细胞样本处理避坑指南：取样、灌注、固定三大关键步骤解析原创

细胞样本处理哪一步容易让实验翻车？首先是样本处理环节，样本自身的状态对实验结果的影响重要性是不言而喻的。试想一下，如果样本本身就有问题，那么我们的实验步骤再精细也很难得到理想的结果。这张图展示的是一个培养时间比较久，生长状态不佳的细胞样本，它进行免疫荧光实验的一个结果。在图中我们可以看到明显的支原体污染和多核细胞，那出现这种情况呢？我们首先在细胞培养的过程中是需要注意培养条件的。另外就是我们在取样前可以先镜检观察一下细胞的状态，选择生长状态无异常的细胞样本来进行实验。看完了细胞样本，我们再来看一看组织样本可能出现的问题。这张结果图展示的是一张发生梗死的小鼠脑组织样本，在染色的时候，我们能明显的看到在正常区域有很清晰的信号形态，而在右边的梗死区则有很高的背景。

干扰，并且也看不到很明显的信号形态，这是因为梗死区它是有组织细胞的坏死发生的，就导致这片区域存在细胞碎片，这些干扰因素造成这些背景信号。因此在进行组化和荧光实验的时候，我们取样要尽量避开坏死和内出血的组织。而关于样本干扰实验结果的情况呢，还有一种比较常见的现象就是样本它的自发荧光。我们来看一下这组图，左边是样本未加抗体直接在镜下观察的结果，而右边是加入抗体进行实验之后的一个信号结果。我们可以看到在左边未加抗体的情况下，样本自身就有星星点点的荧光信号，那在存在这种样本自荧光的情况下，在对右边的实验结果进行判读，我们其实是没有办法去判定信号的特异性的，所以在遇到这种情况的时候，我们要先去排除样本的自荧光，再来进行这个实验，才能够确保咱们实验结果的一个可靠性。那自荧光的排除。

哪些方法呢？我们其实可以使用组织自发荧光催灭剂来处理样本，那这个是已经很成熟的有商品化的一个产品了，这些相关的产品在我们的优宁维商城都可以检索到。另外我们还可以通过先确定这个样本自荧光的一个检测通道，在选择二抗的时候避开它，选择不同通道的荧光二抗来进行实验。那讲完了样本自身的干扰的情况，接下来我们可以来看一看在取样环节还有哪些注意事项。首先是灌注，它最主要的作用其实是可以避免样本中血液对于后续实验的影响，尤其是对于血管很丰富的组织，我们都会建议先进行灌注，再做组织取样，那这一组图展示的就是未进行灌注的样本，它来直接做免疫荧光实验的结果，可以看到这个背景的干扰是非常严重的，那同样的，其实在组化实验当中不做灌注的话，也会出现类似的情况，大家看这一组对比结果，左边是小鼠海马组织直接进行取样的，是没有进行灌注的。

而右边是进行了灌注之后再取样的HC的结果，我们可以看到经过灌注之后，这个背景的信号是有非常明显的减弱的，因此对于组织样本，尤其是血管非常丰富的组织，我们会建议先进行灌注处理，再进行取样。关注收藏不迷路，持续更新科研干货小优大学堂超20种实验技术，超18种研究应用方案，让你科研不再难。