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【免疫学实验】抗体标记与显微成像技术全解析
今天，我们就来详细解读几种基于抗体的显微成像技术。 一、 免疫荧光显微成像 利用荧光染料（荧光色素或荧光团）标记抗体本身，或用于检测抗体的抗免疫球蛋白抗体，再用显微镜检测，这种技术称为免疫荧光显微成像。 1. 免疫荧光显微镜：利用不同荧光染料标记的特异性抗体对组织切片进行免疫荧光染色，可实现多靶点定位。 三、 动态追踪：延时视频成像 为了跟踪分子或细胞随时间的运动，我们可以结合使用敏感的数码相机和感光材料的延时视频成像来辅助共聚焦或双光子显微镜技术。 在免疫学中，延时双光子荧光成像具有特别重要的意义。 总结 从基础的免疫荧光到高分辨率的共聚焦，再到活体深层成像的双光子以及超微结构的免疫电镜，抗体作为探针，为我们揭示了生命科学微观世界的无穷奥秘。
23510编辑于 2025-12-29- 来自专栏聊点学术
【附加篇】免疫荧光相关的注意事项
免疫荧光实验原理很简单，其实就是使用荧光二抗，并在荧光显微镜下采集图像，其它的和IHC或ICC区别不大。 ? 可以看出，无论是荧光太强或者太弱，都会造成免疫荧光实验结果差或者失败。绝对消除影响是做不到的，希望大家能认识到这一点。针对这些问题，我们只能尽可能地优化，减弱影响。 ......
2.7K20发布于 2020-12-11 - 来自专栏生信菜鸟团
多重免疫荧光图像分析：QuPath vs CellProfiler
我拿到了一张多色免疫荧光图像，看起来五彩缤纷，不同颜色理论上对应的是不同marker，理想状态下软件能够识别每一个通道。 然而，当我将这张图象导入到分析软件后，我发现它只识别了RGB三原色！！！ 如果您使用的是免疫荧光图像，CaseViewer可能会将不同的荧光标记分别映射到不同的颜色通道（例如，CD11B为红色，LY6G为绿色，CXCR2为蓝色）。
1.9K10编辑于 2025-04-18 - 来自专栏聊点学术
免疫荧光分析误区，别踩雷了！
最近，陆陆续续有多个粉丝朋友在后台咨询关于“免疫荧光”的问题，基本都是在问免疫荧光分析的问题。 ? 问题来了。 “ 免疫荧光到底该不该分析？” 问题3：蛋白免疫荧光适合半定量分析吗？ 答：不适合。免疫荧光染色的关键是荧光二抗，之后在荧光场下进行拍照，留取照片。 表面上看，这个过程与DAB染色后类似，但实际上其中存在相当多的变量，正是这些变量导致免疫荧光染色不适合做半定量分析。 变量①：荧光二抗的质量好坏决定了荧光染色效果。 变量这么多，你还敢对免疫荧光染色进行半定量分析吗？ ? 问题4：为什么WB蛋白条带可以半定量分析，而蛋白免疫荧光却不行呢？ 问题6：既然免疫荧光不适合做半定量分析，那么它到底有什么作用呢？ 答：免疫荧光本质上最适合作为定位分析指标。我们可以通过不同的荧光二抗，在不同的激发光下，在同一张切片上的merge出不同染色效果。
3.5K20发布于 2020-07-21 - 来自专栏生信菜鸟团
空间组学 | 以蛋白质的视角看中心法则的信息流动 | 评论文章
Imaging-based protein-inclusive spatial multi-omics Para_01 荧光激活流式细胞术和免疫荧光成像几十年来一直是单细胞蛋白质测量的金标准。 近年来，包括索引共检（CODEX）、循环免疫荧光（CyCIF）和CosMx空间分子成像仪在内的循环荧光成像方法也达到了相同的多重检测能力，并且同样展示了蛋白质和RNA的共定位。 在这个例子中，同时成像转录本和蛋白质非常重要，因为分泌蛋白通常难以用免疫荧光染色，因此mRNA转录本可以作为替代物来分析天然组织中的空间配体-受体相互作用。 它也与高多重免疫荧光成像兼容。 虽然尚未与空间 DNA、RNA 或代谢物映射结合，但与 MALDI、原位荧光杂交甚至基于 NGS 的空间多组学的整合是可以预见的。 通过高内涵免疫荧光成像和机器学习可以获得亚细胞蛋白质定位图。
31710编辑于 2025-01-10 - 来自专栏计算摄影学
非视线成像-角膜成像系统
我已经向你介绍了利用飞秒摄影技术，以及利用WIFI，来进行非视线成像的方法。今天我将给你再介绍另外一种很震撼的技术：角膜成像系统。 这也就是今天我想介绍的技术——角膜成像系统——的关键思想来源。 哥伦比亚大学的Nishino和 Nayar在2004年发表了论文 The World in an Eye，第一次提出了角膜成像系统。 然后他们详细的分析了角膜成像系统的焦散、分辨率等信息，还展示了一些角膜成像系统的真实应用：捕获场景全景视图、甚至定位人的注视物体等。 折反射成像系统与人眼物理模型 折反射成像系统是一种特殊的成像系统，让我摘录一段Wikipedia的定义： 折反射光学系统是一种将折射和反射结合在一个光学系统中的光学系统，通常通过透镜(屈光镜)和曲面镜( 而角膜成像系统的作者却敏锐的观察到，人眼+对着人眼拍摄的相机，也构成了一个折反射光学系统，只不过此时成像器件和光学反射系统不再是绑定在一起的，当眼球转动时，整个成像系统的光路会相应的发生改变。
78250发布于 2021-11-08 - 来自专栏生信菜鸟团
【QuPath】Multiplexed analysis之多重免疫荧光分析教程
结合自己的图像数据，把官方教程“汉化”一下，加上一些容易被忽略（让我踩了很多坑）的细节，希望能帮到大家~
4.2K10编辑于 2025-06-08 - 来自专栏又见苍岚
机器视觉 —— 成像
本文记录《机器视觉》 第二章图像成像原理相关内容，主要介绍图像是如何产生的。 成像的问题 从三维“世界”到二维图像平面的映射过程，我们将揭示出关于成像的两个核心问题： 是什么决定：物体表面某一点的像（在像平面中）的位置？ 是什么决定：物体表面所成的像的亮度？ 这个亮度模式是如何在一个光学成像系 统中生成的？ 成像域的深度是指：物体能够被聚焦得“足够好”的距离范围，“足够好”是指：模糊光斑的直径小于成像仪器的分辨率。 成像域的深度依赖于我们所使用的传感器，但是，不管我们使用什么样的传感器，都有这样的规律：透镜的直径越大，成像域的深度就越小。同时，我们可以看出：使用大的光圈会增大聚焦误差。
1.9K20编辑于 2022-08-09 - 来自专栏睐芯科技LightSense
成像光学、非成像光学和光学拓展量简介
成像光学成像光学是传统几何光学的核心内容，成像光学系统包括三个部分：物体、透镜和像。 成像光学的主要研究内容就是研究怎样的透镜（或成像系统）使像与物的一致性最高，这里一致性包含拓扑结构、几何比例和光色等方面的一致性。 成像光学的根本任务是利用成像系统实现不失真或尽可能少失真的信息变换或传输。光学成像主要分为三类：小孔成像、镜面成像和透镜成像。 非成像光学系统非成像光学系统按应用可以分为两类：集光系统和配光系统，集光系统应用于太阳能或光电检测中；配光系统主要用于照明设计，尤其是LED 照明设计。1. /上图/是路灯的示意图，a和c是传统照明，b和d是非成像光设计照明。上图是奥迪汽车矩阵前照灯设计。
1.2K10编辑于 2024-07-24 - 来自专栏聊点学术
【原理篇】免疫荧光染色的平均荧光强度
一般来讲，荧光标记染色的目的有3个：①多种蛋白标记后，分析蛋白在空间上的分布特征；②免疫荧光标记后进行蛋白半定量分析，分析蛋白半定量表达量；③标记细胞核，以便分析细胞核数量，如凋亡细胞计数等。 ? 原因在以前就讲过→【回顾：免疫荧光分析误区，别踩雷了！】 如果一定要在荧光图像上进行蛋白半定量分析呢？其实也是有一个测量标准，即测量灰度。 ---- 1、灰度的概念应用 与WB蛋白条带分析原理一致，免疫荧光分析也是围绕灰度进行分析。不同的荧光强度本质上可以理解成灰度值的差异，因为在分析时，我们是在同一通道下进行比较的。 2、通道分割 最简单的免疫荧光标记是DAPI（蓝）+单通道荧光（红或绿）。如下 ? ? 这种是最普通的荧光标记，图像上只有2个通道激发光。在分析之前，必须将2个通道的荧光分割开，获得2张图像。
5K20发布于 2020-11-25 - 来自专栏深度学习和计算机视觉
光学成像 |综述| 高光谱成像技术概述
芯片镀膜 近年来，IMEC（欧洲微电子研究中心）采用高灵敏CCD芯片及SCMOS芯片研制了一种新的高光谱成像技术，在探测器的像元上分别镀不同波段的滤波膜实现高光谱成像，此技术大大降低了高光谱成像的成本。 光源是高光谱成像系统的一个重要部分，它为整个成像系统提供照明；分光设备是高光谱成像系统的核心元件之一，分光设备通过光学元件把宽波长的混合光分散为不同频率的单波长光，并把分散光投射到面阵相机上；相机是高光谱成像系统的另一个核心元件 高光谱的优势 随着高光谱成像的光谱分辨率的提高，其探测能力也有所增强。因此，与全色和多光谱成像相比较，高光谱成像有以下显著优势。 1. 有着近似连续的地物光谱信息。 在高光谱影像中能估计出多种被探测物的状态参量，大大的提高了成像高定量分析的精度和可靠性。 高光谱成像技术应用 1. 医学诊断 高光谱成像是一个新兴的,非破坏性的,先进的光学技术,它具有光谱和成像的双重功能,这种双重功能使得高光谱成像能够同时提供实验对象的化学和物理特征,并具有良好的空间分辨率。
2.2K31发布于 2021-08-06 - 来自专栏囍楽云博客
热成像成像不清楚是什么时候_红外热成像技术竟然可以做这些事情?
红外热成像技术的基本原理 承压君带大家见识一下红外热成像技术。通常我们在一些公共场合中常看到的测温仪： 那么，它靠什么原理呢？ 其实，红外热成像检测的基本原理是捕捉待检测设备发出的红外辐射红外热成像，并形成可见的图像，物体温度越高，红外辐射量越大。不同的温度、不同的物体辐射的红外线的强度不同。 红外热成像技术就是将红外图像转换成辐射图像并从中反映出物体不同部位温度值的技术。其成像的基本原理如图1所示。 红外热成像技术成像原理 待测物体 (A) 辐射的红外能量，经光学镜片 (B) 聚焦于探测器 (C) 上，并引起光电反应，电子装置 (D) 读取该反应，从而将热信号转换成电子图像 (E)，并显示在屏幕上 下次红外热成像，特设观察员继续带你去了解红外热成像技术在压力容器、压力管道方面的应用。 本文共 1032 个字数,平均阅读时长 ≈ 3分钟
51020编辑于 2022-12-29 - 来自专栏深度学习和计算机视觉
相机成像模型分析
当我们理解了相机的成像原理，才能理解图像中的景物与实际世界中景物的对应关系。 ? 相机成像模型 相机模型是光学成像模型的简化，目前有线性模型和非线性模型两种。实际的成像系统是透镜成像的非线性模型。 最基本的透镜成像原理如图所示： ? 其中 u 为物距， f 为焦距，v 为相距。根据透镜成像原理，三者满足关系式： ? 数字相机的镜头相当于一个凸透镜，感光元件就处在这个凸透镜的焦点附近，将焦距近似为凸透镜中心到感光元件的距离时就成为小孔成像模型。小孔成像模型如图所示： ? 基于上图，当s和f相等的时候，便是相机的成像模型。小孔成像模型是相机成像采用最多的模型。在此模型下，物体的空间坐标和图像坐标之间是线性的关系，因而对相机参数的求解就归结到求解线性方程组上。 相机畸变模型 上面推导了相机投影成像的数学模型，但是上面是在理想状况下推导的，实际上由于相机光学系统存在加工和装配的误差，透镜就并不能满足物和像成相似三角形的关系，所以相机图像平面上实际所成的像与理想成像之间会存在畸变
2.6K10发布于 2019-10-24 - 来自专栏雪月清的随笔
数字成像系统概述
本文向你介绍三方面内容：成像系统组成、3A系统概述、ISP概述 成像系统的组成 从成像过程来看，成像系统由如下部分组成： ? 视角 拍照最基本的是视角，这是凸透镜的成像原理，一个物体由无数个点光源组成，单个点光源从各个方向发出光线经透镜折射后都将汇聚在一点上，最终所有点光源都投射在一个平面上，也就是图像传感器的位置，形成清晰的倒像 焦距、物距、像距三者满足高斯成像公式 1/u + 1/v = 1/f 可以看出，焦距越长或传感器越小，视角就越窄 ? 受手机尺寸限制，手机中的相机，像距很短，所以焦距也非常短，通常在4mm左右 ? f值越小就能给图像传感器投射更多的光，提高成像质量，对夜景拍摄特别重要。 感光度 ISO 影响成像质量最核心的还是图像传感器（Sensor）， Image Sensor是一种将光学信号（影像）转换成电子信号的设备，广泛应用在数码相机和其他电子光学设备中。
2.1K21发布于 2020-09-01 - 来自专栏思影科技
大话脑成像之四--浅谈近红外脑功能成像
亚洲舞王尼古拉斯.特斯拉喊你来关注思影科技 今天由思影科技给大家简单（xiao sa）的介绍一下功能近红外成像(fNIRS)。
4.6K100发布于 2018-04-08 - 来自专栏测试GO材料测试
电子通道衬度成像：深入理解成像原理与技巧
电子通道衬度成像：深入理解成像原理与技巧电子通道衬度成像（Electron Channeling Contrast Imaging，简称ECCI）是一种利用电子显微镜技术来观察晶体材料中的缺陷、位错和晶体取向等信息的成像技术 ，从而在成像过程中形成特定的衬度。 高分辨率：电子通道衬度成像具有较高的分辨率，能够清晰地显示晶体内部结构；这使得电子通道衬度成像成为研究晶体材料微观结构的重要工具。3. 无需特殊样品制备：电子通道衬度成像无需特殊样品制备，可直接对晶体材料进行成像。这种简便的操作方式降低了实验难度，提高了实验效率。三、成像技巧1. 电子束剂量控制：电子束剂量对成像结果具有重要影响。过高的电子束剂量会导致样品损伤，影响成像效果；因此，在成像过程中，需要严格控制电子束剂量，确保在获得良好成像的同时，避免样品损伤。3.
61210编辑于 2024-08-26 - 来自专栏囍楽云博客
红外热成像-转：热红外成像光学系统之“冷”
热成像仪是一种红外辐射设备，通过光电转换和电信号处理将物理物体转换为视频图像。热红外成像系统分为制冷型或非制冷。 热成像红外系统中由许多专业名词与冷有关红外热成像，冷光阑、冷屏、冷反射等，刚接触红外光学系统时会产生疑惑，现对这些名词做一些解释。 热成像系统用于观察热源，为获得最大的系统灵敏度，大多数热成像系统使用低温制冷的探测器，探测器通常工作在77 K的液氮温度或更低温度下。 红外系统存在冷反射的问题，即被冷却的探测器在系统中经过各种表面的反射，还有可能成像在像面附件，影响了系统的成像质量，必要时也应该进行冷反射计算。 大多数场合都采用二次成像法来实现100%的冷阑效率——将前置光学系统的孔径光阑再次成像于冷阑平面上。
1.4K30编辑于 2022-12-29 - 来自专栏全栈程序员必看
@Transactional作用(成像原理)
2.1.1、@Import和[@ImportSelector + @ImportBeanDefinitionRegistor ]
1.3K10编辑于 2022-07-29 - 来自专栏生信喵实验柴
空间转录组
再结合免疫荧光，您就能同时观察蛋白质和基因表达。Visium 空间基因表达解决方案将空间转录组学技术轻松融入标准的组织切片以及 H&E 染色或免疫荧光染色方法中。 组织学板块包括样品的包埋、切片、固定、染色及成像，记录切片的形态学信息；组学板块包括 cDNA 的合成、扩增、接头连接和测序，记录切片的转录本信息和空间位置信息。 对新鲜冷冻的组织进行切片，放置在文库制备玻片上进行固定，然后进行 H&E 或免疫荧光染色并成像，接着透化处理释放 mRNA，让其与带有空间条形码的捕获探针结合，以便捕获基因表达信息。 Loupe Browser 能够将基因表达数据与组织学或免疫荧光蛋白数据进行直接比较。从样本到可用于测序的文库，整个流程可在一天内完成。 将 FFPE 组织切片放置在 Visium 基因表达玻片上，并进行组织学成像（通过 H&E 染色获得形态背景，或通过 IF 实现蛋白质共检测）。
4.4K21编辑于 2023-02-24 - 来自专栏又见苍岚
相机成像的几何原理
图片 外参矩阵P定义为： \mathbf{P}=[\mathbf{R} \mid \mathbf{t}] 从相机坐标转换到图像坐标 图像坐标系 上图显示了点 P 在小孔成像相机图像平面上的投影，图像平面放置在距光学中心一定距离 ,y) 可以通过如下计算获取： 图片 矩阵 K 称为内部矩阵，包含相机的内部参数： 图片 相机坐标到图像坐标的转换过程为： 图片 从图像坐标转换到像素坐标 图像坐标系平面可以认为是理想的成像面
1.8K20编辑于 2023-04-16
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