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【辰辉创聚生物】蛋白质组学：裂解化学、机械破碎与分馏策略在蛋白提取中的分子机制解析
蛋白提取的本质并非单纯的物理破碎，而是在细胞结构崩解的瞬间，通过化学与热力学手段将蛋白质组的生化状态加以保存。 一、物理屏障的突破：机械破碎与能量控制对于培养细胞等结构相对脆弱的样本，温和的化学裂解即可实现有效提取。 然而，面对具有坚硬细胞壁或致密组织结构的样本（如植物组织、真菌或实体瘤），单一的化学手段往往难以奏效，机械破碎成为不可或缺的步骤。 二、裂解缓冲液的化学设计逻辑当物理屏障被破坏后，裂解缓冲液的组成决定了蛋白质的溶解行为。裂解液并非通用配方，其设计必须围绕实验目标展开。在全蛋白质组分析中，常采用含有尿素或硫脲等强离液剂的体系。 对于研究信号转导或翻译后修饰的样本，裂解缓冲液还必须承担状态冻结的功能。通过引入特异性的磷酸酶或去乙酰化酶抑制剂，可以防止裂解后发生的体外修饰变化，从而确保检测结果反映真实的细胞状态。
10310编辑于 2026-03-09- 来自专栏测试GO材料测试
单细胞凝胶电泳实验（彗星实验）的应用与试验基本步骤
彗星实验的作用检测DNA损伤：评估细胞在各种条件下（如化学物质、辐射、环境污染物等）的DNA损伤程度研究DNA修复机制：通过时间序列实验观察DNA损伤后的修复过程评估遗传毒性：用于药物开发、化妆品安全评估等领域的遗传毒性测试环境监测 裂解去除盖玻片，将载玻片浸入裂解液（含2.5M NaCl, 100mM EDTA, 10mM Tris, 1% Triton X-100, pH 10）4℃裂解1-2小时（或过夜）4. 解旋将载玻片置于碱性缓冲液（300mM NaOH, 1mM EDTA, pH>13）中室温解旋20-40分钟，使DNA双链解旋并暴露损伤位点5. 电泳在相同碱性缓冲液中进行电泳条件通常为：25V，300mA，20-30分钟（具体参数需优化）电泳槽需保持4℃以维持DNA结构6. 中和与染色用中和缓冲液（0.4M Tris-HCl, pH 7.5）中和2-3次，每次5分钟用荧光染料（如EB、SYBR Green等）染色避光保存待观察7.
46210编辑于 2025-06-30 - 来自专栏单细胞天地
人-软骨组织单细胞悬液制备
基质内富含胶原纤维束，呈平行或交错排列，化学成分为I型胶原蛋白，也含不等量II型胶原原纤维，无定型基质很少，其中以多功能蛋白聚糖为主。软骨细胞较小而少，成行排列于胶原纤维束之间。 在1mL预冷的缓冲液中重悬细胞，直至沉淀完全重悬。并通过移液吹打彻底混合。 质检，计数细胞并使用台盼蓝检验细胞活力。 如有较多红细胞，则需再做裂解红细胞处理： 重悬细胞沉淀，加入2 mL红细胞裂解液，室温下裂解2 min，以去除剩余红细胞。 加入10 mL预冷的缓冲液抑制红细胞裂解液的活性。 重悬于1 mL预冷的缓冲液中并计数，使用台盼蓝评估细胞活力并计数。 质检合格后，稀释到适当浓度，进行上机。 结果展示 所获细胞悬液：活率大于97 %，结团率低，背景干净。
1.1K30发布于 2021-10-20 - 来自专栏单细胞天地
人—卵巢癌腹水单细胞悬液制备
每管用1-5mL的红细胞裂解液重悬细胞，也可以将同一样品混合在一个管子中进行裂解，但不要超过管子的1/3。 加入红细胞裂解液两倍的PBS后迅速580g，4℃离心5分钟。 观察离心后沉淀的颜色，如果仍旧是粉色或红色说明红细胞还大量存在，那么重复步骤3到步骤5。记录下红细胞裂解液的体积，处理时间以及颗粒颜色。 红细胞裂解步骤不要重复3次以上，会导致细胞活力的大量损失。 样品 重复次数 红细胞裂解液体积（μL） 红细胞裂解液处理时间 沉淀颜色 1 2 3 去上清。 细胞数量少于1000万，加入80μL MACS缓冲液重悬；细胞数量大于1000万个则按每1000万个细胞80μL MACS缓冲液的比例添加。 每80μL MACS缓冲液加入20μLCD45+磁珠。 在孵化过程中，灌注 LS 柱：将柱插入 Midi MACS 分离器，用3mL MACS 缓冲液润洗柱子。 孵育结束后（步骤5），每100 μL悬浮液用900 μL预冷的MACS 缓冲液重新悬浮细胞。
62020发布于 2021-12-02 KRAS Q61H与cRAF结合检测试剂盒的技术解析
捕获系统包括GST-cRAF融合蛋白包被的琼脂糖凝胶珠和结合缓冲液，其中结合缓冲液的离子强度和去垢剂浓度经过优化，可在维持蛋白质相互作用的同时最大限度降低非特异性吸附。 待测细胞或组织样本应使用预冷的裂解液处理，全程在冰上操作以防止蛋白质降解和GTP水解。裂解产物需经低温高速离心去除不溶性杂质，上清液蛋白浓度测定后统一调整至标准范围。 洗涤步骤应使用含0.1%Tween-20的缓冲液，洗涤次数以3-5次为宜，兼顾去除杂质与保留特异性结合复合物的平衡。 化学发光信号的采集应在仪器线性范围内进行，避免信号过饱和影响定量准确性。五、结果判读与数据分析方法试剂盒检测结果的判读需结合阳性对照和阴性对照的信号强度。 数据分析时应考虑样本间总蛋白表达量的差异，建议同时检测细胞裂解液中总KRAS蛋白水平，将结合信号与总蛋白信号进行标准化处理。
11110编辑于 2026-02-28- 来自专栏生命科学
免疫沉淀常见问题解答 | MedChemExpress
■ Step 1——抗原样品制备制备抗原样品 (细胞裂解物) 是 IP 的第一步，也是关键的一步。 正确的细胞裂解液可以稳定天然蛋白质构象、抑制酶活性、最大限度地减少抗体结合位点变性并释放细胞或组织中的蛋白质。一般可选 NP-40、RIPA、Western 及 IP 细胞裂解液等。 抗原样品应始终保存在冰上，并将蛋白酶抑制剂 添加到裂解液中以防止蛋白水解。注 1：Co-IP 实验时，常用 NP-40 等非离子型裂解液，以免破坏蛋白-蛋白相互作用。 样本结合步骤中的结合/洗涤缓冲液也非常重要。一般情况下，您的结合/洗涤缓冲液可以为同一种缓冲液，如 TBST/PBST。 非必需的高强度洗脱缓冲液 (如 SDS-PAGE 上样缓冲液) 将导致多种非特异蛋白 (如Protein A/G 或链霉亲和素亚基) 与抗原一起被共洗脱下来。
68320编辑于 2023-02-03 - 来自专栏Listenlii的生物信息笔记
EST综述：eDNA的多种状态以及在水环境中持久性的认知
图1 eDNA状态总结，eDNA在不同状态之间转换的过程(细胞裂解和吸附/解吸)，以及在不同状态下降解或改变eDNA的化学反应(细胞内和细胞外分解、微生物利用或稳定)，使其难以捕获和检测 生物体外eDNA 3.状态转换过程 细胞和细胞器裂解 在没有细胞壁的细胞中(动物细胞和原生动物)，水化学影响细胞溶解，渗透压导致细胞溶解。这将细胞DNA转化为溶解的DNA(图1)。 化学物质和机械破坏仅次于用化学物质进行细胞裂解。商业试剂盒通常采用带温度的酶来诱导细胞裂解，缺乏抑制剂去除步骤，但萃取后去除抑制剂并不常见。 过滤后，eDNA用类似的裂解方法和纯化缓冲液进行分离，这些缓冲液与商业提取试剂盒的化学成分基本相似。 大多数商业试剂盒可能不会促进颗粒结合DNA的解吸。 当然，缓冲液的成分需要确定，不过这是不可行的，因为其中大部分是商业机密。
3.5K20编辑于 2022-07-30 - 来自专栏生命科学
MCE | 磁珠 Protocol，如何快速捕获您心仪的蛋白~
如何操作 ■ 磁珠预处理 将磁珠充分混悬，取 25-50 μL 磁珠，置于 1.5 mL EP 管中，加入 400 μL 结合/洗涤缓冲液 裂解细胞并准备用于免疫沉淀的样品。 Step 2. 预处理样品：通过将裂解样品单独与珠子或与无关抗体结合，以除去能与 IP 组分非特异性结合的任何蛋白质。 Step 3. 使用低 pH 或 SDS 样品上样缓冲液从磁珠上洗脱蛋白质。 Step 7. IP/Co-IP/ChIP HY-K0203 Protein A Magnetic Bead 25 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液 IP/Co-IP/ChIP HY-K0204 Protein μL细胞裂解液 IP/Co-IP/蛋白纯化 HY-K0206 Anti-c-Myc Magnetic Beads 10 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液 IP/Co-IP/蛋白纯化 HY-K0207
1K10编辑于 2023-03-16 实验室的各类培养液 & 缓冲液怎么配??? (配方分享) | MedChemExpress (MCE)
另外正常配置的过程是不需要额外调 pH 的，但如果发现生长效率过低可以复查一下配置过程中是否 pH 有问题哦~02质粒构建筛选相关(1) 质粒提取 碱裂解法是目前质粒提取最常用的一种方法，当菌体在氢氧化钠和 SDS 溶液中裂解时，蛋白质与 DNA 发生变性，当加入中和液后， 质粒 DNA 分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；而蛋白质与染色体 DNA 呈絮状，可通过离心沉淀至管底。 05蛋白实验相关(1) 蛋白裂解 [8]：DTT 低温储存容易析出，可 37 ℃ 水浴加热或室温放置一段时间至溶液充分溶解后使用。 (3) 蛋白电泳缓冲液 蛋白电泳缓冲液需要根据凝胶体系来进行选择。 并且，蛋白电泳缓冲液分为变性与非变性缓冲液，区别在于变性缓冲液需加入 SDS 中和电荷。
47610编辑于 2024-11-11- 来自专栏单细胞天地
单细胞测序的微流控技术应用
1990 年代初期，Manz 和Widmer 提出了微型化全化学分析系统（miniaturized total chemical analysis system, μTAS）的概念，使生物样品的分析更加高效和灵敏 微流控技术作为 μTAS 的关键组成部分，已迅速发展成为生命科学和分析化学领域的前沿研究方法。微流体，也称为“芯片实验室”，是一种以简单有效的方式分析单个细胞的新型工具。 目前最流行的微流体隔离方法是应用微滴将单个细胞封装在惰性载体油中，从而形成一个封闭空间，降低样品污染的风险 单细胞裂解 常见的细胞裂解方法，如物理、化学和酶法 物理方法：目前主要存在三种主要的物理细胞裂解形式 机械裂解主要通过机械力分离细胞膜；热裂解取决于细胞膜蛋白的热诱导变性，需要额外的温度循环；电裂解通过电场诱导的分子重新定向破坏细胞膜 化学细胞裂解应用裂解缓冲液并诱导高效裂解以破坏细胞 酶促细胞裂解通常使用酶的组合来实现细胞的完全解离 inDrop和 Drop-seq 于 2015 年首次应用，使用特定的油来生成包含裂解缓冲液、barcode和细胞的液滴。
2.6K10发布于 2021-11-15 - 来自专栏聊点学术
Co-IP免疫共沉淀
此时，我们再使用protein A-琼脂糖珠耦合抗体Z，离心后就能得到protein A-琼脂糖珠-X-Y-Z复合物，加入上样缓冲液之后再煮沸，可以将protein A-琼脂糖珠-X-Y-Z复合物分解为 细胞裂解必须采用温和的裂解条件，而不能破坏细胞内存在的所有蛋白质-蛋白质相互作用，一般多采用非离子变性剂如终浓度为1%的NP-40、或者破膜剂TritonX-100。 严禁使用高浓度的变性剂0.2％SDS或者含去氧胆酸钠的裂解液，因为它们都属于离子型去污剂，会使蛋白变性。如果找不到适合的商用裂解液，可以尝试自己配制。 这需要我们将实验过程中使用的裂解液、磷酸盐缓冲液、容器、试管、离心机、protein A-琼脂糖珠等等提前预冷到4℃才能使用。细节是所有实验成功的灵魂。 ? ，这些管底的复合物用裂解缓冲液冲洗，最后加入SDS上样缓冲液煮沸，将复合物分解为单个的蛋白，即protein A、目标蛋白X和蛋白Y、目标蛋白X的抗体。
1.6K40发布于 2020-07-21 - 来自专栏单细胞天地
人—气道组织单细胞悬液制备
用大口径1 mL 移液器吸头，小心地从解离缓冲液中取出活检组织，放入100mm培养皿中，并加入少量解离缓冲液。 将组织切碎成尽可能小的碎片，用移液器将切碎的活检组织与少量解离缓冲液一起转移至离心管，并用解离缓冲液冲洗培养皿（重点为组织切块的位置）以尽可能多的转移细胞。 如果红细胞含量低于50%，则直接进行第13步，如果红细胞含量较多，则需进行红细胞裂解。 加900µL 氯化铵 0.8% 到100µL 细胞悬浮液，在冰上孵育10min后，添加200μL灭活缓冲液。 用100μL 洗涤缓冲液重悬，并在显微镜下监测红细胞。 洗涤缓冲液。
56730编辑于 2022-03-14 - 来自专栏单细胞天地
单细胞时代 || NGS技术实现
用磷酸盐缓冲盐(PBS)和裂解缓冲液冲洗。裂解缓冲液扩散，将被捕获的细胞移至反应室进行裂解反应。采用相似的扩散过程进行RT和PCR，洗脱缓冲液洗涤后收集cDNA进行文库制备和测序。 然后，每个液滴与另一个包含裂解缓冲液、RT缓冲液和DNA条形码的液滴融合，这些DNA条形码可以唯一地标记单细胞转录组。液滴随后被放大并测序。 芯片上进行细胞裂解和RT。Seq-well的一个主要优点是使用了半渗透的聚碳酸酯膜(10纳米孔径)，该膜可以可逆地附着在Seq-well上 通过选择性化学功能化的纳米管。 由于在冻融裂解缓冲液中没有活性裂解成分，该技术不会立即启动裂解，从而最大限度地减少交叉污染。它兼容开放环境或封闭环境的细胞装载配置，这使得它非常适合应用在护理点设置和集中实验室。 通过加入50 mM的二硫苏糖醇(DTT)缓冲液，可以裂解附着在寡核苷酸上的生物素间隔臂上的二硫键，从而产生高纯度的dna，单细胞被分选和裂解。
2.1K10发布于 2021-03-10 - 来自专栏技术文章
拒绝非特异干扰！Elabscience 流式辅助试剂让实验结果更可信
在进行样本处理时，可利用红细胞裂解液对样本进行红细胞裂解，避免红细胞干扰实验结果，也可使用Ficoll分离液得到目的细胞。 Fig. 2. 不同处理下淋巴细胞检测结果图（左图未裂红处理，中图经过红细胞裂解液处理，右图经过Ficoll分离液处理）2) T细胞活化与扩增。为了评估T细胞的功能与状态，在检测前通常需要对T细胞进行活化并使其增殖。 染色类试剂1) 染色缓冲液。流式染色缓冲液中含有BSA，能减少抗体或荧光染料与细胞的非特异性结合，也可在离心等步骤中减少细胞间的剪切力，起到保护细胞和降低细胞损失的作用，适合用于胞内流式染色。 相关产品产品类别产品名称货号规格红细胞裂解10×ACK Lysis BufferE-CK-A105100 mL/200 mL /500 mL10× RBC Lysis/Fixation SolutionE-CK-A10650 BeadsMIH001A0.2 mL /1 mL / 1 mL×5Mouse CD3/CD28 T Cell Activation BeadsMIM001A0.2 mL /1 mL / 1 mL×5缓冲液
18710编辑于 2026-01-05 【辰辉创聚生物】天然蛋白纯化技术：原理与核心层析策略
天然蛋白纯化是从复杂生物样本中获取具有完整天然构象与生物活性蛋白质的关键生物化学技术。 一、纯化基础：目标特性与初始处理天然蛋白纯化的出发点是利用目标蛋白与杂质之间在物理化学性质上的差异进行分离。这些性质包括分子大小、电荷分布、疏水性及特异性亲和力。 纯化流程始于生物样本的制备，动物组织需经匀浆破碎，培养细胞需通过渗透、超声或机械裂解。此过程必须在低温及含有蛋白酶抑制剂的适宜缓冲液中进行，以最大程度保护目标蛋白的天然结构。 该技术通常在温和的近生理条件下操作，不依赖样品与填料的结合，主要用于最终的精纯步骤，以去除蛋白质聚集体、更换缓冲液，并获得单分散性的蛋白产品溶液。4. 四、活性保持与质量控制要点维持蛋白质的天然活性贯穿整个纯化过程，技术考量包括：缓冲系统：需使用接近生理pH和离子强度的缓冲液，必要时添加稳定剂（如甘油、还原剂DTT、特定辅因子或金属离子）。
20510编辑于 2026-01-21- 来自专栏单细胞天地
单细胞技术梳理（四）
Smart-seq2库准备流程图 技术大致流程： 使用相对温和(低渗)的裂解缓冲液（在裂解液中加入MMLV逆转录酶、游离的dNTPs、oligo(dT)VN Primer、甜菜碱、MgCl2等），在不干扰或抑制 RT反应的情况下裂解细胞，制成单细胞悬液 加入反转录引物和末端转移酶。 cDNA序列 利用PCR扩增全长cDNA以获得后续步骤所需的足够的材料 片段化，利用Tn5转座酶打断并标签化 加接头，构建标准的Illumina测序文库，然后上机测序 优势与局限 优势： 使用相对温和的裂解缓冲液
1.9K31发布于 2020-04-27 - 来自专栏百味科研芝士
全程剖析Western blot原理，你才能掌控它
这些样品需要在裂解液或强去污剂中充分裂解，细胞中的物质(总蛋白、基因、其它内容物等)才能释放出来，随后离心取上清液(即总蛋白混合物)。 不同公司生产的裂解液成分大同小异，多是以上成分按不同比例组成，可分为弱、中、强三种不同裂解能力的裂解液。 最重要的是我们要清楚自己研究的蛋白到底在细胞哪里表达，是细胞膜、胞浆还是细胞核。 测定完浓度的蛋白根据体积比例加入5X或者1X的蛋白上样缓冲液，96℃以上水浴10min，使蛋白充分变性，解除二级或三级结构，只保留一级链式结构。 通过煮沸，我们让蛋白仅保留了一级结构；上一步添加的上样缓冲液中SDS消除蛋白质本身电荷的差异。那么此时，上样的总蛋白中各种各样蛋白在凝胶中的迁移距离只与蛋白的质量相关。 目前较多采用的是ECL化学发光法，ECL工作液包括鲁米诺(是的，就是我们看刑侦节目时案发现场看血迹的东西)和过氧化物，二者避光保存，现配现用(1：1配制)，用时滴在膜上就行，目标条带将在黑暗环境下发出荧光
2.5K42发布于 2019-12-24 - 来自专栏单细胞天地
人-食管组织细胞悬液制备流程
工作浓度为 3U/mL 1 份DNA酶(100uL 浓度为 2000U/mL ) 工作浓度为40U/mL 10% 胎牛血清 1% L -谷氨酰胺 1% 抗生素抗霉菌溶液 DMEM DMEM培养基（空） 红细胞裂解液 ： 1mL 红细胞裂解试剂+ 9mL水 用PBSA清洗组织 用手术刀将组织切碎 将切碎的组织转移到含有胶原蛋白酶溶液和DNA酶溶液的50 mL离心管中 在 37°C 下以 110-150 rpm 的速度摇动悬浮液 上述步骤在冰上进行 1500rpm 离心 5min，弃培养基上清 用红细胞裂解缓冲液中重悬细胞沉淀， 4°C下孵育10 min。 加入 10mL DMEM（空）并反复抽吸 使用无菌注射器和40μm滤膜过滤液体 1500rpm 离心 5min，弃培养基上清 在 1mL 细胞悬浮缓冲液中重悬细胞沉淀 使用台盼蓝血细胞计数仪分析细胞的数量和活力
57651发布于 2021-12-02 GPCR药物高通量筛选与信号转导研究的金标准均相检测方案
细胞裂解液或标准品中的内源性cAMP：作为分析目标。竞争过程：样品中的游离cAMP与试剂中的标记cAMP（示踪剂）竞争性结合限量的镧系标记抗体。 配套的细胞裂解液能高效释放cAMP并稳定其水平，同时兼容多种细胞刺激缓冲液。 Day2：化合物处理与刺激→加入裂解缓冲液终止反应并裂解细胞→向裂解物中加入预混的检测混合液（含Eu-抗体和d2-cAMP）→室温避光孵育（通常1-2小时）→使用兼容的多功能读板仪（如PerkinElmerEnVision 人工智能与数据分析：高通量产生的海量cAMP剂量反应数据，正成为训练AI模型以预测化合物活性和优化化学结构的宝贵资源。
13110编辑于 2026-01-29- 来自专栏单细胞天地
人-胃癌旁组织悬液制备
粘膜的浅层是上皮组织，有很多腺体，分泌胃酸，对食物进行化学性的消化。 粘膜层又可分为上皮，固有层和粘膜肌层。 如果组织含有大量的红细胞，需进行裂红操作（步骤7-10），添加1 mL红细胞裂解缓冲液，置于冰上2 min。
52030发布于 2021-11-04
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