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常规裂解液如何选择以优化蛋白质印迹样品质量？
常规裂解液的选择，本质上是平衡"提取效率"与"蛋白完整性/功能性"的过程。二、裂解液的核心成分与工作原理是什么？常规化学裂解液主要由三个功能组分构成：缓冲体系、盐离子和去垢剂。 裂解液的选择并非一成不变，主要取决于目标蛋白的细胞定位、溶解难度以及后续分析需求。常规裂解液大致可分为三大类：第一类，温和型（非变性）裂解液。 第二类，中等强度裂解液。以成分为主的裂解液是此类典型代表，也是实验室中最常用的类型。 第三类，强变性裂解液。此类裂解液以十二烷基硫酸钠为代表，具有极强的变性能力，能完全破坏细胞结构、解聚蛋白复合物并线性化蛋白质分子。 四、使用常规裂解液有哪些关键注意事项？为确保样品质量，在使用常规裂解液过程中需注意多个关键环节。
8910编辑于 2026-03-09- 来自专栏单细胞天地
人—卵巢癌腹水单细胞悬液制备
每管用1-5mL的红细胞裂解液重悬细胞，也可以将同一样品混合在一个管子中进行裂解，但不要超过管子的1/3。 加入红细胞裂解液两倍的PBS后迅速580g，4℃离心5分钟。 观察离心后沉淀的颜色，如果仍旧是粉色或红色说明红细胞还大量存在，那么重复步骤3到步骤5。记录下红细胞裂解液的体积，处理时间以及颗粒颜色。 红细胞裂解步骤不要重复3次以上，会导致细胞活力的大量损失。 样品 重复次数 红细胞裂解液体积（μL） 红细胞裂解液处理时间 沉淀颜色 1 2 3 去上清。 细胞数量少于1000万，加入80μL MACS缓冲液重悬；细胞数量大于1000万个则按每1000万个细胞80μL MACS缓冲液的比例添加。 每80μL MACS缓冲液加入20μLCD45+磁珠。 4°C ，500 g 离心悬浮液 4 分钟。 尽可能完全去除上清液。 用500 μL 预冷的 MACS 缓冲液中重新悬浮颗粒（最多1亿个细胞）。
61920发布于 2021-12-02 - 来自专栏生命科学
MCE | 磁珠 Protocol，如何快速捕获您心仪的蛋白~
注：具体操作细节，还需仔细阅读对应产品说明书 ■ MCE 磁珠产品 MCE 磁珠产品 HY-K0202 Protein A/G Magnetic Beads 25 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液 IP/Co-IP/ChIP HY-K0203 Protein A Magnetic Bead 25 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液 IP/Co-IP/ChIP HY-K0204 Protein G Magnetic Beads 25 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液 IP/Co-IP/ChIP HY-K0201 Anti-HA Magnetic Beads 10 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液 IP/Co-IP/蛋白纯化 HY-K0206 Anti-c-Myc Magnetic Beads 10 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液 IP/Co-IP/蛋白纯化 HY-K0207 Anti-Flag Magnetic Beads 10 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液 IP/Co-IP/蛋白纯化 HY-K0208 Streptavidin Magnetic Beads
1K10编辑于 2023-03-16 - 来自专栏单细胞天地
单细胞测序的微流控技术应用
目前最流行的微流体隔离方法是应用微滴将单个细胞封装在惰性载体油中，从而形成一个封闭空间，降低样品污染的风险 单细胞裂解 常见的细胞裂解方法，如物理、化学和酶法 物理方法：目前主要存在三种主要的物理细胞裂解形式 机械裂解主要通过机械力分离细胞膜；热裂解取决于细胞膜蛋白的热诱导变性，需要额外的温度循环；电裂解通过电场诱导的分子重新定向破坏细胞膜 化学细胞裂解应用裂解缓冲液并诱导高效裂解以破坏细胞 酶促细胞裂解通常使用酶的组合来实现细胞的完全解离 不过，液滴中细胞的封装是随机的，并且在很大程度上依赖于泊松统计，因此基于液滴的微流体技术可能会产生空液滴和包含多个细胞的液滴。 inDrop和 Drop-seq 于 2015 年首次应用，使用特定的油来生成包含裂解缓冲液、barcode和细胞的液滴。 细胞裂解后，条形码寡核苷酸与释放的 mRNA 的 poly(A) 杂交，确保文库制备和测序。 inDrop通过水凝胶微球引入寡核苷酸，在液滴中进行细胞裂解和逆转录。
2.6K10发布于 2021-11-15 - 来自专栏聊点学术
Co-IP免疫共沉淀
严禁使用高浓度的变性剂0.2％SDS或者含去氧胆酸钠的裂解液，因为它们都属于离子型去污剂，会使蛋白变性。如果找不到适合的商用裂解液，可以尝试自己配制。 在Co-IP实验时，我们需要尽可能地在裂解液中增加蛋白酶抑制剂的种类，并且保证现用现配，例如PMSF在溶液中30分钟即开始变性失效。 这需要我们将实验过程中使用的裂解液、磷酸盐缓冲液、容器、试管、离心机、protein A-琼脂糖珠等等提前预冷到4℃才能使用。细节是所有实验成功的灵魂。 ? 将预处理过的protein A-琼脂糖珠加入到已经抗体孵育的细胞裂解液中再次4°C摇床孵育3h，保证抗体与protein A-琼脂糖珠耦联；免疫反应结束后，在4°C离心机作用下将整个复合物离心至管底，小心吸取上清液 ，这些管底的复合物用裂解缓冲液冲洗，最后加入SDS上样缓冲液煮沸，将复合物分解为单个的蛋白，即protein A、目标蛋白X和蛋白Y、目标蛋白X的抗体。
1.6K40发布于 2020-07-21 - 来自专栏生命科学
核酸提取干货 - MedChemExpress
提取步骤核酸提取主要包括细胞裂解、核酸吸附、杂质漂洗和核酸洗脱四步。那具体到实验中，我们该选择哪种提取方法呢？这就要看个人的实验设计方案及实验组的经费情况啦！ MCE 新推出三款核酸提取纯化试剂盒，均利用硅胶膜离心柱对核酸进行特异性吸附，改良的裂解液可以促进细胞充分裂解、蛋白变性、核酸释放；改良的吸附缓冲液能有效地促进核酸结合到硅胶膜上；最后经过洗脱即可获得高纯度核酸 Kit two (病毒 DNA/RNA 抽提试剂盒)：我适用于从血浆、血清、全血、组织匀浆液、痰液、动物细胞上清等中提取病毒 DNA/RNA。 二德：确定样本后选择合适的裂解液，样本与裂解程度不匹配，抽提结果也会大打折扣。三德：裂解、匀浆、抽提、洗脱——快！准！狠！四德：衡量抽提性价比的标准是后续实验的结果，得率不是仅有的标准。 即用型预混液，一步操作即可完成反转录反应，简便、快捷。
83423编辑于 2022-12-27 【辰辉创聚生物】蛋白质组学：裂解化学、机械破碎与分馏策略在蛋白提取中的分子机制解析
一、物理屏障的突破：机械破碎与能量控制对于培养细胞等结构相对脆弱的样本，温和的化学裂解即可实现有效提取。 二、裂解缓冲液的化学设计逻辑当物理屏障被破坏后，裂解缓冲液的组成决定了蛋白质的溶解行为。裂解液并非通用配方，其设计必须围绕实验目标展开。在全蛋白质组分析中，常采用含有尿素或硫脲等强离液剂的体系。 对于研究信号转导或翻译后修饰的样本，裂解缓冲液还必须承担状态冻结的功能。通过引入特异性的磷酸酶或去乙酰化酶抑制剂，可以防止裂解后发生的体外修饰变化，从而确保检测结果反映真实的细胞状态。 例如，在核蛋白研究中，通过选择性裂解质膜并保持核膜完整，可显著富集转录调控相关蛋白，同时减少高丰度胞质蛋白的干扰。分馏不仅提供空间定位信息，也在一定程度上提升了蛋白质组分析的灵敏度。 植物样本中常见的多酚和多糖会在裂解过程中干扰蛋白稳定性，多酚氧化后易与蛋白形成共价交联，而多糖则显著提高溶液黏度。因此，针对植物组织，常需引入特定吸附剂或沉淀策略以去除干扰物。
10210编辑于 2026-03-09- 来自专栏生命科学
免疫沉淀常见问题解答 | MedChemExpress
■ Step 1——抗原样品制备制备抗原样品 (细胞裂解物) 是 IP 的第一步，也是关键的一步。 正确的细胞裂解液可以稳定天然蛋白质构象、抑制酶活性、最大限度地减少抗体结合位点变性并释放细胞或组织中的蛋白质。一般可选 NP-40、RIPA、Western 及 IP 细胞裂解液等。 抗原样品应始终保存在冰上，并将蛋白酶抑制剂 添加到裂解液中以防止蛋白水解。注 1：Co-IP 实验时，常用 NP-40 等非离子型裂解液，以免破坏蛋白-蛋白相互作用。 样本结合步骤中的结合/洗涤缓冲液也非常重要。一般情况下，您的结合/洗涤缓冲液可以为同一种缓冲液，如 TBST/PBST。 裂解液选的合适吗？洗脱方法合适吗？解决方案详戳 “冬风吹，战鼓擂，蛋白纯化，我怕谁！2) 高背景值或多条带a.
68320编辑于 2023-02-03 多肽合成工艺流程详解
二、树脂裂解与多肽纯化树脂裂解：配置裂解液（通常包含TFA等强酸），并提前置冰柜中冷藏保存。将肽树脂加入反应釜中，加入预冷的裂解液，搅拌反应以将多肽从树脂上裂解下来。 裂解结束后放出反应液，抽滤除去树脂并以TFA等溶剂洗涤。多肽纯化：将裂解液转入旋转蒸发仪中室温浓缩至小体积。使用适当的沉淀剂（如甲基叔丁基醚）使多肽析出，并通过离心、洗涤等步骤得到粗肽。 使用高效液相色谱（HPLC）等方法对粗肽进行纯化，以去除杂质并分离出目标多肽。浓缩、过滤与冻干：将纯化后的多肽溶液旋蒸除去有机溶剂，得到浓缩的多肽溶液。对浓缩后的多肽溶液进行无菌过滤。 10.最后用TFA切割液100ml与缩合上氨基酸的树脂做切割反应，滤液中加乙醚使得多肽析出得到粗品。完成至纯化后得到产品。
19600编辑于 2026-03-11- 来自专栏单细胞天地
单细胞时代 || NGS技术实现
用磷酸盐缓冲盐(PBS)和裂解缓冲液冲洗。裂解缓冲液扩散，将被捕获的细胞移至反应室进行裂解反应。采用相似的扩散过程进行RT和PCR，洗脱缓冲液洗涤后收集cDNA进行文库制备和测序。 然后，每个液滴与另一个包含裂解缓冲液、RT缓冲液和DNA条形码的液滴融合，这些DNA条形码可以唯一地标记单细胞转录组。液滴随后被放大并测序。 微流控装置由四个输入载体油、细胞、裂解液或RT试剂的入口，一个携带条形码引物的水凝胶微球和一个收集液滴的出口组成。水凝胶微球通过光释放键与细胞条形码共价连接。 ? 由于在冻融裂解缓冲液中没有活性裂解成分，该技术不会立即启动裂解，从而最大限度地减少交叉污染。它兼容开放环境或封闭环境的细胞装载配置，这使得它非常适合应用在护理点设置和集中实验室。 通过加入50 mM的二硫苏糖醇(DTT)缓冲液，可以裂解附着在寡核苷酸上的生物素间隔臂上的二硫键，从而产生高纯度的dna，单细胞被分选和裂解。
2.1K10发布于 2021-03-10 - 来自专栏单细胞天地
外周血中PBMC细胞的分离流程
因此利用一种介于1.075-1.092之间而近于等渗的溶液（密度梯度分离液或分层液）作密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，可将各种血细胞与单个核细胞分离。 另取一只 15 Ml 离心管向底部添加 2 mL Ficoll (样本密度分离液)，倾斜离心管至 30-45 度角，吸取 2 mL 1×DPBS 稀释的血液缓慢加入到 Ficoll (样本密度分离液)上层 红细胞裂解：离心完成后，从离心机中取出离心管，观察离心后的细胞沉淀，如果细胞沉淀中有红色，准备进行红细胞裂解操作（参看裂红步骤I，II，III）；收集后的细胞沉淀中没有红色，则可以不进行裂红处理，直接进入下一步 红细胞裂解： I．使用宽口枪头弃上清，加入300μl 1640培养基（含5%FBS）轻轻重悬细胞，后加入红细胞裂解液3mL，置于4℃（冰上），裂红计时 3min；如细胞悬液中红细胞较多（如：PBMC） II．裂红后的细胞悬液转移进高速冷冻离心机（12℃，300g，5min）中低温离心收集细胞；如若细胞悬液中还有肉眼可见的红细胞沉淀掺杂其中，可重复步骤I，但裂红时间不可超过5min。
7.8K31发布于 2021-10-09 - 来自专栏ELISA试剂盒产品推文
抗干扰 + 高特异性！Elabscience CellaQuant™-小鼠γ干扰素（IFN-γ）elisa试剂盒为抗病毒研究添动力
Elabscience® 自主研发的 CellaQuantTM 系列试剂盒，专为细胞样本检测而设计，可精准定量细胞上清与细胞裂解液中的细胞因子等靶蛋白表达水平。 它采用双抗体夹心 ELISA 法，能精准定量细胞培养上清液、细胞裂解液等样本中的小鼠 IFN-γ，凭借高灵敏度、高特异性等优势，为免疫调节、炎症机制等相关研究提供稳定可靠的数据支持，适用于科研机构、生物医药企业等开展相关实验 加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。 应用领域细胞生物学研究：定量检测小鼠 EL-4 细胞、RAW264.7 细胞、脾细胞等多种细胞的培养上清液及裂解液中 IFN-γ 水平。 适用样本广泛：可适配细胞培养上清液、细胞裂解液及其他生物体液等多种样本类型。
15110编辑于 2025-11-19 - 来自专栏单细胞天地
人-软骨组织单细胞悬液制备
在1mL预冷的缓冲液中重悬细胞，直至沉淀完全重悬。并通过移液吹打彻底混合。 质检，计数细胞并使用台盼蓝检验细胞活力。 如有较多红细胞，则需再做裂解红细胞处理： 重悬细胞沉淀，加入2 mL红细胞裂解液，室温下裂解2 min，以去除剩余红细胞。 加入10 mL预冷的缓冲液抑制红细胞裂解液的活性。 重悬于1 mL预冷的缓冲液中并计数，使用台盼蓝评估细胞活力并计数。 质检合格后，稀释到适当浓度，进行上机。 结果展示 所获细胞悬液：活率大于97 %，结团率低，背景干净。
1.1K30发布于 2021-10-20 - 来自专栏单细胞天地
人-食管组织细胞悬液制备流程
工作浓度为 3U/mL 1 份DNA酶(100uL 浓度为 2000U/mL ) 工作浓度为40U/mL 10% 胎牛血清 1% L -谷氨酰胺 1% 抗生素抗霉菌溶液 DMEM DMEM培养基（空） 红细胞裂解液 ： 1mL 红细胞裂解试剂+ 9mL水 用PBSA清洗组织 用手术刀将组织切碎 将切碎的组织转移到含有胶原蛋白酶溶液和DNA酶溶液的50 mL离心管中 在 37°C 下以 110-150 rpm 的速度摇动悬浮液 60 min 15、30和60min后用容量递减的移液器（25、10和5 mL）反复吹打 用移液枪吸去上清 用70um 滤膜过滤 加入 10mL DMEM（空）过筛并用注射器柱塞推动。 上述步骤在冰上进行 1500rpm 离心 5min，弃培养基上清 用红细胞裂解缓冲液中重悬细胞沉淀， 4°C下孵育10 min。 结果及注意 细胞量：81万左右，活率95%以上，结团率12% 注：食管癌组织在取样的时候，要尽量避免掺入食道软骨或黏膜等组织，这些组织存在会使细胞悬液的杂质量增多，以及影响酶解效果
57551发布于 2021-12-02 - 来自专栏技术文章
拒绝非特异干扰！Elabscience 流式辅助试剂让实验结果更可信
样本处理的核心目标是对样本进行预处理，使其满足流式细胞仪检测的要求，即获得单细胞悬液的同时，保证检测的目的细胞数量足够多，细胞活力好，抗原表位完整。 在进行样本处理时，可利用红细胞裂解液对样本进行红细胞裂解，避免红细胞干扰实验结果，也可使用Ficoll分离液得到目的细胞。 Fig. 2. 不同处理下淋巴细胞检测结果图（左图未裂红处理，中图经过红细胞裂解液处理，右图经过Ficoll分离液处理）2) T细胞活化与扩增。为了评估T细胞的功能与状态，在检测前通常需要对T细胞进行活化并使其增殖。 染色类试剂1) 染色缓冲液。流式染色缓冲液中含有BSA，能减少抗体或荧光染料与细胞的非特异性结合，也可在离心等步骤中减少细胞间的剪切力，起到保护细胞和降低细胞损失的作用，适合用于胞内流式染色。 相关产品产品类别产品名称货号规格红细胞裂解10×ACK Lysis BufferE-CK-A105100 mL/200 mL /500 mL10× RBC Lysis/Fixation SolutionE-CK-A10650
18410编辑于 2026-01-05 - 来自专栏百味科研芝士
全程剖析Western blot原理，你才能掌控它
这些样品需要在裂解液或强去污剂中充分裂解，细胞中的物质(总蛋白、基因、其它内容物等)才能释放出来，随后离心取上清液(即总蛋白混合物)。 常用的裂解成分大多包含Triton X-100、NP-40、十二烷基硫酸钠等，这些成分具有较强的表面活性作用和还原作用，可将细胞膜或核膜裂解，释放其中的物质。 同时，裂解液中还包含其它成分，如Tris-Hcl作为缓冲剂，可防止蛋白在提取过程中变性；以及Nacl，可防止提取的蛋白由于非特异性的聚集而形成聚体等。 不同公司生产的裂解液成分大同小异，多是以上成分按不同比例组成，可分为弱、中、强三种不同裂解能力的裂解液。 最重要的是我们要清楚自己研究的蛋白到底在细胞哪里表达，是细胞膜、胞浆还是细胞核。 这决定我们该使用哪种强度的裂解液。如果裂解不充分，我们抽提的总蛋白中可能已经不包括目标蛋白或目标蛋白随着沉淀物被丢弃，那么整个WB实验从一开始就悄无声息地失败了。 二、蛋白定量 为什么要蛋白定量？
2.5K42发布于 2019-12-24 - 来自专栏单细胞天地
单细胞技术梳理（四）
Smart-seq2库准备流程图 技术大致流程： 使用相对温和(低渗)的裂解缓冲液（在裂解液中加入MMLV逆转录酶、游离的dNTPs、oligo(dT)VN Primer、甜菜碱、MgCl2等），在不干扰或抑制 RT反应的情况下裂解细胞，制成单细胞悬液 加入反转录引物和末端转移酶。 cDNA序列 利用PCR扩增全长cDNA以获得后续步骤所需的足够的材料 片段化，利用Tn5转座酶打断并标签化 加接头，构建标准的Illumina测序文库，然后上机测序 优势与局限 优势： 使用相对温和的裂解缓冲液
1.9K31发布于 2020-04-27 - 来自专栏DrugOne
Nature | 细菌免疫系统中潜在的抗病毒天然化合物库
基于动物viperin催化ddhCTP的产生，作者通过LC-MS检测了表达pVips或人viperin的大肠杆菌裂解液中的小分子物质，对不同pVips表达的细胞裂解液进行分析，发现只有pVip50裂解液中检测到了 ddhCTP的衍生物，因此作者对其他分子量进行了分析，发现10种pVips裂解液中有ddhGTP和ddhGMP的明显富集，15种pVips裂解液中有ddhUTP和ddhUMP的信号。
1.2K60发布于 2021-02-02 - 来自专栏生信菜鸟团
读《结节状病灶细胞生态学的单细胞视角》
在这里，我们不禁要问：为啥选用基于微孔法开发而非液滴法呢？ 此外，在许多液滴微流控方法中，样品必须使用单独的微流控通道进行顺序处理，这可能导致长时间的实验和随着时间的推移样品活力的损失。 其次，在液滴微流控系统中使用十分温和的裂解条件，以保持反乳化液油滴的完整性。而适用于结核分枝杆菌的硬裂解缓冲液（如5M硫氰酸胍）与反向乳液滴的物理完整性不相容。 作者开发的Seq-Well Pipeline如下： 与需要大量设备的液滴微流控系统不同，微孔法的磁珠和细胞的加载是通过重力实现的，只需要使用移液管和标准实验室设备即可进行高大上的单细胞实验。 重要的是，Seq-Well可以兼容特殊的裂解条件，这是能够裂解结核分枝杆菌感染细胞的。 当然，作者的主要目的还是解决生物学问题。
23710编辑于 2023-12-03 - 来自专栏ELISA试剂盒产品推文
操作复杂易出错？Elabscience CellaQuant™-小鼠血管内皮细胞生长因子A elisa试剂盒简化流程，VEGF-A 检测新手也能上手
内容概要Elabscience® 自主研发的 CellaQuantTM 系列试剂盒，专为细胞样本检测而设计，可精准定量细胞上清与细胞裂解液中的细胞因子等靶蛋白表达水平。 它采用双抗体夹心 ELISA 法，可精准定量细胞培养上清液、细胞裂解液等样本中的小鼠 VEGF-A，凭借高灵敏度、高特异性等优势，为血管生成相关研究提供稳定可靠的数据支持。 用途：可检测细胞培养上清液、细胞裂解液或其他生物体液样本中的小鼠VEGF-A，且与其它类似物无明显交叉反应规格选择：提供 48 T、96 T、96 T×5 三种规格，满足不同实验需求。 加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。 应用领域适用于细胞生物学、肿瘤学、免疫学、生殖医学等多个科研领域，可对细胞培养上清液、细胞裂解液及其他生物体液样本中的小鼠 VEGF-A 进行定量检测，为血管生成机制研究、肿瘤发生发展探索、自身免疫性疾病发病机制分析等提供关键数据支持
22610编辑于 2025-11-20
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