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- 来自专栏LN生物笔记
分子生物学实验技术——荧光素酶实验
例如，荧光素酶报告基因实验中运用的荧光素酶基因，以及qPCR中的荧光报告基团。 ，虫荧光素在虫荧光素酶的催化下氧化发光，发光颜色为黄绿色。 3️⃣加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。 二、双荧光素酶报告系统（Dual-Luciferase reporter assay） Dual-Luciferase双萤光素酶报告基因检测系统在细胞中同时表达萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶，两者可催化各自的底物发生氧化作用产生生物荧光 ，以萤火虫萤光素酶为核心reporter，海肾荧光素酶作为内参，构建研究对象到相应位置，转染细胞，裂解细胞，分别加荧光素酶底物，用荧光测定仪检测荧光强度，通过数据得出基因表达量，从而确定构建序列的功能。
1.8K30编辑于 2023-02-23 - 来自专栏生命科学
细胞转染、重组蛋白、荧光素酶检测试剂盒实验 | MedChemExpress
“六合心法”第三式 ■ 双荧光素酶报告基因检测试剂盒 (Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit) 荧光素酶是自然界中能够产生生物荧光的酶的总称，可催化荧光素氧化成氧化荧光素 目前最常见的荧光素酶是萤火虫荧光素酶 (Firefly luciferase) 和海肾荧光素酶 (Renilla luciferase)，前者用于荧光素酶报告基因的检测，后者则作为内参，消除细胞生长状态 本心法中的 Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit 含有高纯度的 D-荧光素、腔肠素以及比例优化的反应缓冲液，可实现哺乳动物细胞双萤光素酶报告基因检测，操作简单 Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit 含有高纯度的 D-荧光素、腔肠素以及比例优化的反应缓冲液，实现哺乳动物细胞双萤光素酶报告基因检测。
47410编辑于 2023-03-03 【辰辉创聚生物】报告基因细胞系 | 信号通路分析 | 高通量药物筛选
常见的报告基因主要包括：萤光素酶：通过催化底物（萤光素）发光进行检测，灵敏度极高，背景低，线性范围广，是高通量筛选的首选。其快速衰减的特性特别适合动态监测。荧光蛋白：如绿色荧光蛋白及其衍生物。 分泌型碱性磷酸酶：分泌到细胞培养上清中，检测方便，破坏性小，适合连续取样监测。二、核心应用：洞察通路与甄选先导化合物1. 信号通路分析这是报告基因细胞系最经典的应用。 将待测化合物库与细胞系共孵育后，通过检测报告信号的变化（如萤光素酶活性），即可高效识别出能够激活或抑制该靶点通路的“命中化合物”。 三、技术优势：灵敏、定量与高通量化相比传统的终点法检测（如Western Blot、qPCR），报告基因细胞系技术具有独特优势：实时动态与高灵敏度：特别是萤光素酶报告系统，能够检测到非常微弱的信号变化，
13810编辑于 2026-02-02基于荧光素酶报告基因系统的信号通路与基因转录活性检测
通过加入特异性底物，荧光素酶催化氧化反应并产生生物发光信号，该信号的强度与荧光素酶的表达量成正比，从而间接、灵敏地反映目标信号通路或转录调控事件的活性。 激活的转录因子复合物与报告质粒上的SRE序列特异性结合，从而驱动荧光素酶基因的转录与表达。因此，通过检测荧光素酶的活性，即可定量评估MAPK/ERK通路的激活程度。 SCD1基因的启动子区域克隆至含有萤火虫荧光素酶基因的报告载体中。 3.荧光素酶活性检测：处理结束后，裂解细胞。使用UA-Glo®Bio-lucLuciferaseAssaySystem按顺序检测萤火虫荧光素酶（实验组）和海肾荧光素酶（内参组）的活性。 4.数据分析：将萤火虫荧光素酶的活性值与对应的海肾荧光素酶活性值相除，得到归一化的相对荧光素酶活性。
21710编辑于 2026-01-30AbMole小讲堂丨Pepstatin A（抑肽素）：天冬氨酸蛋白酶抑制剂及其多领域科研应用
Pepstatin A （抑肽素，AbMole，M3657）是一种由放线菌产生的天然肽类化合物，其化学结构包含两个独特的Statine 残基（(3S,4S)-4-氨基-3-羟基-6-甲基庚酸），这一结构特征使其能够高效抑制天冬氨酸蛋白酶家族成员 μM），这种相互作用模式赋予了Pepstatin A对胃蛋白酶、组织蛋白酶D/E等酶的抑制能力[1]。 AbMole为全球科研客户提供高纯度、高生物活性的抑制剂、细胞因子、人源单抗、天然产物、荧光染料、多肽、化合物库、抗生素等科研试剂，全球大量文献专利引用。 有研究证明，Pepstatin A能有效抑制病毒蛋白酶（如ASPRV1蛋白酶）的活性，从而限制病毒复制[3]；Pepstatin 还可通过抑制组织蛋白酶D（Cathepsin D）的活性，干扰病毒对趋化因子的水解 Pepstatin A还可以诱导抑制核因子κ B受体活化因子配体（RANKL）诱导的破骨细胞分化，这种抑制作用呈现出剂量依赖性，且与组织蛋白酶D等蛋白酶的活性无关，主要涉及对ERK信号通路的阻断[7]。
17810编辑于 2025-11-20- 来自专栏简说基因
从零开始学PCR技术（一）：PCR技术简介
双链 DNA 在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在 DNA 聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。 聚合酶（polymerase ），DNA 聚合酶复制需要扩增的区域。 脱氧核苷三磷酸（dNTP），用于构造新的互补链。 缓冲液（buffer），提供适合聚合酶行使功能的化学环境。 ? 聚合酶链式反应简图 三、结果检测 PCR 反应扩增出了高的拷贝数，下一步检测就成了关键。荧光素（溴化乙锭，EB）染色凝胶电泳是最常用的检测手段。 扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。 纯度要求低 不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及 RNA 均可作为扩增模板。 即时 PCR（real-time PCR）：PCR 过程中利用萤光探针或染料定量检测，又称定量 PCR（quantitative PCR），可以进行多组对比。
1.6K10发布于 2020-12-02 - 来自专栏生命科学
MCE | 间歇性禁食增强抗癌疗效
摘要：在激素受体阳性 (HR+) 乳腺癌小鼠模型中，周期性禁食或 FMD 通过降低血液循环系统中的胰岛素样生长因子 (IGF1)、胰岛素 (Insulin) 和瘦素水平，以及上调 EGR1 和 PTEN 饮食限制能减少血液循环系统中生长因子水平，如胰岛素和 IGF1。 MCF7、ZR-75-1 和 T47D HR+/HER2- 乳腺癌 (BC) 细胞小鼠模型：MCF7 肿瘤异体移植小鼠模型■ 主要方法免疫印迹；定量 PCR；ELISA 分析；流式细胞仪进行细胞周期分析；萤光素酶报告基因检测 另外，他们还发现了禁食/FMD 会降低 IGF1 的生物利用度，禁食/FMD 联合雌激素疗法会降低瘦素 (Leptin) 水平 (瘦素能作为 HR+ 乳腺癌发育的生长因子，降低雌激素疗法效果)。 3、雌激素受体的活性雌激素受体活性对 HR+ 乳腺癌细胞的存活和增殖至关重要，胰岛素，IGF1 和瘦素可增强雌激素受体活性。
49820编辑于 2023-03-16 STUB1泛素连接酶调控干扰素-γ受体稳定性及其在肿瘤免疫中的作用机制
一、研究背景：干扰素-γ信号与肿瘤免疫治疗抵抗干扰素-γ是细胞毒性T淋巴细胞及自然杀伤细胞分泌的关键效应细胞因子，在抗肿瘤免疫应答中扮演多重角色。 二、核心发现：STUB1是干扰素-γ受体复合物的关键负调控因子为了系统性探究调控干扰素-γ受体1（干扰素-γR1）细胞表面丰度的分子机制，研究团队开展了全基因组范围的CRISPR/Cas9功能缺失筛选。 1.筛选与鉴定：通过无偏向性筛选，发现E3泛素连接酶STUB1是干扰素-γR1表达的关键负向调节因子。STUB1的缺失可显著提高干扰素-γR1在细胞膜表面的丰度。 研究发现，STUB1介导干扰素-γR1上K285位点和JAK1上K249位点的泛素化修饰，进而引导整个受体-激酶复合物通过蛋白酶体途径降解。 五、总结与展望本研究首次系统揭示了STUB1作为E3泛素连接酶，通过同时泛素化降解干扰素-γR1和JAK1，负向调控干扰素-γ信号通路的新机制。
10510编辑于 2026-02-06- 来自专栏纳米药物前沿
Adv Sci：血红素氧合酶-1靶向化疗和免疫疗法联合治疗急性髓系白血病
血红素氧合酶1(HO1)是一种抗氧化酶和细胞保护酶，可诱导化疗耐药，是肿瘤微环境中的免疫检查点分子。
68420发布于 2021-02-04 - 来自专栏DrugOne
Nat. Commun. | 用于提升翻译效率与治疗效能的 mRNA 密码子序列深度生成优化
在体外实验中，优化序列的蛋白表达量远超以往方法；在小鼠实验中，优化后的流感血凝素（HA）mRNA 可诱导 10 倍更强的中和抗体反应，而神经生长因子（NGF）mRNA 则在剂量降低五分之一的情况下仍实现同等神经保护效果 针对萤光素酶（Gluc），模型生成的优化序列预测翻译水平提升约 4 倍，且在联合优化条件下同时获得更低 MFE 值（稳定性提升）。 流感疫苗免疫增强效应 针对流感病毒血凝素（HA）基因的优化序列在体外蛋白表达上较野生型提升 6 倍；在小鼠实验中，优化 HA mRNA 可诱导 9.6 倍更高的中和抗体滴度（IC₅₀ 提升显著）。
24610编辑于 2025-11-17 - 来自专栏DrugOne
｜给酶匹配“对象”，基座模型EnzymeCAGE破解酶招募难题
酶催化被公认为实现工业可持续发展的关键绿色生物制造技术。作为生物制造体系的核心“芯片”，酶以其高效且高度特异的催化能力维系着复杂的代谢网络。 现有计算方法主要基于序列同源性进行酶筛选，未能充分整合进化信息与底物特异性约束，在定向匹配特定反应催化酶方面存在显著不足。 该模型利用几何引导机制直接建模酶与反应的兼容性，为未知酶功能鉴定和孤儿反应催化剂检索提供了高效的双向预测方案 。 图 3: 特定酶家族的领域微调与迁移应用。通过对 P450、萜类合成酶及磷酸酶家族进行定向微调，EnzymeCAGE在外部测试集上的表现得到了进一步强化 。 但研究团队也发现该模型在硫转移酶，酰胺水解酶，糖苷水解酶等数据较为稀缺的领域表现欠佳，未来将继续改进反应中心识别方法，以提高模型处理复杂生物转化过程的能力，并对特定酶家族开展更有针对性的精细化优化。
11020编辑于 2026-03-02 - 来自专栏字节脉搏实验室
BadUSB素板初体验
BadUSB攻击是一种利用USB固件中的固有漏洞的攻击，将一个写入了恶意代码的定制USB设备，例如U盘，插入受害者电脑，它会伪装成HID设备（Human InterfaceDevice，是计算机直接与人交互的设备，例如键盘、鼠标等）进行操作。
1.2K50发布于 2021-01-06 AbMole小讲堂丨Leupeptin（亮肽素）：广谱蛋白酶抑制剂，在炎症、抗病毒与脑损伤模型中的应用
Leupeptin（亮肽素，AbMole，M3636）是一种天然存在的细菌小分子，也是一种广谱的蛋白酶抑制剂。 该分子对多种蛋白酶（尤其是溶酶体中的丝氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶）具有广谱的抑制能力，其作用机理主要通过模拟底物的过渡态，与蛋白酶活性位点形成可逆共价结合，从而阻断溶酶体中的底物水解。 Leupeptin（亮肽素）可通过抑制蛋白酶的水解活性，在细胞的多种生理活动中发挥重要的调节作用。 Leupeptin（亮肽素，AbMole，M3636）在Vero细胞中，对SARS-CoV-2的半数有效浓度（EC50）为42.34 μM，提示其可能通过干扰病毒蛋白酶活性发挥抗病毒作用[2]。 进一步研究发现Zyxin缺失不影响血小板寿命和血小板生成素（TPO）的水平，但损害了巨核细胞（MK）成熟、分界膜系统（DMS）形成和前血小板生成。
12910编辑于 2025-12-31｜给酶匹配“对象”，基座模型EnzymeCAGE破解酶招募难题
DRUGONE 酶催化被公认为实现工业可持续发展的关键绿色生物制造技术。作为生物制造体系的核心“芯片”，酶以其高效且高度特异的催化能力维系着复杂的代谢网络。 现有计算方法主要基于序列同源性进行酶筛选，未能充分整合进化信息与底物特异性约束，在定向匹配特定反应催化酶方面存在显著不足。 该模型利用几何引导机制直接建模酶与反应的兼容性，为未知酶功能鉴定和孤儿反应催化剂检索提供了高效的双向预测方案 。 图 3: 特定酶家族的领域微调与迁移应用。通过对 P450、萜类合成酶及磷酸酶家族进行定向微调，EnzymeCAGE在外部测试集上的表现得到了进一步强化 。 但研究团队也发现该模型在硫转移酶，酰胺水解酶，糖苷水解酶等数据较为稀缺的领域表现欠佳，未来将继续改进反应中心识别方法，以提高模型处理复杂生物转化过程的能力，并对特定酶家族开展更有针对性的精细化优化。
9320编辑于 2026-03-03- 来自专栏温安适的blog
ES实现搜素建议
默认⾸字⺟不⼀致，就不会匹配推荐。解决方法，将 prefix_length 设置为 0，
1.3K10发布于 2021-02-21 - 来自专栏生命科学
MCE | 抗氧化剂有哪些？
抗氧化剂主要分为酶促抗氧化剂和非酶促抗氧化剂，酶促抗氧化剂的最常见的有 CAT (过氧化氢酶)、GSHPx (谷胱甘肽过氧化物酶) 和 SOD (超氧化物歧化酶)。 在铜、锌等辅助因子存在的情况下，抗氧化酶将过剩的氧化产物转化为过氧化氢，然后再转化为水。非酶促抗氧化剂通过中断自由基链反应起作用。非酶促抗氧化剂常见的有维生素 C、维生素 E、植物多酚和类胡萝卜素。 ■ 类胡萝卜素 之前提到的番茄红素、叶黄素都属于类胡萝卜素。 番茄红素主要存在于番茄、西瓜、葡萄柚和番石榴等食物中 (哺乳动物不能自行合成)，在雌性大鼠中，番茄红素可以消除肥胖引起的神经信号转导酶的高反应性、氧化应激和下丘脑炎症。 Fraxin 香豆素类天然产物，通过抑制环腺苷酸磷酸二酯酶表现出抗氧化活性。 Isoquercetin 黄酮类天然产物，具有抗氧化、抗炎作用，能调控胰岛素信号通路中的关键酶而缓解高血糖症。
63530编辑于 2023-03-09 - 来自专栏全栈程序员必看
素埃里克森筛法
第一2~n的记录数。2作为最小质数。所以2多个不是素数，从记录介质划掉，扫描后再次。将3作为最小质数。3倍数划掉，如此下去，求出全部素数。
34220编辑于 2022-07-14 - 来自专栏HyperAI超神经
中科院团队基于扩散模型，开发 P450 酶从头设计方法 P450Diffusion
模型架构：P450 酶的从头设计方法 P450Diffusion 研究人员以来自灯盏花的一个黄酮 6-羟化酶 (CYP706X1) 为例，该酶属于 CYP706X 亚家族，在灯盏花素生物合成途径中将芹菜素转化为灯盏花素 「三点固定」指的是与芹菜素分子中三个枢纽的关键相互作用，包括：芹菜素分子中的 4’-OH (第一个枢纽) 由 T114 提供的氢键固定，芹菜素的 「B」环 (第二个枢纽) 由 F123 和 M248 的 π 堆积相互作用固定，芹菜素的 7-OH (第三个枢纽) 通过与 CpdI 铁-氧基的氢键固定。 该模型将底物芹菜素保持在一个接近反应的构象 (NAC)，维持芹菜素反应位点与 CpdI 铁-氧基之间的相对方向处于有利的距离和角度 (3.6 Å和 155°)，从而在催化过程中启动芹菜素的 6-羟基化反应 通过喂养芹菜素作为底物培养重组酵母 4 天，并进行 HPLC 分析，研究人员发现了 10 个设计具有显著的 F6H 活性，如下图所示。
60410编辑于 2024-07-29 Quercetin (>99%) 别名：Meletin, Sophoretin; 槲皮素 (>99%)（AbMole）
上调内源性抗氧化系统： 槲皮素能够激活细胞内的Nrf2/ARE信号通路，促进谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶等内源性抗氧化酶的表达。 调节酶活性： 槲皮素可以抑制环氧化酶和脂氧合酶等炎症相关酶的活性，减少前列腺素和白三烯等炎症介质的产生。 槲皮素还具有其他多种作用，如通过抑制组胺释放发挥抗过敏作用，以及通过影响葡萄糖和脂质代谢相关酶和转运体来表现出潜在的抗糖尿病和降脂活性。 研究人员常使用其衍生物（如槲皮素苷元、槲皮素纳米制剂）或与维生素C等协同使用以提高其生物利用度。 潜在的食物-药物相互作用： 作为补充剂使用时，高剂量的槲皮素可能通过抑制肝脏细胞色素P450酶系（如CYP3A4）或药物转运蛋白（如P-糖蛋白）而影响某些药物（如华法林、地高辛、某些化疗药）的代谢，导致血药浓度异常
43610编辑于 2025-11-12- 来自专栏生命科学
MCE | 烟酰胺核苷酸转氢酶——独特色素沉着机制
■ 黑色素合成与“晒黑”的经典途径 黑色素合成： 黑色素合成发生在黑色素细胞中的黑素体中，可分为 2 个阶段第一阶段：酪氨酸在酪氨酸酶的催化作用下生成 L-二羟基苯丙氨酸多巴 (L-DOPA)，并在酪氨酸酶作用下进一步生成多巴醌 第二阶段：有半胱氨酸或谷胱甘肽 (Cys/GSH) 存在时，DQ 与其反应生成半胱氨酰多巴或谷胱甘肽多巴，进而被氧化聚合生成褐黑素 (可溶性聚合物，易代谢)；当它们不存在时，在酪氨酸酶或 TYRP1 等氧化酶的作用下 ■ NNT 促进泛素蛋白酶体依赖性酪氨酸酶降解并调节黑素体成熟 改变 NNT 会影响酪氨酸酶和关键黑色素生成酶的蛋白质水平，假设 NNT 会影响某些黑素体蛋白质的稳定性。 MG-132是一种蛋白酶体抑制剂，可阻抑 NNT 过表达诱导的 UACC257 细胞酪氨酸酶蛋白稳定性降低 (图5b)。 研究者们还观察了原代人类黑素细胞中，NNT 表达对黑素体超微结构的影响。 NNT 通过蛋白酶体介导的酪氨酸酶蛋白降解诱导黑色素水平的变化，并调节黑素体中的成熟。
75940编辑于 2023-03-09
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