变异体YL07，并且研究了YL07H在肿瘤中的一个作用，那么前期也是花了非常大的一个篇幅去。呃，做了非常多的一个实验，那么在高通量药物筛选这一部分，作者就是希望能够筛选，嗯，抗贝尔力切是基因突变所导致的结质肠癌，结质肠癌细胞活力的一个化合物，通过这个高度量筛选研究。通过这个YLGH去探究P53EI作用的一个关键靶基因。那么在这篇实验这个案例中呢？作者使用的是我们的MCE的抗肿瘤化物库。出差过程中，作者选择了这个HCT116，这个是一个人结直肠癌细胞，然后通过基因编辑技术，然后让这个人直肠癌细胞中Y107H发生了P53突变，成了这个Y107。

然后其中A11和C2是两个突变沸点，那么在这个细胞模型中呢，作者把这个2000个化合物，它初浓度就是每一个化合物设置了四个浓度去做，所以工作量是非常大的，那么把这个化合物进行给药三个，三天以后呢，作者就是通过这个ATP的一个检测试剂盒去检测化物对这个人结直肠癌细胞HCT116细胞活力的一个影响，那么筛选出了12个能够抑制。呃，Y107突变的一个呃，人结质障癌细胞活力的一个化合物，那么在复筛阶段，作者是选取了其中有两个管酰酶抑制剂，一个是CB839，另外一个是BPBPTES去进行复筛，通过设置了不同的浓度梯度，然后这边右边是相应的一个实验结果，然后去探究这个呃，这两个化合物对HCT116以及这个Y167H突变细胞性的一个细胞活力的一个影响，在复赛阶段的话，作者是有意的去更换了它的一个细胞活力的一个检测方法，阿尔玛兰法去，呃，也。

有意的去更换了这个实验方法，为了就是消除假阳性的一个可能。后续呢，作者去做了一些动物模型的验证，他用了这个免疫缺陷性小鼠NSG小鼠，然后通过皮下比，皮下注射这个呃，肿瘤细胞，然后去观察这个药物对。通常呃去观察这个药物CB839对这个呃两个细胞的影响，可以看到这边是给了药以后呃，VNGH.注射Y107的这个细胞，它的一个肿瘤明肿瘤就是明显减小了，说明了我们这个斑CB839能够显著的去减缓了YL07突变消除中的一个肿瘤的一个生长，那么在后续的一个机制研究中，作者用的一些方法也是大家比较熟的，呃，包括民主化，呃，PCR, 还有它的WB等等，那么去呃进行，然后结果他的一个结果显示CB839的。

哦，嗯。结果显示，P53的一个EI作用可能和ATF4和PAD24相关。