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流式细胞术凋亡检测指南 | 实验原理、步骤与结果分析详解
其中最常用、最经典的技术就是AnnexinV结合/碘化丙啶（PI）双染法。01/核心原理：AnnexinV：识别早期凋亡细胞。 碘化丙啶（PI）：识别晚期凋亡和坏死细胞。PI是一种核酸染料，不能透过完整的细胞膜。只有当细胞膜完整性丧失（晚期凋亡或坏死）时，PI才能进入细胞，与DNA/RNA结合发出荧光。 （处理组和对照组）-1xAnnexinV结合缓冲液（通常由试剂盒提供或自配：10mMHEPES,140mMNaCl,2.5mMCaCl₂,pH7.4）-FITC（或其他荧光素）标记的AnnexinV-碘化丙啶 （去除残留培养基和血清）重悬于结合缓冲液：用适量的1xAnnexinV结合缓冲液（通常100-500μL）轻柔重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬液。避免剧烈吹打产生气泡！将细胞悬液转移到流式管中。 如果用含EDTA胰酶，必须彻底洗净EDTA（多洗几次）才能进行AnnexinV染色。钙离子依赖AnnexinV结合缓冲液必须含有足够浓度的Ca²⁺（通常2.5mM）。确保缓冲液新鲜配制或保存得当。
80310编辑于 2025-11-13- 来自专栏生命科学
细胞凋亡——如何检测？| MedChemExpress
碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI) 染色液是一种不能穿透细胞膜的红色荧光染料，可对凋亡晚期细胞及坏死细胞染色。 经 Annexin V-FITC 和 PI 联合染色后，正常细胞基本无荧光 (Annexin V-/PI-)，早期凋亡细胞呈绿色荧光 (Annexin V+/PI-)，晚期凋亡细胞及坏死细胞则呈绿色和红色荧光 相关产品细胞凋亡与坏死检测试剂盒采用 Hoechst 33342 和碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI) 双染的方法快速检测细胞凋亡与细胞坏死。 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒采用碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI) 染色的方法检测细胞周期和细胞凋亡。 Annexin V-EGFP/PI 细胞凋亡检测试剂盒Annexin V-EGFP 和 PI 联合染色后，正常细胞基本无荧光 (Annexin V-/PI-)，早期凋亡细胞呈绿色荧光 (Annexin
90930编辑于 2023-02-06 AbMole | Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒，精准区分细胞活死状态
AbMole推出的Calcein-AM/PI活死细胞双染试剂盒（AbMole，M55257），专为解决这些痛点而设计，它的检测原理基于两种荧光染料：Calcein-AM和碘化丙啶（PI），能够快速、准确地区分活细胞和死细胞 一、检测原理Calcein-AM/PI活死细胞双染试剂盒（AbMole，M55257）内含有Calcein-AM和Propidium Iodide（PI，碘化丙啶），Calcein AM 是在传统的钙黄绿素 由于死细胞缺乏上酯酶，不能或很少能产生Calcein，因此仅活细胞会被染色为强绿色荧光，死细胞不能被染色。 因此，上述两种染料的联合使用，可以对活细胞与死细胞同时进行双重荧光染色，用于实验中细胞活性或细胞毒性的检测。 活死细胞染色试剂盒的检测原理二、优势AbMole的Calcein-AM/PI活死细胞双染试剂盒（AbMole，M55257）具有多种优势，主要包括以下几点：快速检测：操作简单，染色过程仅需40分钟左右，
27310编辑于 2025-12-04- 来自专栏生信菜鸟团
细胞凋亡—流式细胞仪检测
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。 过200目筛网，滤液以1000r/min离心弃上清，再用冰冷的PBS液重悬细胞。用台盼蓝染色计数活细胞数，细胞存活率应在95%以上，调整细胞浓度至1×105—1×106个/ml之间。 2. 本实验中设有四个对照组，分别为：空白对照、FITC对照、PI对照、FITC and PI对照，其余待测样品均加入10μl Annexin V-FITC和5μl PI，轻轻混匀，避光室温反应15分钟（或37 特殊细胞的染色方法：在消化或吹打时，有些细胞（如神经元细胞）很容易受到损伤，导致晚期凋亡或坏死比例非常高，不能反映真实结果。 实验的解决方法：先低速离心，吸取细胞培养板中的液体，留少许液体，加入适量PI和Annexin-V染色10min后，将漂浮细胞吸至离心管中，离心洗涤两次，用PBS漂洗贴壁细胞两次，加胰酶消化后将细胞悬液移至另一离心管中
1.1K10发布于 2021-11-15 - 来自专栏生物信息云
TUNEL 检测细胞凋亡(附视频)
如：0.2% TritonX 100， TUNEL检测试剂盒（包含 10×TdT 酶浓缩液、荧光素标记的 1×dUTP、转化剂POD），DAB 试剂盒， 3%过氧化氢甲醇，磷酸缓冲液 PBS 等。 DAB 染色 取出载玻片，用滤纸擦去周围多余的PBS。滴加新鲜配制的 DAB 工作液，结合显微镜下观察背景颜色变化，控制显色时间。底面出现适量黄色时，将载玻片放入盛有蒸馏水的切片缸内，水洗终止显色。 目前流式细胞仪检测细胞凋亡已逐渐成为趋势，利用Annexin V-FITC和PI染色， 流式细胞仪检测早期凋亡率。Annexin V -FITC检测凋亡。 Annixine V-FITC是一种标记有荧光素的钙依赖磷脂结合蛋白，与PS有很强的亲和力，可特异性与PS结合，凋亡早期细胞仍保持膜的完整性，碘化丙啶（PI）不能进入细胞内，坏死细胞细胞膜破裂，只能被PI 染色。
2.8K42发布于 2019-09-17 - 来自专栏单细胞天地
单细胞实验也了解一下？让细胞计数更加准确的7个步骤
减少细胞结团率 细胞计数需要对整个细胞悬液中的少量样本进行分析，因此必须注意确保样品能够代表原始整个单细胞悬液。 细胞裂解可能是由于过度生长、过度移液的机械剪切或冷冻/解冻循环等因素造成的，而胰蛋白酶消化不足或过度也可能导致样品的异质性。 然而，使用吖啶橙(AO)和碘化丙啶(PI)等染料，可以只对有核的PBMC进行染色，并通过双重荧光区分活细胞和死细胞。 AO和PI都可以对核酸进行染色，但只有AO能够穿过活细胞膜。 最终活的PBMC被AO染色，并呈现荧光绿，死的PBMC同时被AO和PI染色，呈现荧光红。但红细胞没有染色，根本没有发出荧光。
2.4K10发布于 2020-08-21 Annexin V-FITC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒原理及应用
2.7-AAD区分细胞膜完整性：7-氨基放线菌素D是一种核酸染料，因其无法透过完整的细胞膜，故不能染色活细胞和早期凋亡细胞。 3.操作简便快捷：该试剂盒通常提供即用型结合缓冲液和优化的工作液配方，染色步骤简单，孵育时间短（通常15-20分钟），兼容流式细胞术和荧光显微镜平台，便于快速获得结果。 5.活细胞分析能力：相较于碘化丙啶等传统染料，7-AAD对早期凋亡细胞的毒性较低，更利于进行活细胞分析。 2.染色孵育：向细胞悬液中加入适量AnnexinV-FITC和7-AAD工作液，轻轻混匀，于室温（20-25℃）避光孵育15-20分钟。 设置合适的荧光通道（FITC：FL1；7-AAD：FL3或等效通道），并使用未经染色的细胞和单染管进行荧光补偿调节。
17910编辑于 2026-02-04- 来自专栏生命科学
细胞凋亡的流式检测？实验步骤+结果解读，速戳！ | MCE
PI (碘化丙啶) 是一种红色荧光染料，它不能进入活细胞或早期凋亡细胞，但可以进入已经死亡或晚期凋亡细胞，因为这些细胞的膜已经破损。 加入 10 μL PI Stain，轻轻混匀。5. 室温下避光孵育 10-20 min。注：孵育过程中可轻轻颠倒数次以加强染色效果。6. 流式细胞仪检测：用流式细胞仪检测荧光强度。01注意事项a. 建议设置三组对照：未染色组、PI 单染组及 Annexin V-FITC 单染组。c. 所有操作应尽量快速，避免细胞长时间暴露于非生理条件下。d. 实验步骤与注意事项一、JC-1 染色液的配制制备储存液用 DMSO 配制 5 mg/mL 的 JC-1。如用 1 mL DMSO 溶解 5 mg JC-1。 二、JC-1 染色1. 以 6 孔板为例进行细胞铺板，密度为 5×105 cells/mL。37℃，5% CO2 培养箱培养过夜。
1.4K11编辑于 2025-04-16 - 来自专栏生命科学
细胞凋亡检测方法有哪些？常用的细胞凋亡检测实验步骤 | MCE
1.2 细胞核染色分析在凋亡细胞中，质膜通透性和染色质浓缩发生变化，可以使用 DAPI、Hoechst 以及碘化丙啶 (PI) 荧光染料， 通过流式细胞仪或荧光显微镜轻松检测到。Figure 5. DAPI, Hoechst 和 PI 的荧光染色效果图[6][7]。(A) 甲基乙二醛(MG)(1.5 mM, 24 h)诱导PC12细胞凋亡，并用PI和Hoechst 33342染色。 添加新鲜培养基并轻轻悬浮细胞 制成单细胞悬浮液。1000 ×g 离心 5 分钟，然后弃去上清液。加入 1 mL 预冷的 PBS 重悬细胞沉淀，1000 ×g 离心 5 分钟弃上清，保留细胞沉淀。2. 加入 5 μL Annexin V-FITC、10 μL PI (Propidium Iodide)，室温避光 孵育 10-20 min。孵育过程中可轻轻颠倒数次 ，以加强染色效果。3. 活细胞呈现为 Annexin V− /PI−阴性， 早期凋亡细胞为 Annexin V+ /PI− ，而晚期凋亡细胞为 Annexin V+ /PI+ 。
1.4K11编辑于 2025-05-19 - 来自专栏流式抗体推文
Elabscience 细胞周期检测试剂盒(红色荧光)：流式分析好搭档，细胞周期数据更精准
核心配置与要求：试剂盒以 PI 为荧光染料，激发波长（Ex）536nm，发射波长（Em）617nm，需搭配流式细胞仪检测，检测通道设置为 PI、PerCP、PE。 精准解析细胞周期各时期的细胞比例，是研究细胞增殖活性、药物作用机制、基因功能等领域的关键手段，而基于荧光染色与流式分析的检测方法，因高效、精准成为该领域的主流技术。 检测原理细胞周期检测试剂盒(红色荧光)利用细胞内 DNA 与荧光染料 PI（碘化丙啶）特异性结合的特性，结合流式细胞术实现细胞周期分析。 凋亡细胞检测：细胞凋亡时，细胞核浓缩、DNA 片段化，部分 DNA 片段丢失，导致 PI 染色后呈现弱染，荧光强度小于 1，在流式结果图中形成特征性的 sub-G1 峰（凋亡细胞峰）。
24710编辑于 2025-09-17 - 来自专栏凋亡检测试剂盒推文
活细胞绿染 + 死细胞红染！Elabscience Calcein AM/PI活死细胞双染试剂盒，细胞状态可视化神器
死细胞的红色荧光标记（PI） 碘化丙啶（PI）是一种亲水性核酸染料，无法穿透活细胞完整的细胞膜。 通过 Calcein AM 与 PI 的联合使用，可在同一体系中同时实现活细胞（绿色）与死细胞（红色）的双重染色，结合流式细胞仪（检测通道：FITC、PE/PerCP/Cy5.5）或荧光显微镜（滤光片： 传统活死细胞检测方法（如台盼蓝染色）虽操作简单，但仅能通过细胞形态初步判断，无法实现荧光级别的精准区分与量化分析；单一荧光染色法则难以同时排除死细胞干扰与细胞碎片影响。 四、产品核心优势：高效、稳定、灵活相比同类产品，Calcein AM/PI活死细胞双染试剂盒在性能与使用体验上展现出多重优势，为科研实验提供便利：检测高效，耗时短：整个检测流程仅需 30 分钟，染色后 荧光稳定，抗淬灭性强：Calcein 与 PI 的荧光信号稳定，若需长期培养，染色后避光置于 CO₂培养箱，48 小时内仍可检测；荧光显微镜拍照时，降低光强、增加曝光时间并及时关闭荧光开关，可进一步减少光漂白
66310编辑于 2025-09-23 - 来自专栏生命科学
适用于细胞核、细胞膜、线粒体、细胞骨架的成像的荧光探针推荐 | MedChemExpress
细胞核用碘化丙啶 (红色) 复染。 荧光标记的鬼笔环肽极少会非特异性染色，染色和未染色区域之间的对比度非常大，可使 F-actins 高效染色。 共聚焦显微镜捕获细胞。 蓝色通道，细胞核 Hoechst 染色；红色通道，F-actins 被 Rhodamine Phalloidin 染色；以上通道的组合；白色循环和箭头，扩散的细胞周肌动蛋白纤维。 Di 系列荧光试剂可侧向扩散染色整个细胞，是便捷的细胞轮廓标记物，DiO、DiI、DiD 被激发后分别发出绿色、橙红色、红色荧光。 表 4. 关于细胞染色，小 M 今天就介绍到这里了，小伙伴们有没有 Get 到新技能呢？ 参考文献 1.
98440编辑于 2023-02-23 - 来自专栏生命科学
胞葬作用 (Efferocytosis) ：程序性死亡细胞临终前最后一站 - MedChemExpress
吞噬细胞吞噬垂死细胞后，LAP PI3K 复合物被募集到含有凋亡细胞的LAP相关吞噬体 (LAPosome)，该复合物对 LAPosome 的保持至关重要，并且激活了 LC3 的连接机制。 胞葬的动态追踪 常规的胞葬作用研究是在体外进行，例如使用原代人巨噬细胞和凋亡 Jurkat T 细胞进行免疫荧光染色后，可在显微镜下观察到胞葬作用的过程[3]。 经 Annexin V-mCherry 染色后，正常细胞基本无荧光，凋亡细胞及坏死细胞呈红色荧光。 细胞凋亡与坏死检测试剂盒采用 Hoechst 33342 和碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）双染的方法快速检测细胞凋亡与细胞坏死。
2.4K30编辑于 2022-12-23 - 来自专栏生命科学
铁死亡，究竟该如何检测？- MedChemExpress
因此一般在铁死亡的研究中，检测细胞活力是常见方法，同时也会通过染色等方法来观察细胞膜通透性，线粒体形态等。 同时碘化丙啶(PI) 和 CFDA-SE 染色结果以及用透射电镜观察到的线粒体碎裂、空泡化和嵴增大都表明 FXN 耗竭协同 Erastin 诱导铁死亡[3]。 例如，在研究氧化应激介导的视网膜色素上皮 (RPE) 变性的潜在机制时，通过用 FerroOrange 染色细胞 (亚铁离子探针)，结果表明 NaIO3 和 Erastin 处理的细胞积累了过多的亚铁离子
1.2K30编辑于 2022-12-28 - 来自专栏流式抗体推文
Elabscience 4,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)染色液，精准标记每一个核
内容概要本文聚焦 Elabscience 4',6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸yan(DAPI)染色液（货号为 E-CK-A163） 的 25μg/mL DAPI 染色液，从产品核心信息、技术背景、检测原理 产品介绍Elabscience 4',6 - 二脒基 - 2 - 苯基吲哚二盐酸yan（DAPI）染色液，浓度设定为 25μg/mL，货号为 E-CK-A163。 应用领域基于其优异的染色性能，该 DAPI 染色液可广泛应用于多种科研技术场景：荧光显微术：用于细胞涂片、组织切片等样本的细胞核定位与观察，清晰呈现细胞形态与核结构。 Differentiation of Yunan Black Pig Muscle Satellite Cells (MuSCs) In Vitro via Iron Homeostasis and the PI3K 众多高影响力文献的引用更是印证了其在科研领域的认可度，相信这款 DAPI 染色液将成为科研人员探索生命奥秘过程中的得力助手，为各类细胞学与分子生物学研究赋能。
50710编辑于 2025-09-18 - 来自专栏生命科学
H2DCFDA | ROS 荧光探针检测法
H2DCFDA 工作液的配制 1、储存液的配制：用 DMSO 注：H2DCFDA 储存液建议分装后-20℃ 避光冻存，一个月。-80 半年。 2、工作液的配制：用预热好的无血清细胞培养基或缓冲液 (如 PBS) 稀释储存液，配制终浓度为 5-10 μM 的 H2DCFDA 工作液 (1×)。 用 H2DCFDA 和 细胞壁指示剂 PI 共染色柱头，ROS 位于乳头细胞的细胞质中，靠近质膜外围(图 1C)。 除了上述柱头染色， 还可用于原生质体染色，如图 4 所示，用 H2DCFDA 对原生质体进行染色以检测 ROS 的产生，并通过活细胞成像 (Live-cell imaging) 跟踪整个过程。
1.5K10编辑于 2023-03-10 - 来自专栏技术文章
拒绝非特异干扰！Elabscience 流式辅助试剂让实验结果更可信
在进行样本处理时，可利用红细胞裂解液对样本进行红细胞裂解，避免红细胞干扰实验结果，也可使用Ficoll分离液得到目的细胞。 Fig. 2. 不同处理下淋巴细胞检测结果图（左图未裂红处理，中图经过红细胞裂解液处理，右图经过Ficoll分离液处理）2) T细胞活化与扩增。为了评估T细胞的功能与状态，在检测前通常需要对T细胞进行活化并使其增殖。 染色类试剂1) 染色缓冲液。流式染色缓冲液中含有BSA，能减少抗体或荧光染料与细胞的非特异性结合，也可在离心等步骤中减少细胞间的剪切力，起到保护细胞和降低细胞损失的作用，适合用于胞内流式染色。 （B）4) 核内因子染色。 KitE-CK-A10950 Assays/100 Assays /500 AssaysFoxp3/Transcription Factor Staining KitE-CK-A10820 Assays核染料PI
18610编辑于 2026-01-05 - 来自专栏生信菜鸟团
Nature ecDNA 系列 | 增强转录-复制冲突能够靶向消除含有 ecDNA 的癌症
对细胞生长的抑制是通过诱导细胞死亡实现的，因为在用CHIR-124处理的含有ecDNA的肿瘤细胞中观察到了更快和更高程度的细胞凋亡，这通过末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记（TUNEL；图3e）和PI-Annexin V染色（扩展数据图8f）检测得到。 染色质在4°C下以1,400g离心5分钟，然后在1 ml TE缓冲液加0.1% SDS中重悬，使用Covaris E220进行超声处理，设置如下：140 W，10%占空比，每次脉冲200个循环，每个样本 每份样品使用100 μl蛋白A磁珠，用1 ml预冷的封闭缓冲液（0.5% BSA在PBS中）洗涤三次，然后加入染色质，在抗体过夜孵育后，4°C下旋转4小时。 将 100 微升细胞悬液转移到 FACS 管中，并用 FITC Annexin V 和碘化丙啶染色。
78510编辑于 2024-12-20 - 来自专栏技术文章
选对染料少走弯路，Elabscience 流式死活染色试剂获全球科研认可
相同样本排除死细胞前后结果对比（A组未加死活染料染色，B组加入PI染料进行染色）2. 自发荧光干扰：死细胞会导致背景自发荧光增强，其信号强度甚至可能超过某些荧光素的真实信号。 核酸染料（适用于未固定样本）该方法的原理基于活细胞膜的完整性：活细胞因膜结构保持完整，具有选择透过性，使得PI、7-AAD、DAPI这类核染料无法进入细胞内部，因此不会显现荧光；而死细胞由于膜已破损，染料可进入细胞内并与核酸结合 使用时，在完成流式抗体染色后，于上机前加入核酸染料并进行短暂孵育。 使用时，在流式抗体染色前进行死活细胞染色，清洗后细胞可继续进行固定和破膜操作，且其荧光信号不会丢失。不同样本如何选择？并非所有样本都必须要进行死活染色。根据我们的经验，为您提供以下实操建议：1. 但若不太新鲜或处理不当，仍建议染色。2. 脾脏/淋巴结等组织：样本制备难度相对容易，可根据单细胞悬液的质量决定。若镜下可见较多碎片，建议进行染色。3.
11600编辑于 2025-12-31 - 来自专栏单细胞天地
单细胞测序中小鼠肝脏组织细胞悬液制备流程
解离产率为5000cells/mg，存活率大于等于93%（以AO/PI计数为标准）。 一. 实验试剂及耗材 表1. 在离心管中加入5mL预冷的DPBS，稀释胰蛋白酶混合液，终止消化。 在离心机中使用250g 4℃ 离心5min后，除去上清液； 在离心机中加入4mL预冷的DPBS重悬细胞核组织，在冰上沉淀40s 大组织块沉降（此时释放的细胞留在上清液中）。 将终止消化后的酶及细胞混合物分别通过 70μm和40μm的细胞筛，下清液离心收集细胞。 在4°C下旋转300 g 离心5 min，除去上清液，使用DPBS（含1% BSA）重悬细胞，置于冰上备用。 ，用AO/PI染料染色计数。
3.5K30发布于 2021-10-09
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